03-110

ChIPAb+ Ago2 - anticorpo per RIP convalidato e set di primer

ascites fluid, from mouse

• Sinonimo/i: Argonaute-2, Eukaryotic translation initiation factor 2C, Slicer protein, Piwi domain protein
• Codice UNSPSC: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.52

Proprietà

• Origine biologica: mouse
• Livello qualitativo: 100
• Forma dell’anticorpo: ascites fluid
• Clone: monoclonal
• Reattività contro le specie: human
• Reattività contro le specie (prevista in base all’omologia): bovine
• Produttore/marchio commerciale: RIPAb+; Upstate^®
• tecniche: RIP: suitable; immunoprecipitation (IP): suitable; western blot: suitable
• Isotipo: IgG1κ
• N° accesso NCBI: NP_001158095.1
• N° accesso UniProt: Q9UKV8
• Condizioni di spedizione: dry ice

Descrizione

Descrizione generale

Ago2 (argonaute-2), nota anche come eukaryotic translation initiation factor 2C (EIF2C2), è una componente essenziale per la risposta RNAi (RNA interference) mediata da siRNA. E′ un'endonucleasi necessaria per lo svolgimento del duplex di siRNA e l'assemblaggio dei siRNA nel complesso silenziatore indotto da RNA (RISC, o RNA-induced silencing complex). Ago2 interagisce con DICER1 attraverso il dominio Piwi. Si ritiene che il dominio Piwi sia responsabile della degradazione dell'RNA tramite un meccanismo simile a quello usato dalla RNasi H. L′attività di Ago2 è necessaria sia per lo sviluppo embrionale che per il silenziamento genico mediato da RNA (RNAi).

Specificità

Riconosce Ago2.

Immunogeno

Peptide sintetico coniugato con KLH contenente la sequenza YSGAGPALAPPAPPPPIQG.

Applicazioni

Immunoprecipitazione delle proteine che legano l′RNA (microRNA):
il lisato per RIP preparato da cellule HeLa (equivalenti a 2 X 10⁷ cellule per IP) è stato sottoposto a immunoprecipitazione utilizzando 5 µL di IgG di topo normale o 5 µL di anticorpo anti-Ago2 e il kit di immunoprecipitazione Magna RIP^® per le proteine che legano l′RNA (N° Cat. 17-700).
La riuscita dell′immunoprecipitazione del microRNA associato ad Ago2 è stata verificata mediante il saggio TaqMan per i microRNA, hsa-miR-23a (vedere le figure).
Per i dettagli sperimentali consultare il protocollo di Magna RIP (N° Cat. 17-700) o di EZ-Magna RIP (N° Cat. 17-701).


Immunoprecipitazione da lisato per RIP:
dati di un lotto rappresentativo.
Il lisato per RIP ottenuto da cellule HeLa (equivalenti a 2 X 10⁶ cellule per IP) è stato sottoposto a immunoprecipitazione usando 0,5 µL di IgG di topo normale o di anticorpo anti-Ago2. Le proteine precipitate (corsia 1: IgG di topo, corsia 2: anti-Ago2) e il lisato totale di cellule HeLa (corsia 3) sono stati risolti mediante elettroforesi, trasferiti su nitrocellulosa e identificati mediante l′anticorpo anti-Ago2 (diluizione 1:5.000).
Le proteine sono state visualizzate mediante un anticorpo secondario di capra anti-topo coniugato con HRP e rivelazione per chemiluminescenza
(vedere le figure).

Categoria di ricerca
Epigenetica & funzione nucleare

Questa pratica combinazione di anticorpo RIPAb+ Ago2 -RIP convalidato & set di primer include l′anticorpo & gli specifici primer di controllo per la PCR.

Sottocategoria di ricerca
Metabolismo dell′RNA & proteine di legame

Proteine che legano l′RNA (RBP)

Confezionamento

10 analisi per set. Uso raccomandato: ~5 μ L dell′anticorpo per ciascuna RIP (a seconda del contesto biologico).

Qualità

Immunoprecipitazione di proteine che legano l′RNA (RIP):
il lisato per RIP preparato da cellule HeLa (equivalenti a 2 X 10⁷ cellule per IP) è stato sottoposto a immunoprecipitazione utilizzando 5 µL di IgG di topo normale o 5 µL di anticorpo anti-Ago2 e il kit di immunoprecipitazione Magna RIP^® per le proteine che legano l′RNA (N° Cat. 17-700).
La riuscita dell′immunoprecipitazione dell′RNA associato ad Ago2 è stata verificata mediante qPCR utilizzando i primer RIP per FOS (vedere le figure).
Per i dettagli sperimentali consultare il protocollo di Magna RIP (N° Cat. 17-700) o di EZ-Magna RIP (N° Cat. 17-701).

Descrizione del bersaglio

100 kDa

Stato fisico

Anticorpo anti-Ago2 (IgG1κ monoclonale di topo). Una microprovetta contenente 50 µL di liquido ascitico con azoturo di sodio allo 0,05%. Conservare a -20 °C.

IgG di topo normale. Una microprovetta contenente 125 μg di IgG di topo purificate in 125 µL di tampone per la conservazione contenente azoturo di sodio allo 0,1%. Conservare a -20°C.

Primer per RIP, FOS. Una microprovetta contenente 75 μL di ciascun primer specifico per il gene FOS umano 5 μM. Conservare a -20 °C.
FOR: GAG AGC TGG TAG TTA GTA GCA TGT TGA
REV: AAT TCC AAT AAT GAA CCC AAT AGA TTA GTT A

Stoccaggio e stabilità

Stabile per 1 anno dalla data di ricevimento a -20°C.
Raccomandazioni per la manipolazione: una volta ricevuto il prodotto, prima di rimuovere il tappo, centrifugare il contenitore e mescolare delicatamente la soluzione. suddividere in aliquote in provette per microcentrifuga e conservare a -20°C. Evitare ripetuti cicli di congelamento e scongelamento per evitare di danneggiare le IgG e di compromettere le prestazioni del prodotto.

Risultati analitici

Controllo
Include un anticorpo di controllo negativo costituito da IgG di topo e primer di controllo specifici per il gene FOS umano.

Note legali

MAGNA RIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Esclusione di responsabilità

Salvo diversa indicazione nel nostro catalogo o in altra documentazione fornita dall′azienda insieme al prodotto, i nostri prodotti sono destinati esclusivamente a scopi di ricerca e non devono essere utilizzati per altre finalità, inclusi a titolo esemplificativo ma non esaustivo, fini commerciali non autorizzati, applicazioni diagnostiche in vitro, usi terapeutici ex vivo o in vivo o qualsiasi altro tipo di assunzione o applicazione rivolta agli esseri umani o agli animali.

Informazioni sulla sicurezza

• Codice della classe di stoccaggio: 10 - Combustible liquids