C0773

Collagenase aus Clostridium histolyticum

high purity, purified by chromatography, Type VII, ≥4 FALGPA units/mg solid, lyophilized powder, ≥700 CDU/mg solid (CDU = collagen digestion units)

• Synonym(e): Clostridiopeptidase A
• CAS-Nummer: 9001-12-1
• UNSPSC Code: 12352204
• NACRES: NA.54
• EC Number: 232-582-9
• MDL number: MFCD00130830
• EG-Nummer: 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• Specific activity: ≥4 FALGPA units/mg solid, ≥700 CDU/mg solid (CDU = collagen digestion units)

Eigenschaften

• Quality Segment: 200
• type: Type VII
• form: lyophilized powder
• specific activity: ≥4 FALGPA units/mg solid, ≥700 CDU/mg solid (CDU = collagen digestion units)
• mol wt: 68-130 kDa
• purified by: chromatography
• composition: Protein, ≥85% biuret
• solubility: TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4): soluble 0.05-0.1 mg/mL at 37 °C
• foreign activity: caseinase and clostripain ≤1 units/mg protein
• storage temp.: −20°C

Beschreibung

Application

Kollagenase wird bei der Präparation von Arteriengewebe zur Untersuchung von fortgeschrittenen Glycosylierungsendprodukten (AGE) verwendet. Das Enzym wird zusammen mit anderen Proteasen zur Disaggregation von menschlichem Tumorgewebe, Mäusenieren, menschlichem Hirngewebe, Lungenepithelgewebe und vielen anderen Geweben verwendet. Außerdem ist es in Leber- und Nierenperfusionsstudien, beim Pankreasverdau und bei der Isolierung von nicht-parenchymalen Leberzellen wirkungsvoll.

Biochem/physiol Actions

Collagenase wird durch vier Grammatom Calcium pro Mol Enzym aktiviert. Sie wird durch Ethylenglycol-bis-(beta-aminoethylether)-N, N, N′,N′-tetraessigsäure, β-Mercaptoethanol, Glutathion, Thioglycolsäure und 8-Hydroxychinolin gehemmt.

Eine wirkungsvolle Abgabe von Zellen aus dem Gewebe erfordert die Wirkung sowohl von Kollagenase-Enzymen als auch der neutralen Protease. Collagenase wird durch vier Grammatom Calcium (Ca²⁺) pro Mol Enzym aktiviert. Es wird davon ausgegangen, dass das Kulturfiltrat mindestens 7 verschiedene Proteasen mit einem Molekulargewicht von 68 - 130 kDa enthält. Optimaler pH-Bereich 6,3 – 8,8. Das Enzym erkennt die Sequenz -R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-, wobei X meistens eine neutrale Aminosäure repräsentiert.

Physical form

Lyophilisiertes Pulver, das Calciumchlorid enthält

Preparation Note

Bitte beachten, dass sich das Material nicht vollständig auflöst und geringfügig Sedimente sichtbar sein können. Die Sedimente haben keinen Einfluss auf die Aktivität der Lösung.

Eine Stammlösung kann durch das Auflösen von 0,05 bis 0,1 mg/ml Kollagenase bei 37 °C in 50-mM-TES-Puffer mit 0,36 mM Calciumchlorid (TESCA) und einem pH-Wert von 7,4 hergestellt werden. Kalten Puffer verwenden.

Other Notes

Eine Collagen-Aufschlusseinheit (Collagen Digestion Unit, CDU) setzt Peptide aus Rinder-Achillessehnencollagen entsprechend der Ninhydrin-Anfärbung von 1,0 μmol Leucin in 5 Stunden bei pH 7,4 und 37 °C in Gegenwart von Calciumionen frei. Eine FALGPA-Hydrolyseeinheit hydrolysiert 1,0 μmol Furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala pro Minute bei 25 °C. Eine neutrale Protease-Einheit hydrolysiert die Caseinmenge, die eine Färbung entsprechend 1,0 μmol Tyrosin pro 5 Stunden bei pH 7,5 und 37 °C produziert. Eine Clostripain-Einheit hydrolysiert 1,0 μmol BAEE pro Minute bei pH 7,6 und 25 °C in Gegenwart von DTT.

Sicherheitshinweise

• pictograms: GHS08,GHS07
• signalword: Danger
• hcodes: H315,H319,H334,H335
• pcodes: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• target_organs: Respiratory system
• Lagerklasse: 11 - Combustible Solids
• wgk: WGK 1
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable
• ppe: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves