Pour la digestion trypsique des peptides, utiliser un rapport trypsine:peptide d'environ 1:100 à 1:20. La trypsine sert généralement à détacher les cellules adhérentes d'une surface de culture. La concentration qui permet de déloger les cellules de leur substrat dépend principalement du type de cellules et de l'âge de la culture. La trypsine a également été utilisée pour remettre des cellules en suspension lors de cultures cellulaires, pour digérer des protéines en recherche protéomique ou pour réaliser diverses digestions sur gel†. Parmi ses autres applications, citons l'analyse de la cristallisation par des techniques à membrane ou une étude visant à établir que le taux de repliement et le rendement des protéines peuvent être limités par la présence de pièges cinétiques.
Actions biochimiques/physiologiques
La trypsine clive les peptides situés du côté C-terminal des résidus lysine et arginine. Cette réaction d'hydrolyse est plus lente lorsqu'un résidu acide se situe d'un côté ou de l'autre du site de clivage, et elle s'interrompt lorsqu'un résidu proline se situe du côté carboxyle du site de clivage. L'activité de la trypsine est optimale à un pH de 7 à 9. La trypsine peut également cliver les liaisons ester et amide de dérivés d'acides aminés de synthèse. On ajoute de l'EDTA aux solutions de trypsine pour servir d'agent chélateur afin de neutraliser les ions calcium et magnésium qui masquent les liaisons peptidiques sur lesquelles la trypsine agit. L'élimination de ces ions augmente l'activité enzymatique.
Les inhibiteurs de protéases à sérine (entre autres, le DFP, la TLCK, l'APMSF, l'AEBSEF et l'aprotinine) inhibent la trypsine.
Définition de l'unité
Une unité de BAEE produit une ΔA253 de 0,001 par minute à pH 7,6 et à 25 °C lorsque le BAEE est utilisé comme substrat. 1 unité de BTEE = 320 unités d'ATEE. Volume réactionnel = 3,2 ml (trajet optique de 1 cm).
1 U corresponds to the amount of enzyme which increases the absorbance at 253 nm by 0.001 per minute at pH 7.6 and 25°C (N-benzoyl-L-arginine ethyl ester, Cat. No. 12880, as substrate)
Changes in the interactions between intestinal cells and their surrounding environment during virus infection have not been well documented. The growth and survival of intestinal epithelial cells, the main targets of rotavirus infection, are largely dependent on the interaction of
The X-ray crystal structure of Streptomyces griseus trypsin has been solved and refined at 1.7-A resolution. The structure of this protein had been predicted in two models on the basis of its expected homology to structures of bovine trypsin and
The Journal of biological chemistry, 288(50), 36141-36148 (2013-10-31)
MCoTI-II is a head-to-tail cyclic peptide with potent trypsin inhibitory activity and, on the basis of its exceptional proteolytic stability, is a valuable template for the design of novel drug leads. Insights into inhibitor dynamics and interactions with biological targets
Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 110(16), 6406-6411 (2013-04-12)
Cells genetically deficient in sphingomyelin synthase-1 (SGMS1) or blocked in their synthesis pharmacologically through exposure to a serine palmitoyltransferase inhibitor (myriocin) show strongly reduced surface display of influenza virus glycoproteins hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA). The transport of HA to
Biochimica et biophysica acta, 1845(1), 1-19 (2013-11-26)
N-myc down-regulated gene 1 (NDRG1) is a known metastasis suppressor in multiple cancers, being also involved in embryogenesis and development, cell growth and differentiation, lipid biosynthesis and myelination, stress responses and immunity. In addition to its primary role as a
Notre équipe de scientifiques dispose d'une expérience dans tous les secteurs de la recherche, notamment en sciences de la vie, science des matériaux, synthèse chimique, chromatographie, analyse et dans de nombreux autres domaines..