Oligonucleotídeos iScale™ personalizados

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• Especificações de oligonucleotídeos Scale de DNA
• siRNA
• Especificações de oligonucleotídeos iScale de siRNA
• Uso in vivo comprovado
• Produtos relacionados
• Referências

Os oligonucleotídeos iScale de DNA e de siRNA são quantidades em miligramas e gramas de oligonucleotídeos de DNA e de siRNA que são fabricados para atender a necessidades especializadas.

DNA

 

 

As quantidades em miligramas e gramas de oligonucleotídeos de DNA personalizados destinam-se a projetos in vivo, de alto rendimento e comerciais (ferramentas de pesquisa em ciências biológicas, diagnósticos moleculares e testes desenvolvidos em laboratório). Para quantidades iScale de adaptadores para sequenciamento de próxima geração (NGS), veja o nosso produto oligonucleotídeos para sequenciamento de próxima geração

Benefícios do produto

• Quantidades disponíveis para atender às suas necessidades experimentais e comerciais
• Consulta com a nossa equipe científica para definir as especificações da sua aplicação
• Laboratório analítico de última geração, garantindo um produto de alta qualidade

Características do produto

Para qualquer um dos itens que contenham a indicação “Consulte” abaixo, ou se você tiver necessidades que diferem das especificações gerais apresentadas aqui, envie uma solicitação para dnaoligos@milliporesigma.com.

Especificações de Oligonucleotídeos iScale de DNA

Quantidades	10, 25, 50, 100, 250 e 500 mg  1, 2, 5, 10, e 15 g (consulte para quantidades maiores)
Purificação	Dessalinização, RP-HPLC e tratamento in vivo
Comprimentos de sequências	10 a 55 bases (consulte para comprimentos maiores)
Modificações	6-FAM, biotina, fosfato, modificadores amino e outros  Ácido nucleico bloqueado disponível  Informe-se sobre a viabilidade do ácido nucleico bloqueado e outras modificações
Controle de qualidade	Espectrometria de massa de 100%  HPLC analítico disponível   Certificado de análise disponível
Formato	Fornecimento na forma seca ou em solução em tubos ou placas  Disponibilidade de agrupamento, separação em alíquotas e normalização disponíveis (consulte para saber a viabilidade)
Serviços	Troca de sal: substitui os íons de amônio tóxicos da síntese por íons de sódio fisiologicamente toleráveis. Incluído para todos os tipos de purificação.    Filtração: minimiza bactérias, mofo e outros contaminantes. Incluído para purificação de tratamento in vivo.    Teste de endotoxina: garante que o LPS gram-negativo esteja abaixo de um limite aceitável, caso contrário, o hospedeiro pode morrer de choque tóxico iniciado pela cascata imunológica. Disponível para purificação de tratamento in vivo.

Aplicações úteis

• Antisense
• Estudos de ligação
• PCR/qPCR de alto rendimento
• Sequenciamento de Sanger e sequenciamento de próxima geração (NGS) (sequências não adaptadoras)
• Determinação de estruturas por cristalografia de raios-X
• Ensaios imunoestimulatórios
• Produção de microarranjos

Garantia de qualidade

No alicerce dos nossos processos de fabricação encontra-se um robusto sistema de gestão de qualidade (SGQ), que impulsiona a conformidade com as nossas certificações de qualidade a seguir:

• ISO 9001 2015 para a fabricação de oligonucleotídeos de grau para pesquisa
• ISO 13485 2016 para a fabricação de oligonucleotídeos de grau para diagnósticos
• ISO 14001:2015 para uma gestão ambiental efetiva

Essa cultura de qualidade integra todos os aspectos do nosso negócio. Os principais componentes do nosso SGQ incluem:

• Certificados de análise
• Controle de documentos
• Notificação de mudanças
• Gerenciamento de fornecedores
• Contratos comerciais
• Ações corretivas e preventivas

Cada componente impulsiona a garantia de qualidade e com frequência realizamos auditorias rigorosas internamente, de arquivistas e de consumidores.

siRNA

As quantidades em miligramas e gramas de siRNA MISSION de qualidade in vivo são superiores para a pesquisa de RNAi em animais. Também fabricamos outros tipos de RNA, incluindo miRNA e RNA de fita simples.

Benefícios do produto

• Adequado para aplicações in vivo, incluindo validação de alvos e testes pré-clínicos
• Disponível para siRNA pré-projetado MISSION ou para as suas sequências personalizadas de siRNA
• Adequado para liberação direta ou como um componente essencial da sua estratégia de formulação

Características do produto

Para qualquer um dos itens que contenham a indicação “Consulte” abaixo, ou se você tiver necessidades que diferem das especificações gerais apresentadas aqui, envie uma solicitação para sirnarequest@milliporesigma.com.

