Kundenspezifische iScale Oligos™

• DNA
• Spezifikationen für Scale-Oligos-DNA
• siRNA
• Spezifikationen für iScale-Oligos-siRNA
• Demonstrierte Anwendung in Vivo
• Zugehörige Produkte
• Literatur

iScale-Oligo-DNA und -siRNA sind kundenspezifisch hergestellte DNA- und siRNA-Oligonukleotide in Milligramm- und Gramm-Mengen für spezielle Anforderungen.

DNA

 

 

Milligramm- und Gramm-Mengen kundenspezifischer DNA-Oligos sind für In-vivo-, Hochdurchsatz- und kommerzielle Projekte bestimmt (biowissenschaftliche Forschungsinstrumente, molekulare Diagnostik und im Labor entwickelte Tests). Für iScale-Mengen von NGS-Adaptern möchten wir Sie auf unser Produkt Next-Gen Sequencing Oligos verweisen.

Produktvorteile

• Verfügbare Mengen zur Deckung Ihres experimentellen und kommerziellen Bedarfs
• Beratung mit unserem wissenschaftlichen Team zur Festlegung der Spezifikationen für Ihre Anwendung
• Hochmodernes Analyselabor, wodurch ein qualitativ hochwertiges Produkt sichergestellt wird

Produktmerkmale

Für alle Belange, die nachstehend mit "Inquire" (Anfragen) gekennzeichnet sind, oder bei spezifischen Anforderungen, die von den anderen dargestellten allgemeinen Spezifikationen abweichen, senden Sie bitte eine Anfrage an dnaoligos@milliporesigma.com.

iScale Oligos DNA-Spezifikationen

Mengen:	10, 25, 50, 100, 250 und 500 mg  1, 2, 5, 10, und 15 g (größere Mengen auf Anfrage)
Aufreinigung	Entsalzen, RP- HPLC und In-vivo-Behandlung
Sequenzlängen	10 bis 55 Basen (größere Längen auf Anfrage)
Modifikationen	6-FAM, Biotin, Phosphat, Amino-Modifikatoren und andere  Verbrückte Nukleinsäure verfügbar  Durchführbarkeit von verbrückten Nukleinsäuren und anderen Modifikationen auf Anfrage
Qualitätskontrolle	100 % Massenspektrometrie  Analytische HPLC-Analyse verfügbar   Analysenzertifikat (CoA)
Format	Wird trocken oder in Lösung in Röhrchen oder Platten geliefert  Pooling, Aliquotierung und Normalisierung erhältlich (Machbarkeit anfragen)
Serviceangebote	Salzaustausch: ersetzt toxische Ammoniumionen aus der Synthese durch physiologisch verträgliche Natriumionen. Für alle Aufreinigungstypen enthalten.    Filtration: minimiert Bakterien, Schimmelpilze und andere Verunreinigungen. Enthalten für die In-vivo-Aufreinigung.    Endotoxin-Test: gewährt, dass gramnegative LPS unter einem akzeptablen Schwellenwert liegt, andernfalls kann der Wirt an einem durch die Immunkaskade veranlassten toxischen Schock sterben. Verfügbar für die In-vivo-Aufreinigung.

Nützliche Anwendungen

• Antisense
• Bindungsstudien
• PCR/qPCR mit hohem Durchsatz
• Sanger-Sequenzierung & NGS (Nicht-Adapter)
• Kristallstrukturbestimmung durch Röntgenbeugung
• Assays zur Immunstimulation
• Microarray-Produktion

Qualitätssicherung

Die Grundlage unserer Herstellungsprozesse ist ein robustes Qualitätsmanagementsystem (QMS), durch das die Einhaltung der folgenden Qualitätsregistrierungen gewährleistet ist:

• ISO 9001:2015 für die Herstellung von Oligonukleotiden in Forschungsqualität
• ISO 13485:2016 für die Herstellung von Oligonukleotiden in diagnostischer Qualität
• ISO 14001:2015 für effektives Umweltmanagement

Diese Qualitätskultur ist in alle Aspekte unserer Geschäftstätigkeit integriert. Zu den Schlüsselkomponenten unseres QMS gehören:

• Analysenzertifikate
• Dokumentenüberwachung
• Änderungsbenachrichtigung
• Lieferantenverwaltung
• Geschäftsvereinbarungen
• Korrektur- und Präventivmaßnahmen

Jede Komponente dient der Qualitätssicherung und zur Überprüfung halten wir routinemäßig strenge Audits ab, die von Registrierungsstellen, internen Stellen und mit Kunden durchgeführt werden.

siRNA

Milligramm- und Gramm-Mengen von MISSION siRNA in In-vivo-Qualität sind für die RNAi-Forschung an Tieren hervorragend geeignet. Wir stellen auch andere Arten von RNA her, darunter miRNA und einzelsträngige RNA.

Produktvorteile

• Geeignet für In-vivo-Anwendungen, einschließlich Zielvalidierung und präklinische Tests
• Verfügbar für MISSION vordefinierte siRNA oder Ihre kundenspezifischen siRNA-Sequenzen
• Geeignet für den direkten Transport oder als wesentlicher Bestandteil Ihrer Formulierungsstrategie

Produktmerkmale

Für alle Belange, die nachstehend mit "Inquire" (Anfragen) gekennzeichnet sind, oder bei spezifischen Anforderungen, die von den anderen dargestellten allgemeinen Spezifikationen abweichen, senden Sie bitte eine Anfrage an sirnarequest@milliporesigma.com.

iScale Oligos siRNA Spezifikationen

Mengen:	•  3, 50 und 100 mg •  Größere Mengen auf Anfrage
Aufreinigung	• Entsalzen, RP- HPLC & In Vivo
Sequenz-Form	• 19 bis 50mer Simplexe oder Duplexe
Modifikationen	• Biotin, Phosphat, Aminmodifizierer (C3, C6, C6 dT, C7, C12), 6-FAM™, Cyanin 3,    Cyanin 5, Cyanin 5.5, 2'-OMe und Phosphorthioat • Verbrückte Nukleinsäuren in allen Ländern mit Ausnahme der Vereinigten Staaten erhältlich • Realisierbarkeit verbrückter Nukleinsäuren und anderer Modifikationen auf Anfrage
Qualitätskontrolle	• 100 % Massenspektrometrie • Analytische HPLC verfügbar  • Analysenzertifikat verfügbar
Format	• Trocken in Röhrchen oder Platten geliefert • Bündelung und Aliquotierung möglich (bitte Realisierbarkeit anfragen)
Dienstleistungen	• Wenn das Oligonukleotid in-vivo verwendet werden soll, werden eine In-Vivo-Aufreinigung und folgende Dienste empfohlen:   - Salzaustausch (Ersetzen toxischer Ammoniumionen aus der Synthese durch physiologisch verträgliche Natriumionen) - Filtration (Minimierung von Bakterien, Schimmelpilzen und anderen Verunreinigungen) - Endotoxintest (stellt sicher, dass gramnegative LPS unter einem akzeptablen Schwellenwert liegen, da der Wirt sonst an einem toxischen Schock sterben kann, der durch eine Immunkaskade ausgelöst wird)

*Je nach Herstellungsort kann PAGE zur Bewertung von siRNA-Duplexen verwendet werden.

Demonstrierte Anwendung in Vivo

Wir haben uns mit Bioo Scientific (jetzt PerkinElmer) zusammengetan, um unsere MISSION siRNA in In-vivo-Qualität zu validieren (siehe Artikel in Drug Discovery & Development - 1. August 2008).

