RPROTK-RO

Proteinase K, rekombinant, PCR-Qualität

Lyophilizate from Pichia pastoris

• EG-Nummer: 3.4.23.1 (BRENDA, IUBMB)
• NACRES: NA.21
• UNSPSC Code: 12352204
• Specific activity: ~2 units/mg protein

Eigenschaften

• form: lyophilized
• specific activity: ~2 units/mg protein
• packaging: pkg of 100 mg (03115879001), pkg of 25 mg (03115836001), pkg of 2 × 250 mg (03115801001), pkg of 4 × 250 mg (03115852001)
• manufacturer/tradename: Roche
• pH range: 4.0-12.5
• storage temp.: 2-8°C

Beschreibung

General description

Ca. 2,0 E/mg Lyophilisat (2,5 E/mg Protein) bei Untersuchung mit dem Chromozym-Assay (entspricht 24 E/mg Lyophilisat [30 E/mg Protein] mit dem Hämoglobin Assay).

Proteinase K ist eine Subtilisin-verwandte Serinprotease.[1] Das rekombinante Enzym ist identisch mit der nativen Protease, die ursprünglich aus dem Schimmelpilz Tritirachium album isoliert wurde. Die Spezifikationen für das rekombinante Enzym sind die gleichen wie die für die native Protease. Die Aminosäurensequenz (Molekulargewicht) und die Molekularstruktur sind identisch. Die rekombinante Zubereitung ist jedoch viel reiner als das native Enzym, da sie frei von DNA ist und die keine ausgeprägte Spaltungsspezifität aufweist. Das Enzym ist bei nativen Proteinen äußerst wirksam und kann daher zur schnellen Inaktivierung endogener Nukleasen wie RNasen und DNasen eingesetzt werden. Das Enzym ist auch als Lösung erhältlich.

• Inhibitoren: Das Enzym wird durch Pefabloc^® SC inaktiviert. Es wird jedoch nicht durch Metallionen, Chelatbildner (z.B. EDTA), Sulfhydrylreagenzien oder Trypsin- und Chymotrypsin-Inhibitoren inaktiviert.
• Aktivatoren: Die Aktivität von Proteinase K wird durch Denaturierungsmittel (SDS und Harnstoff) stimuliert.
• Optimaler pH-Bereich: Proteinase K ist über einen breiten pH-Bereich (4 – 12,5) stabil. Das Enzym bleibt über mehrere Stunden voll aktiv, wenn es bei einem pH zwischen 6,5 und 9,5 inkubiert wird.
• Volumenaktivität:

Ca. 2,5 U/mg Lyophilisat (Chromozym-Assay)
Ca. 30 U/mg Lyophilisat (Hämoglobin-Assay)

Hinweis: SDS kann die Aktivität von Proteinase K bis auf das Siebenfache steigern.

Application

Proteinase K ist eine der aktivsten Endopeptidasen. Diese Proteinase in PCR-Qualität eignet sich besonders gut zur Isolierung von Nukleinsäuren für Amplifikationsreaktionen sowie für folgende Anwendungen:

• Das Enzym ist bei nativen Proteinen äußerst wirksam und kann daher während der Nukleinsäureisolierung zur schnellen Inaktivierung endogener Nukleasen wie RNasen und DNasen eingesetzt werden. Diese Eigenschaft macht Proteinase K besonders geeignet für die Isolierung nativer RNA und DNA aus Geweben oder Zelllinien.[2][3]
• Das Enzym fördert die Zelllyse durch Aktivierung eines bakteriellen, autolytischen Faktors.
• Proteinase K wird auch für die Analyse von Membranstrukturen verwendet, indem Proteine und Glycoproteine auf Zelloberflächen modifiziert werden.
• Da das Enzym auf die Abwesenheit von RNasen und DNasen getestet wird und praktisch DNA-frei ist, eignet es sich besonders gut zur Isolierung von PCR- und RT-PCR-Templates.
• Proteinase K kann außerdem zur Entfernung von Zelltrümmern bei der Vorbereitung von Kolonie-Lifts und zur Behandlung von Gewebeschnitten verwendet werden, um eine effiziente Sondeninfiltration während der In-situ-Hybridisierung sicherzustellen.

