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D5540

Sigma-Aldrich

Diaphorase from Clostridium kluyveri

lyophilized powder, 3.0-20.0 units/mg protein (biuret)

Synonyme(s) :

Diaphorase, Lipoamide déshydrogénase, Lipoyl déshydrogénase

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About This Item

Numéro CAS:
9001-18-7
Numéro de classification (Commission des enzymes):
1.8.1.4 (BRENDA, IUBMB)
Numéro CE :
232-587-6
Numéro MDL:
MFCD00130947
Code UNSPSC :
12352204
Nomenclature NACRES :
NA.54
Le tarif et la disponibilité ne sont pas disponibles actuellement.

Source biologique

bacterial (Clostridium kluyveri)

Niveau de qualité

200

Forme

lyophilized powder

Activité spécifique

3.0-20.0 units/mg protein (biuret)

Conditions d'expédition

wet ice

Température de stockage

−20°C

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Application

Des plateformes de nanoparticules (PN) de polyacrylamide contenant du bleu de méthylène (BM) ont été testées en solution avec de la diaphorase de Clostridium kluyveri et le cofacteur NADH. Ce test visait à vérifier si l′encapsulation du BM dans des PN pouvait empêcher sa réduction et ainsi protéger son efficacité photodynamique.[1] L′enzyme proposée par Sigma a été utilisée conjointement avec l′aldéhyde déshydrogénase pour construire un biocapteur de l′acétaldéhyde par immobilisation.[2] Elle a également été employée dans la réoxydation du NADP en NADPH. Cette réaction a permis simultanément de catalyser la conversion de la résazurine en résorufine, un composé à forte fluorescence, et de détecter des quantités infinitésimales de NAADP. Le NAADP a d′abord été converti en NADP et NADPH par d′autres enzymes.[3]
La diaphorase de Clostridium kluyveri, ou lipoyl déshydrogénase, a été utilisée dans une étude visant à évaluer les interactions protéine-protéine dans l′assemblage de l′acide lipoïque sur les 2-oxoacide déshydrogénases du métabolisme aérobie. La lipoyl déshydrogénase a également été employée dans une étude destinée à investiguer la régulation redox de la nitration de la tyrosine et de la réduction de la 3-nitrotyrosine par des antioxydants.

Conditionnement

Produit vendu sur la base du nombre d′unités de diaphorase native.

Autres remarques

Le terme « diaphorase » a été improprement attribué à plusieurs enzymes qui catalysent l′oxydation du β-NADH ou du β-NADPH en présence d′un accepteur d'électrons tel que le bleu de méthylène ou le 2,6-dichlorophénolindophénol. De nombreuses unités et de nombreux modes opératoires différents sont utilisés.
Les diaphorases qui sont spécifiques du β-NADH ou du β-NADPH sont connues. L′enzyme de cœur de porc de Straub semble posséder une activité diaphorase native (spécifique au β-NADH) mais aussi des activités lipoïque et lipoamide déshydrogénase. Il s′agirait d′une protéine unique. Toutefois, Massey signale que la « diaphorase » est probablement une lipoamide déshydrogénase dénaturée. Une pré-incubation de la préparation de cœur de porc avec du Cu2+ réduit l′activité de la lipoamide déshydrogénase et augmente proportionnellement l′activité de la diaphorase spécifique au β-NADH. Dans notre laboratoire, nous avons pu mettre en évidence dans une certaine mesure cet effet du cuivre sur l′enzyme de cœur de porc, mais aucun effet notoire n′a été observé sur des préparations de Clostridium kluyveri ou de levure torula. Le rapport lipoamide déshydrogénase/diaphorase permet de mesurer la dénaturation.

Définition de l'unité

Une unité de « diaphorase », ou « lipoyl » déshydrogénase, oxyde 1,0 μmole de β-NADH par minute à pH 7,5 et 25 °C, avec la réduction correspondante du 2,6-dichlorophénolindophénol.

Inhibiteur

Réf. du produit
Description
Tarif

C0400

Carmustine, ≥98%

Code de la classe de stockage

11 - Combustible Solids

Classe de danger pour l'eau (WGK)

WGK 3

Point d'éclair (°F)

Not applicable

Point d'éclair (°C)

Not applicable

Équipement de protection individuelle

Eyeshields, Gloves, type N95 (US)

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Certificats d'analyse (COA)

Lot/Batch Number
0000418419
0000418419
0000401434
0000401433
0000353359

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Questions

  1. I am looking to reconstitute the solid but cannot find any information on what to use for this. Any advice? Thanks.

    1 answer

    1. Prior to being assayed, this enzyme is reconstituted at a concentration of 1 mg/ml in cold 200 mM Tris-HCl buffer containing 294 mM Potassium Chloride, 0.54 mM Riboflavin 5'-monophosphate, and 0.025% (w/v) BSA, pH 7.5.

      (Detailed information could be found in the enzymatic assay(link below):
      https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma/Enzyme_Assay/diaphorase.pdf)

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