Fragen und Antworten zu Benzonase^® Nuklease

Bei welcher Art von Nukleinsäuren wird Benzonase^® Nuklease eingesetzt? Kann ich es bei der Isolierung von RNA verwenden?

Benzonase^® Nuklease ist eine vielseitige Endonuklease, die alle Formen von DNA und RNA (einzelsträngig, doppelsträngig, linear und zirkulär) angreift und abbaut.

Für welche Zwecke würde ich Benzonase^® Nuklease verwenden wollen?

Zu den Anwendungen gehören: Verringerung der Viskosität zur Erleichterung der Verarbeitung (z. B. Aufreinigung rekombinanter Proteine, viskositätsempfindliche Anwendungen unter Verwendung von Säugerzelllysaten usw.); Verringerung der Verklumpung in gelagerten Proben mononukleärer Zellen des peripheren Bluts (PBMC) vor der Verarbeitung; Vorbereitung von Einschlusskörperchen zur Ermöglichung einer erfolgreichen Protein-Renaturierung und Entfernung negativ geladener Nukleinsäuren aus Proben vor der zweidimensionalen SDS-PAGE.

Wie kann Benzonase^® Nuklease inaktiviert werden? Wie kann sie entfernt werden?

Mit EDTA als Chelatbildner für essentielle Metallionen kann eine reversible Hemmung erreicht werden. Eine irreversible Inaktivierung kann nur unter extremen Bedingungen erreicht werden (100 mM NaOH bei 70 °C über 30 Minuten). Benzonase kann durch Chromatographie vom Zielprodukt getrennt werden. Aufgrund der robusten Natur dieser Endonuklease empfehlen wir jedoch, Benzonase nicht zu verwenden, wenn ein nukleasefreies Endprodukt benötigt wird.

Meine Benzonase^® Nuklease wurde auf dem Labortisch liegen gelassen. Ist sie noch verwendbar?

Wir haben Benzonase-Nuklease umfangreichen Stabilitätstests unterzogen und sind zu dem Schluss gekommen, dass sie äußerst stabil ist. Selbst bei längeren Inkubationszeiten bei 37 °C behielt Benzonase^® Nuklease über mehrere Monate hinweg eine Aktivität von > 90 %.

Ich möchte einen anderen Puffer verwenden. Welche Bedingungen sind für die vollständige Aktivität von Benzonase^® Nuklease unbedingt erforderlich? Wodurch wird die Aktivität verringert?

Für die Aktivität von Benzonase^® Nuklease sind 1-2 mM Mg2+ erforderlich. Benzonase wird durch einwertige Kationenkonzentrationen > 50 %, Phosphatkonzentrationen > 20 mM und Ammoniumsulfatkonzentrationen > 25 mM gehemmt (ca. 50 % Aktivität).

Ist Benzonase^® Nuklease mit Proteaseinhibitor-Cocktails kompatibel?

Ja. Es ist jedoch Vorsicht geboten, da viele Proteaseinhibitor-Cocktails EDTA enthalten. Konzentrationen von mehr als 1 mM EDTA hemmen die Benzonase-Aktivität.

Mein Protein ist nicht löslich und ich muss die Aufreinigung unter denaturierenden Bedingungen durchführen. Wird Benzonase^® Nuclease auch dann noch in Harnstoff funktionieren?

Die Aktivität von Benzonase^® Nuklease nimmt in Gegenwart von Harnstoff in Konzentrationen bis zu 6 M tatsächlich zu. Bei 6 M Harnstoff steigt die Enzymaktivität zunächst an und nimmt dann mit der Zeit ab. Bei 7 M Harnstoff denaturiert die Benzonase-Nuklease nach 15 Minuten und die Aktivität geht verloren. Vor der Inaktivierung kommt es jedoch zu einem erheblichen Abbau der Nukleinsäuren. Höhere Ausgangskonzentrationen der Benzonase-Nuklease können die Auswirkungen von 7 M Harnstoff teilweise ausgleichen.

Warum gibt es so viele Varianten von Benzonase^® Nuklease? Was bedeutet HC? Welche Auswirkungen hat eine Reinheit von 90 % gegenüber 99 %?

Um ein möglichst breites Spektrum von Verarbeitungs- und Kostenanforderungen zu erfüllen, ist Benzonase^® Nuklease in zwei verschiedenen Reinheitsgraden erhältlich: Reinheitsgrad I (> 99 % rein) und Reinheitsgrad II (> 90 % rein). Beide Qualitäten sind in einer Konzentration von 25 U/μl oder in einer hohen Konzentration (HC) von 250 U/μl erhältlich. Bezüglich Bulk-Ware wenden Sie sich bitte an den Anpassungsservice.

Was ist das Endergebnis eines vollständigen Nukleinsäureabbaus durch Benzonase^® Nuklease?

Benzonase^® Nuklease verdaut Nukleinsäuren vollständig zu 5'-Monophosphat-terminierten Oligonukleotiden mit einer Länge von 2-5 Basen.