Biochem/physiol Actions

Proteinase K ist eine der aktivsten Endopeptidasen und weist keine ausgeprägte Spaltungsspezifität auf. Proteinase K spaltet Proteine wie folgt: X-↓-Y), wobei X = eine aliphatische, aromatische oder hydrophobe Aminosäure und Y = eine beliebige Aminosäure ist. Das Enzym kann Proteinmaterial in freie Aminosäuren abbauen, wenn es für lange Inkubationszeiten in großem Überschuss vorhanden ist.

Features and Benefits

Proteinase K ist eine Serinprotease, die keine ausgeprägte Spaltungsspezifität aufweist. Sie spaltet Proteine zwischen den Aminosäuren X und Y (X-↓-Y), wobei X = eine aliphatische, aromatische oder hydrophobe Aminosäure und Y = eine beliebige Aminosäure ist. Das Enzym ist bei nativen Proteinen äußerst wirksam und kann daher zur schnellen Inaktivierung endogener Nukleasen wie RNasen und DNasen eingesetzt werden.

• Ein effizientes Hilfsmittel zur Herstellung von Templates. Inaktiviert DNasen und RNasen der meisten Spezies.
• Konstant hohe Qualität und gleichbleibende Leistung. Strenge Qualitätstests gewährleisten optimale Stabilität und hohe Leistung von Charge zu Charge.
• Zur Probenvorbereitung über ein breites Spektrum von Bedingungen. Das robuste Enzym ist über einen breiten pH-Bereich stabil und ist für unterschiedliche Anwendungen geeignet.
• Kontaminationsfreies Enzym. Das Enzym wird auf die Abwesenheit von RNasen und DNasen getestet und ist praktisch frei von DNA. Es eignet sich besonders gut für die Isolierung von PCR-Templates.

Hinweis: Das Enzym kann Protein in freie Aminosäuren reduzieren, wenn es für lange Inkubationszeiten in großem Überschuss vorhanden ist.

Inhalt
Proteinase K-Lyophilisat in PCR-Qualität ist auch als Lösung erhältlich.

Preparation Note

Aktivator: Um die Aktivität von Proteinase K zu stimulieren, geben Sie Denaturierungsmittel (SDS und Harnstoff) zu. SDS kann zum Beispiel die Aktivität von Proteinase K im Vergleich zur Aktivität ohne SDS bis auf das Siebenfache steigern.
Arbeitslösung: Um die besten Ergebnisse zu erzielen, lösen Sie Proteinase K, rekombinant, PCR-Qualität, in bidestilliertem Wasser oder Tris-Puffer auf. Der am besten für Proteinase K geeignete Puffer hängt von der jeweiligen Anwendung ab. Folgen Sie stets den pH- und Temperatur-Richtlinien im Parameterfeld. In der Regel ist Proteinase K stabil und sehr aktiv in Puffern, die denaturierende Reagenzien wie Harnstoff, Natriumdodecylsulfat (SDS) und Guanidinium-Salze enthalten.
Lagerbedingungen (Arbeitslösung): -15 bis -25 °C

Rekonstituierung in bidestilliertem Wasser bis auf mindestens 20 mg/ml

Analysis Note

Dieses Produkt ist nach Maßgabe der aktuellen Qualitätskontrollverfahren frei von RNasen, DNasen und DNA.

• Abwesenheit von Nukleasen: Jede Charge wird auf mehreren Substraten getestet, um die Abwesenheit von Endonukleasen, Exonukleasen, Ribonukleasen und Nicking-Aktivität sicherzustellen.
• DNA-Gehalt: = 10 pg/mg Enzym (bestimmt durch den Schwellenwert)
• Keimbelastung: <125 KBE/g (bestimmt durch den strengsten Test aus der Europäischen Pharmakopöe, der die Gesamtzahl der lebensfähigen aeroben Bakterien, Hefen und Pilze bestimmt)

Other Notes

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.
Proteinase K-Lyophilisat in PCR-Qualität ist auch als Lösung erhältlich.

Legal Information

Pefabloc is a registered trademark of Pentapharm

Sicherheitshinweise

• pictograms: GHS07,GHS08
• signalword: Danger
• pcodes: P261 - P264 - P280 - P284 - P304 + P340 + P312 - P342 + P311
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - Skin Sens. 1 - STOT SE 3
• target_organs: Respiratory system
• Lagerklasse: 11 - Combustible Solids
• wgk: WGK 1
• flash_point_f: does not flash
• flash_point_c: does not flash
• hcodes: H315,H317,H319,H334,H335