COHISR-RO
Roche
Résine de purification His-Tag cOmplete™
suspension, suitable for protein purification, matrix Sepharose-CL 6B
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About This Item
Code UNSPSC :
41116133
Nomenclature NACRES :
NA.21
Produits recommandés
Forme
suspension
Conditionnement
pkg of 200 mL (05893801001 [settled resin volume])
pkg of 25 mL (05893682001 [settled resin volume])
Fabricant/nom de marque
Roche
Technique(s)
protein purification: suitable
Matrice
Sepharose-CL 6B
Température de stockage
2-8°C
Catégories apparentées
Description générale
Dimension des billes : 45 à 165 μM.
Capacité de liaison : ≥ 40 mg de protéine par ml de volume de lit de résine. La capacité de liaison de la résine à divers types de protéines peut dépendre des caractéristiques de la protéine, notamment sa taille. Les colonnes de purification cOmplete His-Tag lient les protéines comportant une étiquette de poly-histidine avec une grande spécificité. Par conséquent, la cinétique de liaison peut sembler différente de celle des matrices à métal chélaté conventionnelles. La capacité maximale des colonnes de purification cOmplete His-Tag peut être obtenue en réduisant le débit lors de la procédure de purification, afin d′augmenter le temps de liaison de la protéine à la résine.
Débit linéaire maximal : 1,420 cm/heure
Débit volumétrique recommandé : Le débit volumétrique dépend de la section transversale de la colonne. La formule suivante peut être utilisée pour convertir un débit linéaire en débit volumétrique (ml/min) : débit linéaire (cm/heure) × section transversale de la colonne (cm2)/60. La section transversale de la colonne est définie comme Π × r2, où Π est la constante pi et r est le rayon interne de la colonne.
Concentration recommandée en imidazole pour les étapes de charge/lavage : les protéines sans étiquette poly-histidine présentent une faible liaison non spécifique à la résine. Il est recommandé d′utiliser jusqu′à 5 mM d′imidazole dans les tampons de charge et/ou de lavage. Lors de la mise au point d′un nouvel essai pour purifier des protéines comportant une étiquette de poly-histidine avec les colonnes de purification cOmplete His-Tag, n′utilisez pas d′imidazole. Si, par exemple, la pureté de la protéine comportant une étiquette de poly-histidine doit être améliorée après la première étape, utilisez de l′imidazole à une concentration finale allant jusqu′à 5 mM dans une deuxième étape.
Concentration recommandée en imidazole pour l′élution : jusqu′à 500 mM. Remarque : par rapport aux autres résines disponibles, les protéines comportant une étiquette de poly-histidine éluent généralement des colonnes de purification cOmplete His-Tag à une concentration plus faible en imidazole, p. ex., de 25 à 45 mM.
Compatibilité pour un stockage à long terme : éthanol à 20 %, pH 4,0 à 9,0.
Compatibilité lors de la chromatographie : la résine est compatible avec 10 mM EDTA, 10 mM DTT au cours de la purification (incubation pendant 1 heure), 6 M guanidinium-HCl, 8 M urée, pH 2,0 à 14,0.
Compatibilité lors du nettoyage : 4 % SDS
Capacité de liaison : ≥ 40 mg de protéine par ml de volume de lit de résine. La capacité de liaison de la résine à divers types de protéines peut dépendre des caractéristiques de la protéine, notamment sa taille. Les colonnes de purification cOmplete His-Tag lient les protéines comportant une étiquette de poly-histidine avec une grande spécificité. Par conséquent, la cinétique de liaison peut sembler différente de celle des matrices à métal chélaté conventionnelles. La capacité maximale des colonnes de purification cOmplete His-Tag peut être obtenue en réduisant le débit lors de la procédure de purification, afin d′augmenter le temps de liaison de la protéine à la résine.
Débit linéaire maximal : 1,420 cm/heure
Débit volumétrique recommandé : Le débit volumétrique dépend de la section transversale de la colonne. La formule suivante peut être utilisée pour convertir un débit linéaire en débit volumétrique (ml/min) : débit linéaire (cm/heure) × section transversale de la colonne (cm2)/60. La section transversale de la colonne est définie comme Π × r2, où Π est la constante pi et r est le rayon interne de la colonne.
Concentration recommandée en imidazole pour les étapes de charge/lavage : les protéines sans étiquette poly-histidine présentent une faible liaison non spécifique à la résine. Il est recommandé d′utiliser jusqu′à 5 mM d′imidazole dans les tampons de charge et/ou de lavage. Lors de la mise au point d′un nouvel essai pour purifier des protéines comportant une étiquette de poly-histidine avec les colonnes de purification cOmplete His-Tag, n′utilisez pas d′imidazole. Si, par exemple, la pureté de la protéine comportant une étiquette de poly-histidine doit être améliorée après la première étape, utilisez de l′imidazole à une concentration finale allant jusqu′à 5 mM dans une deuxième étape.
Concentration recommandée en imidazole pour l′élution : jusqu′à 500 mM. Remarque : par rapport aux autres résines disponibles, les protéines comportant une étiquette de poly-histidine éluent généralement des colonnes de purification cOmplete His-Tag à une concentration plus faible en imidazole, p. ex., de 25 à 45 mM.