Especificações de Oligonucleotídeos iScale de siRNA

Quantidades	• 3, 50 e 100 mg • Consulte para quantidades maiores
Purificação	• Dessalinização, RP-HPLC e in vivo
Formato de sequências	• Simplexos ou duplexos de 19 a 50mer
Modificações	•  Biotina, fosfato, modificadores amino (C3, C6, C6 dT, C7, C12), 6-FAM™, cianina 3,    cianina 5, cianina 5.5, 2'- OMe e fosforotioato • Disponibilidade de ácidos nucleicos bloqueados em todos os países fora dos Estados Unidos •  Consulte para saber da viabilidade de ácidos nucleicos bloqueados e outras modificações
Controle de qualidade	• 100% espectrometria de massa • Disponibilidade de HPLC analítica  • Disponibilidade de certificado de análise
Formato	• Fornecimento na forma seca em tubos ou placas • Disponibilidade de agrupamento e de separação em alíquotas (consulte para saber a viabilidade)
Serviços	• Se o oligonucleotídeo for para uso in vivo, recomenda-se a purificação de grau in vivo e os seguintes serviços:   - Troca de sais (substitui íons amônio tóxicos provenientes da síntese por íons sódio fisiologicamente toleráveis) - Filtração (minimiza bactérias, bolores e outros contaminantes) - Testes quanto à presença de endotoxinas (garante que o LPS gram-negativo esteja abaixo do limite aceitável,     caso contrário, o hospedeiro pode vir a óbito devido ao choque tóxico iniciado por     uma cascata imunológica)

*Dependendo da unidade de fabricação, pode-se utilizar PAGE para a avaliação de duplexos de siRNA.

Uso in vivo comprovado

Fizemos uma parceria com a Bioo Scientific (atualmente PerkinElmer) para validar o nosso siRNA MISSION de qualidade in vivo (consulte o artigo em Drug Discovery & Development — 1o de Agosto de 2008).

Nesses experimentos, células H1155luc foram injetadas em camundongos NOD/SCID. Houve a formação de tumores que foram injetados com siRNA específicos para a luciferase ou com siRNA não-direcionados de qualidade in vivo formulados em MaxSuppressor™ In Vivo RNA-LANCEr II. Após 24 horas, a solução de D-luciferina foi injetada e as imagens dos animais foram capturadas usando o instrumento NightOWL II LB 983 da Berthold Technologies. Animais tratados com siRNA específicos para luciferase tiveram uma redução significativa da atividade da luciferase enquanto animais tratados com siRNA não-direcionados tiveram luminescência positiva (Figura 1). Esses dados demonstram a efetividade do siRNA de qualidade in vivo formulado no agente de liberação in vivo MaxSuppressor™ In Vivo RNA-LANCEr II.

Figura 1. Animal tratado com siRNA específicos para luciferase à esquerda e animal tratado com siRNA não direcionados à direita

Passadas 72 horas após a injeção, os tumores foram removidos, foi realizada a extração de proteínas e normalização usando um ensaio de Bradford. As concentrações de luciferase foram analisadas usando um ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) para luciferase. A redução da proteína está representada em comparação a um animal tratado com agente RNAi não direcionado. A atividade da luciferase foi reduzida em duas vezes nos tumores (Figura 2).

Figura 2. Cada réplica é um camundongo diferente

Caso precise de mais ajuda, consulte o nosso grupo de assistência técnica em oligotechserv@emdgroup.com.

MISSION é uma marca comercial da Merck KGaA, Darmstadt, Alemanha e/ou suas filiais. Licença do rótulo.

Referências

1. Stany MP, Vathipadiekal V, Ozbun L, Stone RL, Mok SC, Xue H, Kagami T, Wang Y, McAlpine JN, Bowtell D, et al. Identification of Novel Therapeutic Targets in Microdissected Clear Cell Ovarian Cancers. PLoS ONE. 6(7):e21121. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0021121

2. Beghin A, Belin S, Hage-Sleiman R, Brunet Manquat S, Goddard S, Tabone E, Jordheim LP, Treilleux I, Poupon M, Diaz J, et al. Correction: ADP Ribosylation Factor Like 2 (Arl2) Regulates Breast Tumor Aggressivity in Immunodeficient Mice. PLoS ONE. 4(11): https://doi.org/10.1371/annotation/b0d43779-c9aa-44fe-a46d-71d7d2bc4a6a

3. Ramachandran V, Arumugam T, Langley R, Hwang RF, Vivas-Mejia P, Sood AK, Lopez-Berestein G, Logsdon CD. The ADMR Receptor Mediates the Effects of Adrenomedullin on Pancreatic Cancer Cells and on Cells of the Tumor Microenvironment. PLoS ONE. 4(10):e7502. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0007502

4. Brahmamdam P, Watanabe E, Unsinger J, Chang KC, Schierding W, Hoekzema AS, Zhou TT, McDonough JS, Holemon H, Heidel JD, et al. 2009. TARGETED DELIVERY OF siRNA TO CELL DEATH PROTEINS IN SEPSIS. 32(2):131-139. https://doi.org/10.1097/shk.0b013e318194bcee

5. Fitamant J, Guenebeaud C, Coissieux M, Guix C, Treilleux I, Scoazec J, Bachelot T, Bernet A, Mehlen P. 2008. Netrin-1 expression confers a selective advantage for tumor cell survival in metastatic breast cancer. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105(12):4850-4855. https://doi.org/10.1073/pnas.0709810105

6. Watabe M, Aoyama K, Nakaki T. 2008. A Dominant Role of GTRAP3-18 in Neuronal Glutathione Synthesis. Journal of Neuroscience. 28(38):9404-9413. https://doi.org/10.1523/jneurosci.3351-08.2008