MAB351
Anticorps anti-glutamate décarboxylase, isoforme de 65 kDa, clone GAD-6
clone GAD-6, Chemicon®, from mouse
Synonyme(s) :
GAD65
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About This Item
Code UNSPSC :
12352203
eCl@ss :
32160702
Nomenclature NACRES :
NA.41
Produits recommandés
Source biologique
mouse
Niveau de qualité
Forme d'anticorps
purified immunoglobulin
Type de produit anticorps
primary antibodies
Clone
GAD-6, monoclonal
Espèces réactives
rat, human
Fabricant/nom de marque
Chemicon®
Technique(s)
immunohistochemistry: suitable
western blot: suitable
Isotype
IgG2a
Numéro d'accès NCBI
Numéro d'accès UniProt
Conditions d'expédition
dry ice
Modification post-traductionnelle de la cible
unmodified
Informations sur le gène
human ... GAD2(2572)
Description générale
L'acide glutamique décarboxylase (GAD, n° E.C. 4.1.1.15) est l'enzyme responsable de la conversion de l'acide glutamique en acide gamma-aminobutyrique (GABA), principal transmetteur inhibiteur au sein des régions cérébrales supérieures, et hormone paracrine putative des îlots de Langerhans. Deux formes moléculaires de la GAD (65 kDa et 67 kDa, dont les a. a. sont identiques à 64 %) sont largement conservées, et toutes deux sont exprimées dans le SNC, les cellules des îlots de Langerhans, le testicule, la trompe utérine et l'ovaire. Les isoformes sont réparties régionalement dans le cytoplasme des cerveaux de rat et de souris (Sheikh, S. et al. 1999). La GAD65 est une protéine amphiphile à ancrage membranaire (de 585 a. a.), codée sur le chromosome 10 humain, qui est responsable de la production de GABA au niveau vésiculaire. La GAD67 est une protéine cytoplasmique (de 594 a. a.), codée sur le chromosome 2, qui semble responsable d'une production importante de GABA au niveau cytoplasmique. L'expression de la GAD change au cours du développement nerveux dans la moelle épinière du rat. La GAD65 est exprimée de manière transitoire dans les axones commissuraux autour de E13, mais est régulée à la baisse le lendemain tandis que l'expression de la GAD67 augmente essentiellement dans le soma de ces neurones (Phelps, P. et al. 1999). Dans le pancréas mature du rat, la GAD65 et la GAD67 semblent être localisées à différents endroits, la GAD65 se concentrant principalement dans les cellules bêta contenant de l'insuline et la GAD67 dans les cellules (A) contenant du glucagon (Li, L. et al. 1995). L'expression de la GAD67 semble être particulièrement plastique et peut évoluer en réponse à une manipulation expérimentale (par exemple une stimulation ou une transection neuronale) ou à la progression d'une maladie et à des troubles émergents comme la schizophrénie (Volk et al., 2000). La colocalisation des deux isoformes de la GAD indique également des modifications au niveau de la répartition de la GAD65 et de la GAD67 qui sont corrélées à certains états pathologiques du type DID (diabète insulino-dépendant) ou SMS.
Spécificité
Reconnaît l'isoforme de poids moléculaire le plus bas des deux isoformes de la GAD identifiées dans le cerveau (Gottlieb, et al., 1986 ; Chang and Gottlieb, 1988). Cet anticorps monoclonal peut être utilisé à des fins de localisation immunohistochimique dans le cerveau ou le pancréas. L'anticorps anti-GAD a également été utilisé pour marquer la GAD purifiée lors d'analyses par western blotting (Chang and Gottlieb, 1988).
Immunogène
Acide glutamique décarboxylase purifiée à partir de cerveaux de rat.
Application
Anticorps anti-GAD. L'isoforme de 65 kDa, clone GAD-6, détecte la présence de glutamate décarboxylase, son utilisation a fait l'objet de publications et a été validée en IH et en WB.
Domaine de recherche
Neurosciences
Neurosciences
Immunohistochimie : (1 μg/ml*, voir le protocole)
Western blotting
Il revient à l'utilisateur final de déterminer les dilutions de travail optimales.
NOTES D'APPLICATION POUR LE MAB351
IMMUNOHISTOCHIMIE
1) Perfuser les rats avec un tampon phosphate 100 mM (pH 7,4) contenant 1 % de paraformaldéhyde, 0,34 % de L-lysine et 0,05 % de m-periodate (PLP à 1 %).
2) Post-fixer les cerveaux dans la solution de PLP à 1 % pendant 1 à 2 heures.
3) Transférer les cerveaux dans un tampon phosphate 100 mM contenant 30 % de saccharose et agiter doucement sur un agitateur à plateforme à +4 °C pendant 48 à 60 heures.
4) À l'aide d'un microtome à glissière, débiter des sections de 30 mm de cervelet congelé. Au fur et à mesure que les coupes sont débitées, les placer dans un flacon de tampon phosphate 100 mM froid.
5) Incuber les coupes pendant 30 minutes dans du PBS contenant 1,5 % de sérum normal et 0,2 % de Triton X-100.
6) Sur un agitateur à plateforme, incuber les coupes avec le MAB351 (dilué à 1 µg/ml dans du PBS contenant 1,5 % de sérum normal et 0,2 % de Triton X-100) pendant 12 à 36 heures à +4 °C.
7) Sur un agitateur à plateforme, rincer les coupes huit fois dans du PBS pendant 10 à 15 minutes par rinçage.
8) Procéder à la détection à l'aide d'un système de détection à anticorps secondaire standard (PAP, ABC, etc.).
9) Monter les coupes, les déshydrater et poser les lamelles.
Western blotting
Il revient à l'utilisateur final de déterminer les dilutions de travail optimales.
NOTES D'APPLICATION POUR LE MAB351
IMMUNOHISTOCHIMIE
1) Perfuser les rats avec un tampon phosphate 100 mM (pH 7,4) contenant 1 % de paraformaldéhyde, 0,34 % de L-lysine et 0,05 % de m-periodate (PLP à 1 %).
2) Post-fixer les cerveaux dans la solution de PLP à 1 % pendant 1 à 2 heures.
3) Transférer les cerveaux dans un tampon phosphate 100 mM contenant 30 % de saccharose et agiter doucement sur un agitateur à plateforme à +4 °C pendant 48 à 60 heures.
4) À l'aide d'un microtome à glissière, débiter des sections de 30 mm de cervelet congelé. Au fur et à mesure que les coupes sont débitées, les placer dans un flacon de tampon phosphate 100 mM froid.
5) Incuber les coupes pendant 30 minutes dans du PBS contenant 1,5 % de sérum normal et 0,2 % de Triton X-100.
6) Sur un agitateur à plateforme, incuber les coupes avec le MAB351 (dilué à 1 µg/ml dans du PBS contenant 1,5 % de sérum normal et 0,2 % de Triton X-100) pendant 12 à 36 heures à +4 °C.
7) Sur un agitateur à plateforme, rincer les coupes huit fois dans du PBS pendant 10 à 15 minutes par rinçage.
8) Procéder à la détection à l'aide d'un système de détection à anticorps secondaire standard (PAP, ABC, etc.).
9) Monter les coupes, les déshydrater et poser les lamelles.
Sous-domaine de recherche
Neurotransmetteurs et récepteurs
Neurotransmetteurs et récepteurs
Description de la cible
65 kDa
Forme physique
Format : purifié
Immunoglobuline purifiée. Produit lyophilisé à partir de phosphate de potassium 10 mM, de chlorure de sodium 70 mM, pH 7,4, avec 0,02 % d'azoture de sodium. À reconstituer dans 100 µl d'eau stérile (1 mg/ml).
Produit purifié sur protéine A
Stockage et stabilité
Conserver le produit lyophilisé à -20 °C pendant 12 mois maximum. Après reconstitution, maintenir à -20 °C en aliquotes non diluées pendant 6 mois maximum. Éviter les congélation/décongélation répétées.
Remarque sur l'analyse
Témoin
Tissu cérébral de rat
Lysat de tissus cérébraux humains
Tissu cérébral de rat
Lysat de tissus cérébraux humains
Autres remarques
Concentration : pour connaître la concentration spécifique du lot, voir le certificat d'analyse.
Informations légales
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Clause de non-responsabilité
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Description
Tarif
Mention d'avertissement
Warning
Mentions de danger
Conseils de prudence
Classification des risques
Acute Tox. 4 Dermal - Acute Tox. 4 Inhalation - Acute Tox. 4 Oral - Aquatic Chronic 3
Code de la classe de stockage
13 - Non Combustible Solids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 3
Point d'éclair (°F)
Not applicable
Point d'éclair (°C)
Not applicable
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Testing null
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