In diesen Versuchen wurden H1155luc-Zellen in NOD/SCID-Mäuse injiziert. Es bildeten sich Tumore, denen Luciferase-spezifische siRNA oder nicht zielgerichtete siRNA in In-vivo-Qualität, formuliert in MaxSuppressor™ In Vivo RNA-LANCEr II, injiziert wurde. Nach 24 Stunden wurde eine D-Luciferin-Lösung injiziert und die Tiere wurden mit dem NightOWL II LB 983-System von Berthold Technologies abgebildet. Tiere, die mit Luciferase-spezifischer siRNA behandelt wurden, zeigten eine signifikante Verringerung der Luciferase-Aktivität, während mit nicht-zielgerichteter siRNA behandelte Tiere eine positive Lumineszenz aufwiesen (Abbildung 1). Diese Daten belegen die Wirksamkeit von siRNA in In-vivo-Qualität, die in MaxSuppressor™ In Vivo RNA-LANCEr II formuliert wird.

Abbildung 1. Mit Luciferase-spezifischer siRNA-behandeltes Tier links; mit nicht zielgerichteter siRNA-behandeltes Tier rechts

72 Stunden nach der Injektion wurden die Tumore entfernt, das Protein extrahiert und mit Hilfe eines Bradford-Assays normalisiert. Die Luciferase-Konzentrationen wurden mit einem Luciferase-ELISA bestimmt. Die Proteinreduktion wird im Vergleich zu einem mit einem nicht zielgerichteten RNAi-Agens behandelten Tier dargestellt. Die Luciferaseaktivität war in den Tumoren um das Zweifache reduziert (Abbildung 2).

Abbildung 2. Jedes Replikat ist eine andere Maus

Wenn Sie zusätzliche Hilfe benötigen, wenden Sie sich bitte an unseren technischen Dienst unter oligotechserv@emdgroup.com.

MISSION ist eine Marke der Merck KGaA, Darmstadt, Deutschland und/oder ihrer Tochterunternehmen. Lizenz-Label.

Literatur

1. Stany MP, Vathipadiekal V, Ozbun L, Stone RL, Mok SC, Xue H, Kagami T, Wang Y, McAlpine JN, Bowtell D, et al. Identification of Novel Therapeutic Targets in Microdissected Clear Cell Ovarian Cancers. PLoS ONE. 6(7):e21121. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0021121

2. Beghin A, Belin S, Hage-Sleiman R, Brunet Manquat S, Goddard S, Tabone E, Jordheim LP, Treilleux I, Poupon M, Diaz J, et al. Correction: ADP Ribosylation Factor Like 2 (Arl2) Regulates Breast Tumor Aggressivity in Immunodeficient Mice. PLoS ONE. 4(11): https://doi.org/10.1371/annotation/b0d43779-c9aa-44fe-a46d-71d7d2bc4a6a

3. Ramachandran V, Arumugam T, Langley R, Hwang RF, Vivas-Mejia P, Sood AK, Lopez-Berestein G, Logsdon CD. The ADMR Receptor Mediates the Effects of Adrenomedullin on Pancreatic Cancer Cells and on Cells of the Tumor Microenvironment. PLoS ONE. 4(10):e7502. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0007502

4. Brahmamdam P, Watanabe E, Unsinger J, Chang KC, Schierding W, Hoekzema AS, Zhou TT, McDonough JS, Holemon H, Heidel JD, et al. 2009. TARGETED DELIVERY OF siRNA TO CELL DEATH PROTEINS IN SEPSIS. 32(2):131-139. https://doi.org/10.1097/shk.0b013e318194bcee

5. Fitamant J, Guenebeaud C, Coissieux M, Guix C, Treilleux I, Scoazec J, Bachelot T, Bernet A, Mehlen P. 2008. Netrin-1 expression confers a selective advantage for tumor cell survival in metastatic breast cancer. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105(12):4850-4855. https://doi.org/10.1073/pnas.0709810105

6. Watabe M, Aoyama K, Nakaki T. 2008. A Dominant Role of GTRAP3-18 in Neuronal Glutathione Synthesis. Journal of Neuroscience. 28(38):9404-9413. https://doi.org/10.1523/jneurosci.3351-08.2008