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Kit de prolifération cellulaire II (XTT)

liquid, pkg of 1 kit, suitable for cell analysis, suitable for tissue culture

• Synonyme(s) : xtt
• Code UNSPSC : 12352200

Propriétés

• Forme: liquid
• Niveau de qualité: 100
• Utilisation: sufficient for ≤2,500 tests
• Conditionnement: pkg of 1 kit
• Fabricant/nom de marque: Roche
• Conditions de stockage: protect from light
• Technique(s): tissue culture: suitable
• λmax: 450-500 nm
• Application(s): cell analysis; detection
• Méthode de détection: colorimetric
• Température de stockage: −20°C

Description

Description générale

Le kit de prolifération cellulaire II (XTT) est un essai colorimétrique pour la quantification non radioactive de la prolifération et viabilité cellulaires et de la cytotoxicité. Les échantillons adaptés sont des cultures cellulaires adhérentes ou en suspension cultivées dans des microplaques à 96 puits.

Les essais colorimétriques permettent d′évaluer le nombre de cellules viables en vertu du clivage de sels de tétrazolium ajoutés au milieu de culture. Cette méthode ne nécessite pas de laver ni de détacher les cellules et l′ensemble de l′essai, de la culture en microplaques à l′analyse des données par un lecteur ELISA, est réalisé dans une même microplaque.
Plus récemment, le sel de tétrazolium XTT a été décrit. Contrairement au MTT, le XTT est clivé pour former un produit soluble dans l′eau, ce qui évite de devoir réaliser une étape de solubilisation. Le sel de tétrazolium XTT est clivé en formazan par un mécanisme cellulaire complexe. Cette bioréduction se produit uniquement dans les cellules viables, et dépend de la production de NAD(p)H par la glycolyse. Par conséquent, la quantité de colorant formazan formé est en corrélation directe avec le nombre de cellules métaboliquement actives dans la culture.

Application

Le kit de prolifération cellulaire II (XTT) est utilisé pour la quantification spectrophotométrique et non radioactive de la prolifération et de la viabilité cellulaires dans des populations de cellules sous un format de microplaque à 96 puits. Il peut être utilisé pour :

• mesurer la prolifération cellulaire en réponse aux facteurs de croissance, cytokines, mitogènes et nutriments ;
• analyser les composés cytotoxiques et cytostatiques comme les agents anticancéreux et d′autres produits pharmaceutiques ;
• évaluer les anticorps et les médiateurs physiologiques qui inhibent la croissance cellulaire ;
• évaluer la biocompatibilité de divers supports de croissance de cellules osseuses employés en ingénierie ostéo-tissulaire.
• essais de viabilité cellulaire.

Caractéristiques et avantages

• Pratique et sûr : Élimine les isotopes radioactifs, les étapes de lavage et les réactifs supplémentaires.
• Précis : L′absorbance obtenue est en bonne corrélation avec le nombre de cellules.
• Sensible : Permet de détecter de faibles nombres de cellules.
• Rapide : Permet d′évaluer un grand nombre d′échantillons à l′aide d′un lecteur de plaque multi-puits ELISA.

Conditionnement

1 kit constitué de 2 éléments.

Principe

L′essai repose sur le clivage du sel de tétrazolium XTT en présence d′un réactif de couplage d′électrons, produisant un sel soluble de formazan. Cette conversion se produit uniquement dans les cellules viables. Les cellules cultivées dans des plaques de culture à 96 puits sont incubées dans le mélange de marquage XTT pendant 2 à 20 heures. Après cette période d′incubation, le colorant formazan ainsi formé est quantifié à l′aide d′un spectrophotomètre multi-puits à balayage (lecteur pour ELISA). L′absorbance mesurée est en corrélation directe avec le nombre de cellules viables.
Les essais de prolifération et de viabilité cellulaires sont particulièrement importants pour les applications de routine en biologie cellulaire. Les sels de tétrazolium (comme MTT, XTT, WST-1) sont spécialement adaptés à ce type d′analyse. Ils sont clivés pour former du formazan par le système de succinate-tétrazolium réductase (EC 1.3.99.1), qui appartient à la chaîne respiratoire des mitochondries et n′est actif que dans les cellules métaboliquement intactes.

Notes préparatoires

Solution de travail : Préparation des solutions
Décongeler le réactif de marquage XTT et le réactif de couplage d′électrons dans un bain-marie réglé à 37 °C. Mélanger chaque flacon vigoureusement pour obtenir une solution limpide.
Mélange de marquage XTT
Pour réaliser un essai de prolifération cellulaire (XTT) avec une microplaque à 96 puits, mélanger 5 ml de réactif de marquage XTT à 0,1 ml de réactif de couplage d′électrons.
Remarque : Pour obtenir des résultats fiables, décongeler et mélanger le réactif de marquage XTT et le réactif de couplage d′électrons immédiatement avant l′emploi.
Instructions
Cultiver les cellules sur microplaques (qualité culture cellulaire, 96 puits, fond plat) dans un volume final de 100 μl de milieu de culture par puits, selon les besoins des cellules, dans une atmosphère humidifiée (p. ex., 37 °C, 6,5 % CO₂).
La durée d′incubation des cultures cellulaires dépend de l′approche expérimentale et de la lignée cellulaire utilisées dans l′essai. Dans la plupart des cas, une incubation de 24 à 96 heures est adéquate.
À l′issue de la période d′incubation, ajouter 50 μl de mélange de marquage XTT à chaque puits, préparé comme décrit ci-dessus (concentration finale en XTT : 0,3 mg/ml).
Incuber la microplaque pendant 4 à 24 heures dans une atmosphère humidifiée (p. ex., 37 °C, 6,5 % CO₂).
Remarque : la durée d′incubation dépend des conditions expérimentales (p. ex. type cellulaire et concentration). Par conséquent, nous recommandons de mesurer l′absorption tel que décrit à différents intervalles de temps après l′ajout de mélange de marquage XTT (p. ex., 4, 6, 8, 12 et 18 heures), en utilisant une seule microplaque, afin de déterminer la période d′installation optimale dans les conditions expérimentales données.
Conditions de stockage (solution de travail) : Décongeler les réactifs immédiatement avant l′emploi. Il est recommandé de préparer des aliquotes appropriées [5 ml de réactif de marquage XTT et 0,1 ml de réactif de couplage d′électrons sont nécessaires pour réaliser un essai sur une microplaque à 96 puits)]
Remarque : Éviter de congeler et décongeler plusieurs fois.

Autres remarques

Pour la recherche en sciences de la vie uniquement. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.

Composants de kit seuls

• XTT Labeling Reagent
• Electron-coupling Reagent

Informations sur la sécurité

• Code de la classe de stockage: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): nwg
• Point d'éclair (°F): does not flash
• Point d'éclair (°C): does not flash