HPLC Analysis of Furosemide (Lasix) in Horse Serum on Discovery® C18 after SPE using Discovery® DSC-18
CONDITIONS
sample preparation
SPE (Solid Phase Extraction)
sample/matrix
acidified horse serum spiked with indapamide at 10 mg/mL
SPE tube/cartridge
Discovery DSC-18, 50 mg/1 mL (52601-U)
condition
1 mL methanol; 1 mL 10 mM potassium phosphate, pH 3
sample addition
1 mL
washing
10 mM potassium phosphate, pH 3
elution
1 mL 60% methanol in DI water.
column
Discovery C18, 15 cm x 4.6 mm I.D., 5 μm particles (504955)
mobile phase
[A] 10 mM KH2PO4, pH 3 (adjusted with H3PO4): [B] acetonitrile; (60:40, A:B)
flow rate
1 mL/min
column temp.
35 °C
detector
UV, 234 nm
injection
10 μL
Description
Application
Pré-traitement de l′échantillon:
Le sérum de cheval a été acidifié avec 10μL d′HCl 6M par mL de sérum. Le standard interne a été préparé à partir de sérum de cheval acidifié dopé avec de l′indapamide à 10μg/mL.
Echantillon A : furosemide à 10μg/mL dans le blanc S.I.
Echantillon B : furosemide à 5μg/mL dans le blanc S.I.
Echantillon C : furosemide à 0,5μg/mL dans le blanc S.I.
Echantillon D : furosemide à 0,1μg/mL dans le blanc S.I.
Echantillon E : furosemide à 0,05μg/mL dans le blanc S.I.
Conditionner le tube SPE avec 1mL de méthanol et 1mL de KH2PO4 10mM, pH 3 (ajusté avec H3PO4)
Charger 1mL d′échantillon
Laver avec KH2PO4 10mM, pH 3 (ajusté avec H3PO4)
Eluer avec 1mL de méthanol à 60%
Informations légales
Discovery is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany