Duolink Fluorophores vary in intensity. Violet is the strongest with low background. Far red is equally strong but may have higher diffuse background in certain cell types. Refer to attached pictures for visual comparison. When doing multicolor flow cytometry, choose fluorophores with minimal spectral overlap. Reserve brightest fluorophore for lowest expressing signal.
DUO92014
Réactifs de détection in situ Duolink® vert
Synonyme(s) :
in situ Proximity Ligation Assay reagent, Protein Protein Interaction Assay reagent
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About This Item
Code UNSPSC :
12352200
Nomenclature NACRES :
NA.32
Produits recommandés
Gamme de produits
Duolink®
Niveau de qualité
Technique(s)
proximity ligation assay: suitable
Fluorescence
λex 495 nm; λem 527 nm (green) (FITC (Cyanine 2), Zeiss Filter set 38)
Adéquation
suitable for fluorescence
Conditions d'expédition
dry ice
Température de stockage
−20°C
Description générale
Les réactifs de détection in situ Duolink® par fluorescence verte contiennent tous les réactifs in situ Duolink nécessaires à l'amplification et à la détection des sondes PLA® liées. Les sondes de détection contiennent un fluorophore (lex = 495 nm et lem = 527 nm) qui peut être visualisé avec le même filtre que la Cy®2 ou l'isothiocyanate de fluorescéine (FITC). Les expériences menées à l'aide des réactifs in situ Duolink permettent la détection et la visualisation des interactions protéiques, du niveau d'expression des protéines et des modifications post-traductionnelles au niveau monomoléculaire sur des échantillons de tissus et de cellules fixés.
Spécificité
Les réactifs de détection par fluorescence verte sont souvent utilisés avec un filtre FITC.
Application
L'essai de ligature de proximité (Proximity Ligation Assay, PLA®) Duolink® permet la détection endogène des interactions entre protéines, des modifications post-traductionnelles et du niveau d'expression des protéines au niveau monomoléculaire, sur des échantillons de tissus et de cellules fixés.[1][2][3][4]
Caractéristiques et avantages
- Aucune surexpression ou manipulation génétique nécessaire
- Grande spécificité (moins de faux positifs)
- Sensibilité monomoléculaire grâce à l'amplification par cercle roulant
- Possibilité de quantification relative
- Aucun équipement spécifique requis
- Plus rapide et plus simple que la technique FRET
- Plus précis qu'une co-immunoprécipitation
- Résultats prêts à être publiés
Composants
- 5x ligature - contient des oligonucléotides qui s′hybrident aux sondes PLA ainsi que tous les éléments nécessaires à la ligature, hormis la ligase
- 1x ligase (1 unité/μl)
- 1x polymérase (10 unités/μl)
- 5x amplification vert - contient tous les éléments nécessaires à l′amplification par cercle roulant (RCA), hormis la polymérase Contient également des sondes oligonucléotidiques marquées avec un fluorophore qui s′hybride au produit de RCA.
Éléments non inclus dans le kit de détection :
Anticorps primaires, sondes PLA, tampons de lavage, milieu de montage
Notes préparatoires
Pour réaliser une expérience de PLA in situ Duolink® complète, vous avez besoin de deux anticorps primaires (validés par PLA, IHC, ICC ou IF) reconnaissant deux épitopes cibles. Il vous faut également une paire de sondes PLA de deux espèces différentes (une sonde positive et une sonde négative), des réactifs de détection, des tampons de lavage et du milieu de montage. Notez que les anticorps primaires doivent provenir de la même espèce que les sondes PLA Duolink®. L'analyse s'effectue sur un équipement de test d'immunofluorescence standard.
Stockage et stabilité
Stocker les composants à –20 °C. Les enzymes doivent être conservées au froid (–20 °C), sans rupture de la chaîne du froid ; utiliser un bloc de congélation après retrait du congélateur.
Autres remarques
Pour utiliser ce produit, suivez le protocole de fluorescence in situ Duolink®. Des instructions rapides sont également disponibles.
Consultez notre portail d'information sur les essais PLA Duolink® pour en savoir plus sur la réalisation d'une expérience Duolink®, les applications, la résolution des problèmes et bien plus encore.
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Informations légales
Cy is a registered trademark of Cytiva
Duolink is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
PLA is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Mention d'avertissement
Danger
Mentions de danger
Conseils de prudence
Classification des risques
Resp. Sens. 1
Code de la classe de stockage
10 - Combustible liquids
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This page details the Duolink® In Situ Short Protocol for fluorescence detection
This protocol describes how to perform immunofluorescent detection of proteins in cells and tissue.
Ce protocole décrit comment réaliser une détection des protéines par immunofluorescence dans les cellules et les tissus.
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Applications to detect, quantify and visualize protein-protein interactions, post-translational modifications and low expression protein detection using proximity ligation assay
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Is there a variation in the intensity of the fluorophores recommended in the flow kits, where one may appear brighter compared to the others?
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