11277073910
Roche
Mélange de marquage d′ARN à la DIG
sufficient for 20 reactions, solution
Synonyme(s) :
marquage d'acide nucléique
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About This Item
Code UNSPSC :
41105500
Produits recommandés
Forme
solution
Niveau de qualité
Utilisation
sufficient for 20 reactions
Conditionnement
pkg of 40 μL
Fabricant/nom de marque
Roche
Impuretés
Ribonuclease, none detected (up to 20 µl using MSII-RNA)
Couleur
colorless
Solubilité
water: miscible
Température de stockage
−20°C
Description générale
Efficacité du marquage : Environ 10 μg d′ARN de taille complète attendue marqué à la digoxigénine est transcrit à partir de 1 μg d′ADN de matrice linéaire.
Durée de l′essai : 135 minute
Échantillons
ADN de plasmide linéarisé
L′ADN à transcrire est cloné dans le site de clonage multiple d′un vecteur de transcription adapté, qui contient un promoteur de l′ARN polymérase SP6, T7 ou T3 en position adjacente. Pour la transcription des transcrits « run off », le plasmide est linéarisé par une enzyme de restriction. Des enzymes de restriction qui créent des extrémités 5′ sortantes doivent être utilisées ; ne pas utiliser d′extrémités 3′ sortantes. L′ADN de matrice linéarisé doit être purifié par extraction au phénol/chloroforme et précipitation à l′éthanol pour éviter la contamination par une RNase. Pour la transcription « run around », un plasmide circulaire est utilisé comme matrice.
Produit de la PCR :
Les fragments de PCR contenant des séquences de promoteur de l′ARN polymérase peuvent également être utilisés comme matrices pour la transcription. Il est recommandé de purifier les fragments de PCR à l′aide de colonnes HighPure.
Durée de l′essai : 135 minute
Échantillons
ADN de plasmide linéarisé
L′ADN à transcrire est cloné dans le site de clonage multiple d′un vecteur de transcription adapté, qui contient un promoteur de l′ARN polymérase SP6, T7 ou T3 en position adjacente. Pour la transcription des transcrits « run off », le plasmide est linéarisé par une enzyme de restriction. Des enzymes de restriction qui créent des extrémités 5′ sortantes doivent être utilisées ; ne pas utiliser d′extrémités 3′ sortantes. L′ADN de matrice linéarisé doit être purifié par extraction au phénol/chloroforme et précipitation à l′éthanol pour éviter la contamination par une RNase. Pour la transcription « run around », un plasmide circulaire est utilisé comme matrice.
Produit de la PCR :
Les fragments de PCR contenant des séquences de promoteur de l′ARN polymérase peuvent également être utilisés comme matrices pour la transcription. Il est recommandé de purifier les fragments de PCR à l′aide de colonnes HighPure.
Des sondes d′ARN simple brin de taille définie et marquées à la DIG sont générées par transcription in vitro. Le DIG-11-UTP est incorporé par les ARN polymérases SP6, T7 et T3 à un taux d′environ 1 par 20 à 25 nucléotides de transcrit dans les conditions standard. Le mélange de marquage d′ARN à la DIG est spécifiquement conçu pour être utilisé avec les ARN polymérases SP6, T7 et T3, qui sont fournies avec un tampon de transcription optimisé.
Mélange pratique pour marquer l′ARN avec digoxigénine-11-UTP.
Contenu
Solution 10x avec : 10 mM ATP, CTP, GTP (chaque), 6,5 mM UTP, 3,5 mM DIG-11-UTP.
Mélange pratique pour marquer l′ARN avec digoxigénine-11-UTP.
Contenu
Solution 10x avec : 10 mM ATP, CTP, GTP (chaque), 6,5 mM UTP, 3,5 mM DIG-11-UTP.
Spécificité
Inactivation à la chaleur : Arrêter la réaction en ajoutant 2 μl d′EDTA 0,2 M (pH 8,0).
Application
Marquage de l′ARN avec digoxigénine-11-UTP par transcription in vitro à l′aide des ARN polymérases SP6, T7 et T3. L′ARN marqué à la DIG est employé dans diverses techniques d′hybridation :
- Northern blots
- Southern blots
- Dot blots
- Transfert de plages de lyse ou de colonies
- Essais de protection à la RNase
- Chromosomes, cellules et coupes de tissus in situ
Caractéristiques et avantages
Le mélange de marquage d′ARN à la DIG est spécifiquement conçu pour être utilisé avec les ARN polymérases SP6, T7 et T3 de Roche, qui sont fournies avec un tampon de transcription optimisé.
Qualité
Contrôle fonctionnel réalisé avec le kit de marquage d′ARN à la DIG et le kit de détection des acides nucléiques marqués à la DIG.
Autres remarques
Pour la recherche en sciences de la vie uniquement. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.
Mention d'avertissement
Warning
Mentions de danger
Conseils de prudence
Classification des risques
Acute Tox. 4 Oral
Code de la classe de stockage
12 - Non Combustible Liquids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 1
Point d'éclair (°F)
does not flash
Point d'éclair (°C)
does not flash
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