Concentration de l'urine avec les filtres à centrifuger Amicon^® Ultra

Pouvoir doser avec exactitude certaines protéines dans l'urine est important pour le diagnostic et la prise en charge des maladies. Cependant, la concentration des protéines urinaires est souvent inférieure au seuil de détection des analyses biomédicales. Les dispositifs Amicon^® Ultra de 4 ml avec MWCO de 10 kDa peuvent être utilisés pour concentrer les échantillons d'urine avant de les faire analyser par un laboratoire de biologie médicale.

Méthode

Enrichissement de chaînes légères libres d'immunoglobulines (protéines de Bence-Jones) dans des échantillons d'urine à l'aide de filtres Amicon^® Ultra de 4 ml avec MWCO de 10 kDa.

1. Doser les protéines totales dans un échantillon d'urine de 24 heures.
2. Remplir de 4 ml d'urine un dispositif Amicon^® Ultra de 4 ml.
3. Centrifuger à 3400 × g pendant 30–45 minutes (jusqu'à obtention d'un échantillon concentré de 25–50 µl). Cela permet de multiplier par 160 la concentration de l'échantillon d'origine.
4. Insérer une pointe de pipette au fond de l'unité de filtration et aspirer l'échantillon concentré.
5. Effectuer sur le concentrat une électrophorèse sur gel d'agarose afin de quantifier les chaînes légères et d'identifier les autres protéines. Déterminer le pourcentage des chaînes légères par rapport au nombre total des constituants de l'urine. Puis multiplier le pourcentage des chaînes légères par la concentration en protéines de l'urine de 24 heures (en grammes par volume de 24 heures).
6. Réaliser sur le concentrat une électrophorèse du type immunofixation afin d'identifier les chaînes légères.

Résultats de la séparation électrophorétique de chaînes légères libres d'immunoglobulines (protéines de Bence-Jones) dans des échantillons d'urine concentrés à l'aide de dispositifs de concentration par centrifugation Centricon® (C) et Amicon® Ultra (A). Ces protéines correspondent aux bandes sombres autour de 25 kDa sur chaque piste.

Autres remarques

1. Des immunoglobulines hétérogènes normales peuvent également être observées dans le concentrat d'urine avec l'électrophorèse du type immunofixation. Cet effet "échelle" est constitué de chaînes légères micro-hétérogènes. Il se peut que des protéines de Bence-Jones se trouvent dans cette échelle. Vérifier la présence de protéines de Bence-Jones requiert une analyse complémentaire par électrophorèse bidimensionnelle.
2. En cas d'excès d'antigène, il est nécessaire de diluer le concentrat jusqu'à obtention d'un équilibre entre l'antigène (protéine de Bence-Jones) et l'anticorps.

Produits apparentés

1. Les dispositifs Amicon^® Ultra peuvent aussi servir à concentrer du sérum, du plasma et du liquide cérébrospinal en vue d'analyses similaires. Il est nécessaire d'atteindre une concentration d'environ 20 mg/ml afin de détecter par électrophorèse sur gel d'agarose les chaînes légères libres chez les patients malades. La détection par électrophorèse du type immunofixation est 10 fois plus sensible que par électrophorèse sur gel d'agarose.
2. Des concentrateurs statiques (dispositifs Minicon^®) sont également disponibles pour concentrer la protéine de Bence-Jones dans l'urine.

Remerciements

Les recherches menées dans le cadre de ce protocole pour concentrer l'urine avec des dispositifs Amicon^® Ultra ont été réalisées par Mark Merchant, Ph. D. chez Helena Laboratories, à Beaumont (Texas, États-Unis).

Références bibliographiques

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