Compatibilité pour un stockage à long terme : éthanol à 20 %, pH 4,0 à 9,0.
Compatibilité lors de la chromatographie : la résine est compatible avec 10 mM EDTA, 10 mM DTT au cours de la purification (incubation pendant 1 heure), 6 M guanidinium-HCl, 8 M urée, pH 2,0 à 14,0.
Compatibilité lors du nettoyage : 4 % SDS
La résine de purification His-Tag cOmplete est une matrice de chromatographie d′affinité sur ions métalliques immobilisés (IMAC) innovante et à grande capacité pour la purification des protéines comportant une étiquette de poly-histidine par chromatographie en phase liquide ou procédé discontinu à partir de lysats totaux. Contrairement à toutes les autres résines actuellement disponibles, qui reposent principalement sur des chélateurs NTA ou IDA, cette résine tolère les tampons contenant de l′EDTA. Étant donné que l′EDTA est un inhibiteur des métalloprotéinases, qui sont souvent présentes dans les cellules de tous types, ce support de chromatographie vous permet de protéger davantage la protéine cible en ajoutant de l′EDTA à vos tampons. Par conséquent, cette résine permet une protection supérieure contre la dégradation, tout en enrichissant la préparation en protéine cible à l′aide de la méthode bien établie de purification par affinité.
En outre, la capacité de liaison de cette résine est maintenue indépendamment du poids moléculaire des protéines, et sa spécificité vous permet de réaliser une purification en une seule étape. L′utilisation d′un des chélateurs les plus puissants signifie une contamination minimale par ions métalliques des fractions passant à travers la colonne, ce qui facilite les applications en aval.
La résine de purification His-Tag cOmplete est également disponible en formats préremplis : avec 1 ml ou 5 ml de résine.
En outre, la capacité de liaison de cette résine est maintenue indépendamment du poids moléculaire des protéines, et sa spécificité vous permet de réaliser une purification en une seule étape. L′utilisation d′un des chélateurs les plus puissants signifie une contamination minimale par ions métalliques des fractions passant à travers la colonne, ce qui facilite les applications en aval.
La résine de purification His-Tag cOmplete est également disponible en formats préremplis : avec 1 ml ou 5 ml de résine.
Application
Expression de protéines recombinantes
Il est souvent essentiel de purifier une protéine d′intérêt pour déterminer sa fonction, sa structure ou ses interactions, pour produire des anticorps spécifiques ou pour préparer des enzymes destinées aux applications pratiques. L′isolement de protéines exprimées naturellement depuis leur source d′origine peut être complexe, demandant de nombreuses étapes de chromatographie. L′expression de protéines recombinantes dans des organismes hôtes dédiés peut simplifier énormément cette tâche. Ces systèmes d′expression permettent généralement d′obtenir des taux plus élevés. La fusion de protéines cibles avec une étiquette offre l′avantage d′une liaison possible à une matrice d′affinité.
Purification des protéines à l′aide de Ni2+ immobilisé
La technique la plus courante de purification des protéines par affinité consiste à ajouter une séquence de 6 à 14 histidines à l′extrémité N- ou C-terminale de la protéine, ou même dans une boucle exposée. Ces chaînes de poly-histidine se lient fortement aux ions métalliques divalents comme le nickel et le cobalt. Cette propriété peut être mise à profit pour séparer les protéines. Les ions métalliques peuvent être immobilisés sur une matrice en présence d′un chélateur, qui permet en même temps aux ions d′interagir avec l′étiquette de poly-histidine de la protéine. Lorsque ces protéines à étiquette de poly-histidine sont chargées sur la colonne contenant des ions métalliques immobilisés, elles se lient sur la colonne par leur étiquette. La grande majorité des protéines sans étiquette passent à travers la colonne. La protéine cible est libérée de la colonne par élution avec de l′imidazole, qui entre en compétition avec l′étiquette de poly-histidine pour la liaison sur la colonne, ou en réduisant le pH, ce qui diminue l′affinité de l′étiquette pour la résine. Bien que cette procédure soit généralement utilisée pour la purification de protéines recombinantes avec une étiquette d′affinité ajoutée par clonage, elle peut également être utilisée dans le cas des protéines naturelles contenant une affinité inhérente envers les cations divalents.
Étiquettes His
Idéalement, la protéine cible à étiquette His se lie bien plus fortement à la matrice de Ni2+ chélaté que les protéines endogènes comportant des histidines présentes dans l′hôte d′expression. La force de liaison relative dépend du nombre d′histidines pouvant se lier simultanément à la matrice (effet d′avidité). Les étiquettes His plus longues permettent une liaison plus forte et une meilleure séparation entre la cible et les protéines potentiellement contaminantes de l′hôte. L′étiquette His classique comporte six résidus histidine consécutifs. Les étiquettes contenant 10 à 14 histidines peuvent produire une meilleure purification. Fait important, les protéines à étiquette His peuvent être purifiées sur matrices de Ni2+ chélaté dans des conditions natives ou dénaturantes. Grâce à leur nature hydrophobe et flexible, ces matrices augmentent la solubilité des protéines cibles et n′interfèrent que rarement avec leur fonction. Cette combinaison unique de caractéristiques fait des étiquettes His un outil polyvalent pour un large éventail d′applications de purification des protéines.
