C0130

Collagenase aus Clostridium histolyticum

for general use, Type I, ≥125 CDU/mg solid

• Synonym(e): Clostridiopeptidase A
• CAS-Nummer: 9001-12-1
• UNSPSC Code: 12352204
• NACRES: NA.54
• EC Number: 232-582-9
• MDL number: MFCD00130830
• EG-Nummer: 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• Specific activity: ≥125 CDU/mg solid

Eigenschaften

• form: lyophilized powder
• specific activity: ≥125 CDU/mg solid
• mol wt: 68,000 to 125,000
• optimum pH: 6.3-8.8
• solubility: TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4): soluble 1-2 mg/mL at 37 °C
• storage temp.: 2-8°C

Beschreibung

General description

Collagenase ist eine Protease, die das Dreifachhelix-Protein Collagen spaltet. Es gibt drei Arten von Gewebecollagenasen, die zur Familie der Matrix-Metallproteinasen (MMP) gehören.[1] Collagenase aus Clostridium histolyticum besitzt eine sehr starke Aktivität, da sie Collagen bei Temperaturen von nur 4-10 °C von beiden Enden her verdaut.[2] Rohcollagenasemischungen enthalten zwei wesentliche Enzymtypen, nämlich Collagenase und Clostripain.[3]

Application

Collagenase aus Clostridium histolyticum wird verbreitet in biologischen Studien zur Präparation isolierter Zellsuspensionen verwendet.[3] Dieses Produkt eignet sich für die Disaggregation von menschlichem Tumorgewebe, Mäusenieren, menschlichem adulten und fötalen Hirngewebe, Lungenepithel und vielen anderen Geweben. Es ist ebenfalls bei Leber- und Nierenperfusionsstudien, beim Pankreasverdau, bei der Isolierung von nicht-parenchymalen Rattenleberzellen und der Hepatozytenpräparation wirksam. Collagenase wird bei der Präparation von Arteriengewebe zur Untersuchung von fortgeschrittenen Glycosylierungsendprodukten (AGE) verwendet. Dieses Enzym wurde für die Freisetzung von Hepatozyten bei einer Konzentration von ca. 1 mg/ml getestet. Konzentrationen für den Verdau liegen zwischen 0,1 und 5 mg/ml.

Biochem/physiol Actions

Collagenase wird durch vier Grammatom Calcium pro Mol Enzym aktiviert. Sie wird durch Ethylenglycol-bis-(beta-aminoethylether)-N, N, N′,N′-tetraessigsäure, β-Mercaptoethanol, Glutathion, Thioglycolsäure und 8-Hydroxychinolin gehemmt.

Das Collagenaseprodukt ist ein Enzymgemisch, das von C. histolyticum sezerniert wird, wobei unterschiedliche Produkte durch die relativen Verhältnisse der 10-18 Komponenten in den sezernierten Enzymen differenziert werden. Die Hauptkomponenten sind zwei Collagenasen: Clostripain und eine neutrale Protease. Die synergistische Aktion dieser Enzyme baut Collagen und andere intrazelluläre Komponenten ab. Die Aktion von Collagenase-Enzymen sowie der neutralen Protease ist für eine effektive Freisetzung von Zellen aus Gewebe erforderlich. Verschiedene Arten von Collagen sind die natürlichen Substrate für Collagenase.

Preparation Note

Dieses Produkt entspricht der ersten 40%igen Ammoniumsulfat=Fraktion von Mandl, I., et al., J. Clin. Invest., 32, 1323 (1953). Lösungen werden üblicherweise zu 1-2 mg/ml in TESCA-Puffer hergestellt (mit 50 mM TES, 0,36 mM Calciumchlorid, pH-Wert 7,4 bei 37 °C.

Other Notes

Eine Collagen-Aufschlusseinheit (Collagen Digestion Unit, CDU) setzt Peptide aus Rinder-Achillessehnencollagen entsprechend der Ninhydrin-Anfärbung von 1,0 μmol Leucin in 5 Stunden bei pH 7,4 und 37 °C in Gegenwart von Calciumionen frei. Eine FALGPA-Hydrolyseeinheit hydrolysiert 1,0 μmol Furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala pro Minute bei 25 °C. Eine neutrale Protease-Einheit hydrolysiert die Caseinmenge, die eine Färbung entsprechend 1,0 μmol Tyrosin pro 5 Stunden bei pH 7,5 und 37 °C produziert. Eine Clostripain-Einheit hydrolysiert 1,0 μmol BAEE pro Minute bei pH 7,6 und 25 °C in Gegenwart von DTT.

Disclaimer

Das Produkt ist im Lieferzustand bei 2–8 °C ein Jahr stabil. Bei 37 °C, 50 °C und –20 °C kommt es innerhalb von 30 Tagen zu keinem Verlust der FALGPA- oder Proteaseaktivität. Lösungen von Rohkollagenase sind stabil, wenn sie schnell in Aliquots (10 mg/ml) bei –20 °C eingefroren und aufbewahrt werden. Weitere Einfrier-/Auftauzyklen beeinträchtigen die Qualität der Lösung. Bei Lagerung auf Eis behält das Produkt seine gesamte Aktivität über 7 Stunden.

Sicherheitshinweise

• pictograms: GHS08,GHS07
• signalword: Danger
• hcodes: H315,H319,H334,H335
• pcodes: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• target_organs: Respiratory system
• Lagerklasse: 11 - Combustible Solids
• wgk: WGK 1
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable
• ppe: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves