IMM001
Kit de dosage de la dégranulation des mastocytes
The Mast Cell Degranulation Assay Kit provides a quick, efficient & sensitive system for evaluation of tryptase activity in culture supernatants, cell lysates or other tryptase-containing samples.
Synonyme(s) :
Live mast cell tryptase assay
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About This Item
Code UNSPSC :
12352207
eCl@ss :
32161000
Nomenclature NACRES :
NA.32
Produits recommandés
Fabricant/nom de marque
Chemicon®
Technique(s)
activity assay: suitable
cell based assay: suitable
Conditions d'expédition
dry ice
Description générale
Introduction
La dégranulation, la sécrétion de granules cytoplasmiques, est une étape clé de la réponse inflammatoire des leucocytes (p. ex., basophiles, neutrophiles, éosinophiles et mastocytes). En plus de l'histamine, ces granules sécrétoires contiennent de nombreux médiateurs pro-inflammatoires, y compris l'héparine, les cytokines, les chimiokines et de nombreuses protéases (Hallgren, 2001). La tryptase, une sérine protéase tétramère, a été identifiée comme étant la composante majeure des granules de mastocytes, représentant jusqu'à 20 % des protéines totales des mastocytes dérivés des tissus pulmonaires, du côlon et de la peau (He, 2004 ; He, 1998 ; Schwartz, 1986). Puisqu'elle est stockée presque exclusivement dans les mastocytes, la tryptase est un indicateur populaire de l'activation des mastocytes et une cible d'intervention thérapeutique dans les maladies allergiques. Le kit de dosage de la dégranulation des mastocytes de Chemicon offre un système sensible, rapide et efficace pour l'évaluation de l'activité de la tryptase dans les lysats cellulaires, les surnageants ou pour le criblage d'inhibiteurs.
Principe du test
Le kit de dosage de la dégranulation des mastocytes de Chemicon offre un système simple et pratique pour le dosage de l'activité de la tryptase. Le dosage est basé sur la détection spectrophotométrique du chromophore p-nitroaniline (pNA) après clivage du substrat marqué tosyl-gly-pro-lys-pNA. La pNA libre peut ensuite être quantifiée à l'aide d'un spectrophotomètre ou d'un lecteur de microplaques à 405 nm. Un standard de pNA est fourni comme contrôle de comparaison.
L'ionophore calcique A23187 (calcimycine) est inclus dans le kit pour l'induction de la dégranulation des échantillons. La calcimycine est un inducteur bien documenté de la libération de la tryptase par les mastocytes humains (2,3).
Un inhibiteur de la tryptase, la protamine, est inclus comme inhibiteur de test à des fins de criblage. La protamine est un puissant antagoniste de l'héparine : elle se lie de façon compétitive à l'héparine, qui est elle-même un facteur stabilisateur essentiel de la tryptase des mastocytes (Hallgren, 2001 ; Schwartz, 1986). Il a été démontré que la protamine inhibe la tryptase chez l'homme et chez la souris (Hallgren, 2001). Le tampon de dosage du kit contient de l'héparine pour la stabilisation de la tryptase.
La dégranulation, la sécrétion de granules cytoplasmiques, est une étape clé de la réponse inflammatoire des leucocytes (p. ex., basophiles, neutrophiles, éosinophiles et mastocytes). En plus de l'histamine, ces granules sécrétoires contiennent de nombreux médiateurs pro-inflammatoires, y compris l'héparine, les cytokines, les chimiokines et de nombreuses protéases (Hallgren, 2001). La tryptase, une sérine protéase tétramère, a été identifiée comme étant la composante majeure des granules de mastocytes, représentant jusqu'à 20 % des protéines totales des mastocytes dérivés des tissus pulmonaires, du côlon et de la peau (He, 2004 ; He, 1998 ; Schwartz, 1986). Puisqu'elle est stockée presque exclusivement dans les mastocytes, la tryptase est un indicateur populaire de l'activation des mastocytes et une cible d'intervention thérapeutique dans les maladies allergiques. Le kit de dosage de la dégranulation des mastocytes de Chemicon offre un système sensible, rapide et efficace pour l'évaluation de l'activité de la tryptase dans les lysats cellulaires, les surnageants ou pour le criblage d'inhibiteurs.
Principe du test
Le kit de dosage de la dégranulation des mastocytes de Chemicon offre un système simple et pratique pour le dosage de l'activité de la tryptase. Le dosage est basé sur la détection spectrophotométrique du chromophore p-nitroaniline (pNA) après clivage du substrat marqué tosyl-gly-pro-lys-pNA. La pNA libre peut ensuite être quantifiée à l'aide d'un spectrophotomètre ou d'un lecteur de microplaques à 405 nm. Un standard de pNA est fourni comme contrôle de comparaison.
L'ionophore calcique A23187 (calcimycine) est inclus dans le kit pour l'induction de la dégranulation des échantillons. La calcimycine est un inducteur bien documenté de la libération de la tryptase par les mastocytes humains (2,3).
Un inhibiteur de la tryptase, la protamine, est inclus comme inhibiteur de test à des fins de criblage. La protamine est un puissant antagoniste de l'héparine : elle se lie de façon compétitive à l'héparine, qui est elle-même un facteur stabilisateur essentiel de la tryptase des mastocytes (Hallgren, 2001 ; Schwartz, 1986). Il a été démontré que la protamine inhibe la tryptase chez l'homme et chez la souris (Hallgren, 2001). Le tampon de dosage du kit contient de l'héparine pour la stabilisation de la tryptase.
Application
Le kit de dosage de la dégranulation des mastocytes offre un système rapide, efficace et sensible pour l'évaluation de l'activité de la tryptase dans les surnageants de culture, les lysats cellulaires ou d'autres échantillons contenant de la tryptase. Ce dosage permet aussi de tester l'enzyme tryptase purifiée, de cribler des inhibiteurs in vitro et d'étudier la dégranulation cellulaire.
Le kit de dosage de la dégranulation des mastocytes de Chemicon est réservé à la recherche. Il ne saurait être utilisé à des fins diagnostiques ou thérapeutiques.
Le kit de dosage de la dégranulation des mastocytes de Chemicon est réservé à la recherche. Il ne saurait être utilisé à des fins diagnostiques ou thérapeutiques.
Le kit de dosage de la dégranulation des mastocytes offre un système sensible, rapide et efficace pour l'évaluation de l'activité de la tryptase dans les surnageants de culture, les lysats cellulaires ou d'autres échantillons contenant de la tryptase.
Composants
Témoin tryptase positif (Réf. 2003650) : 20 µL de solution à 0,1 mg/mL.
Tampon de dosage 5X (Réf. 2003649) : 20 mL contenant 0,1 % d'héparine.
Ionophore calcique A23187 (Réf. 2003652) : 100 µL de solution à 1 mM dans du DMSO.
Inhibiteur de la tryptase (protamine) (Réf. 2003651) : 250 µL de solution à 10 mM.
Substrat de la tryptase (tosyl-gly-pro-lys-pNA) (Réf. 90569) : 3,125 mg.
Standard pNA (Réf. 90085) : 250 µL de solution à 10 mM dans du DMSO.
Tampon de dosage 5X (Réf. 2003649) : 20 mL contenant 0,1 % d'héparine.
Ionophore calcique A23187 (Réf. 2003652) : 100 µL de solution à 1 mM dans du DMSO.
Inhibiteur de la tryptase (protamine) (Réf. 2003651) : 250 µL de solution à 10 mM.
Substrat de la tryptase (tosyl-gly-pro-lys-pNA) (Réf. 90569) : 3,125 mg.
Standard pNA (Réf. 90085) : 250 µL de solution à 10 mM dans du DMSO.
Stockage et stabilité
Conserver les composants du kit (tels que fournis) à -20 °C jusqu'à leur date de péremption. Voir Stockage des réactifs pour les instructions spécifiques aux composants.
Stockage des réactifs
1. Témoin tryptase positif : Décongeler le flacon entre 2 et 8 °C. Répartir en aliquotes et conserver à -20 °C jusqu'à la date de péremption indiquée sur le flacon. Éviter les congélations/décongélations répétées.
2. Tampon de dosage 5X : Diluer le tampon de dosage 5X avec de l'eau distillée. Mélanger jusqu'à obtention d'une solution homogène et conserver entre 2 et 8 °C jusqu'à la date de péremption.
3. Ionophore calcique A23187 : Décongeler le flacon entre 2 et 8 °C. Répartir en aliquotes et conserver à -20 °C jusqu'à la date de péremption indiquée sur le flacon. Éviter les congélations/décongélations répétées.
4. Inhibiteur de tryptase : Décongeler le flacon entre 2 et 8 °C. Répartir en aliquotes et conserver à -20 °C jusqu'à la date de péremption indiquée sur le flacon. Éviter les congélations/décongélations répétées.
5. Substrat de la tryptase : Reconstituer avec 2 mL de tampon de dosage 1X (solution mère à 2,5 mM). Répartir en aliquotes et conserver à -20 °C jusqu'à 3 mois. Éviter les congélations/décongélations répétées.
6. Standard pNA : Décongeler le flacon entre 2 et 8 °C. Répartir en aliquotes et conserver à -20 °C jusqu'à la date de péremption indiquée sur le flacon. Éviter les congélations/décongélations répétées.
Remarque : Le témoin positif, le substrat, le standard pNA et l'ionophore calcique sont sensibles à la lumière ; il est recommandé d'utiliser des flacons ambrés ou un équivalent. Gardez les réactifs à l'abri de la lumière autant que possible pendant leur utilisation et leur stockage.
Stockage des réactifs
1. Témoin tryptase positif : Décongeler le flacon entre 2 et 8 °C. Répartir en aliquotes et conserver à -20 °C jusqu'à la date de péremption indiquée sur le flacon. Éviter les congélations/décongélations répétées.
2. Tampon de dosage 5X : Diluer le tampon de dosage 5X avec de l'eau distillée. Mélanger jusqu'à obtention d'une solution homogène et conserver entre 2 et 8 °C jusqu'à la date de péremption.
3. Ionophore calcique A23187 : Décongeler le flacon entre 2 et 8 °C. Répartir en aliquotes et conserver à -20 °C jusqu'à la date de péremption indiquée sur le flacon. Éviter les congélations/décongélations répétées.
4. Inhibiteur de tryptase : Décongeler le flacon entre 2 et 8 °C. Répartir en aliquotes et conserver à -20 °C jusqu'à la date de péremption indiquée sur le flacon. Éviter les congélations/décongélations répétées.
5. Substrat de la tryptase : Reconstituer avec 2 mL de tampon de dosage 1X (solution mère à 2,5 mM). Répartir en aliquotes et conserver à -20 °C jusqu'à 3 mois. Éviter les congélations/décongélations répétées.
6. Standard pNA : Décongeler le flacon entre 2 et 8 °C. Répartir en aliquotes et conserver à -20 °C jusqu'à la date de péremption indiquée sur le flacon. Éviter les congélations/décongélations répétées.
Remarque : Le témoin positif, le substrat, le standard pNA et l'ionophore calcique sont sensibles à la lumière ; il est recommandé d'utiliser des flacons ambrés ou un équivalent. Gardez les réactifs à l'abri de la lumière autant que possible pendant leur utilisation et leur stockage.
Informations légales
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Clause de non-responsabilité
Sauf indication contraire dans notre catalogue ou toute autre documentation associée au(x) produit(s), nos produits sont uniquement destinés à la recherche et ne sauraient être utilisés à d'autres fins, ce qui inclut, sans s'y limiter, les utilisations commerciales non autorisées, les utilisations diagnostiques in vitro, les utilisations thérapeutiques ex vivo ou in vivo, ou tout type de consommation ou d'application chez l'être humain ou chez l'animal.
Code de la classe de stockage
10 - Combustible liquids
Certificats d'analyse (COA)
Recherchez un Certificats d'analyse (COA) en saisissant le numéro de lot du produit. Les numéros de lot figurent sur l'étiquette du produit après les mots "Lot" ou "Batch".
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