Essai des pyrogènes
L'essai des pyrogènes détermine la présence ou l'absence de pyrogènes dans les produits pharmaceutiques et est réglementé par plusieurs normes émanant d'organisations telles que la Food and Drug Administration (FDA), la Pharmacopée américaine (USP) et la Pharmacopée européenne (Ph. Eur.). La stérilité d'un produit n'implique pas qu'il soit exempt de pyrogènes. Par conséquent, des médicaments qui sont censés être stériles doivent également subir un essai des pyrogènes pour éviter des réactions fébriles chez les patients.
Une contamination par des pyrogènes peut se produire lors de la production ou l'administration de produits pharmaceutiques, de produits biothérapeutiques et de dispositifs médicaux, mais la présence de pyrogènes peut également être une caractéristique inhérente au produit, tel que les adjuvants des vaccins ou les lipopeptides de synthèse.
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Services de caractérisation de lignées cellulaires pour confirmer l'espèce d'origine et l'historique de la lignée cellulaire, et pour caractériser et contrôler son identité, sa stabilité génétique et sa pureté (comprenant l'essai des pyrogènes).
Qu'est-ce qu'un pyrogène ?
Un pyrogène est une substance qui provoque une élévation de la température (réaction fébrile) chez l'Homme ou l'animal par l'activation du système immunitaire innée. Les pyrogènes constituent un groupe hétérogène de substances comprenant des substances microbiennes et non microbiennes. Les pyrogènes peuvent être classés en deux groupes : les endotoxines et les pyrogènes de nature non endotoxinique (NEP). Les endotoxines sont des substances que l'on trouve dans les bactéries à Gram négatif. Les pyrogènes non endotoxiniques sont d'autres substances microbiennes, incluant ceux dérivés de bactéries à Gram positif ou de virus et les pyrogènes émanant de levures et de champignons. Les substances pyrogènes non microbiennes peuvent également provenir de particules de caoutchouc, de particules de plastique microscopiques ou de composés métalliques présents dans les élastomères.
Plusieurs méthodes de test sont disponibles pour la détection des pyrogènes. Elles peuvent être classées selon le type de contaminant qu'elles détectent et le recours à des matériaux d'origine animale pour réaliser le test, comme indiqué dans le tableau ci-dessous :
L'essai des pyrogènes sur le lapin
L'essai des pyrogènes sur le lapin (RPT) implique de mesurer une élévation de la température chez des lapins après l'injection intraveineuse du produit à tester. Le RPT donne des résultats qualitatifs et sa sensibilité est assez faible. La reproductibilité du test est également limitée, en raison du développement d'une tolérance aux pyrogènes chez les lapins après des injections répétées ou du stress des lapins lors de la réalisation de l'essai.
Test d'activation des monocytes (MAT)
Le Test d'activation des monocytes (MAT pour Monocyte Activation Test) est une alternative aux méthodes s'appuyant sur les animaux pour la détection des pyrogènes d'origine endotoxinique et non endotoxinique (NEP). Le test d'activation des monocytes reproduit la réaction immunitaire humaine en incubant les monocytes avec l'échantillon à tester. Si des pyrogènes sont présents, des monocytes sont activés et produisent des molécules inflammatoires, les cytokines, responsables de la réaction fébrile. Les cytokines sont ensuite détectées à l'aide d'un dosage immuno-enzymatique (ELISA) impliquant des anticorps spécifiques et une réaction colorée enzymatique.
À noter : La Pharmacopée Européenne (Ph. Eur.) a pris la décision de s'engager sur une voie qui devrait mener au remplacement total de l'essai des pyrogènes chez le lapin (RPT, rabbit pyrogen test) dans la Ph. Eur., dans environ 5 ans.
Lisez l'article et parlez-en avec nos experts pour initier le mouvement.
Tests des endotoxines bactériennes (Test LAL)
La méthode la plus commune pour tester les endotoxines est le test au lysat d'amébocytes de limule (LAL), essai basé sur le lysat d'amébocytes de sang de limule. Le lysat de cellules sanguines de limule réagit naturellement avec les endotoxines bactériennes dans une réaction de coagulation. Cette méthode a une sensibilité élevée pour la détection des endotoxines, mais ne détecte pas les pyrogènes non endotoxiniques.
Tests du facteur C recombinant (rFC)
Le facteur C recombinant est une protéine obtenue par génie génétique normalement rencontrée dans la cascade du lysat d'amébocytes de limule. Dans ce test, le facteur C réagit avec l'endotoxine et se couple à un marqueur pour produire un produit final fluorescent et quantifiable. Le test du facteur C recombinant utilise le même principe que le test LAL, mais sans nécessiter de matériel dérivé d'animaux.
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