Il est souvent essentiel de purifier une protéine d′intérêt pour déterminer sa fonction, sa structure ou ses interactions, pour produire des anticorps spécifiques ou pour préparer des enzymes destinées aux applications pratiques. L′isolement de protéines exprimées naturellement depuis leur source d′origine peut être complexe, demandant de nombreuses étapes de chromatographie. L′expression de protéines recombinantes dans des organismes hôtes dédiés peut simplifier énormément cette tâche. Ces systèmes d′expression permettent généralement d′obtenir des taux plus élevés. La fusion de protéines cibles avec une étiquette offre l′avantage d′une liaison possible à une matrice d′affinité.
Purification des protéines à l′aide de Ni2+ immobilisé
La technique la plus courante de purification des protéines par affinité consiste à ajouter une séquence de 6 à 14 histidines à l′extrémité N- ou C-terminale de la protéine, ou même dans une boucle exposée. Ces chaînes de poly-histidine se lient fortement aux ions métalliques divalents comme le nickel et le cobalt. Cette propriété peut être mise à profit pour séparer les protéines. Les ions métalliques peuvent être immobilisés sur une matrice en présence d′un chélateur, qui permet en même temps aux ions d′interagir avec l′étiquette de poly-histidine de la protéine. Lorsque ces protéines à étiquette de poly-histidine sont chargées sur la colonne contenant des ions métalliques immobilisés, elles se lient sur la colonne par leur étiquette. La grande majorité des protéines sans étiquette passent à travers la colonne. La protéine cible est libérée de la colonne par élution avec de l′imidazole, qui entre en compétition avec l′étiquette de poly-histidine pour la liaison sur la colonne, ou en réduisant le pH, ce qui diminue l′affinité de l′étiquette pour la résine. Bien que cette procédure soit généralement utilisée pour la purification de protéines recombinantes avec une étiquette d′affinité ajoutée par clonage, elle peut également être utilisée dans le cas des protéines naturelles contenant une affinité inhérente envers les cations divalents.
Étiquettes His
Idéalement, la protéine cible à étiquette His se lie bien plus fortement à la matrice de Ni2+ chélaté que les protéines endogènes comportant des histidines présentes dans l′hôte d′expression. La force de liaison relative dépend du nombre d′histidines pouvant se lier simultanément à la matrice (effet d′avidité). Les étiquettes His plus longues permettent une liaison plus forte et une meilleure séparation entre la cible et les protéines potentiellement contaminantes de l′hôte. L′étiquette His classique comporte six résidus histidine consécutifs. Les étiquettes contenant 10 à 14 histidines peuvent produire une meilleure purification. Fait important, les protéines à étiquette His peuvent être purifiées sur matrices de Ni2+ chélaté dans des conditions natives ou dénaturantes. Grâce à leur nature hydrophobe et flexible, ces matrices augmentent la solubilité des protéines cibles et n′interfèrent que rarement avec leur fonction. Cette combinaison unique de caractéristiques fait des étiquettes His un outil polyvalent pour un large éventail d′applications de purification des protéines.
Caractéristiques et avantages
La résine de purification His-Tag cOmplete est la seule résine permettant la purification de grandes quantités de protéine sans compromis.
- Choisissez les tampons les mieux adaptés à votre protéine : prenez soin de votre protéine en sélectionnant les composants du tampon (DTT, EDTA et autres) selon les besoins de la protéine, plutôt que ceux de la résine de purification.
- Obtenez une protéine de grande pureté, à chaque fois : réalisez une purification en une seule étape sans devoir recharger la résine.
- Protégez votre protéine contre la toxicité du nickel : réduisez l′oxydation et l′agrégation des protéines provoquées par les résines qui relarguent du nickel.
- Travaillez dans un environnement sûr et écologique : évitez de manipuler du nickel toxique et éliminez complètement les coûts liés à son élimination.
Forme physique
50 % de résine en suspension, pré-chargée en ions Ni2+
Autres remarques
Pour la recherche en sciences de la vie uniquement. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.
Résine compatible avec l′EDTA pour la purification des protéines comportant une étiquette de poly-histidine.
Informations légales
cOmplete is a trademark of Roche
Mention d'avertissement
Warning-Warning
Mentions de danger
Classification des risques
Flam. Liq. 3
Code de la classe de stockage
3 - Flammable liquids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 1
Point d'éclair (°F)
93.2 °F
Point d'éclair (°C)
34 °C
Certificats d'analyse (COA)
Recherchez un Certificats d'analyse (COA) en saisissant le numéro de lot du produit. Les numéros de lot figurent sur l'étiquette du produit après les mots "Lot" ou "Batch".
Déjà en possession de ce produit ?
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cOmplete™ His-Tag Purification Resin Protocol & Troubleshooting
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