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KAPA Maus-Genotypisierungskit

• Synonym(e): Genotypisierung
• NACRES: NA.55
• UNSPSC Code: 41106300

Eigenschaften

• usage: sufficient for 100 reactions (KK7301), sufficient for 500 reactions (KK7302)
• shelf life: ≤18 mo.
• feature: dNTPs included, hotstart: no
• manufacturer/tradename: Roche
• technique(s): PCR: suitable, genotyping: suitable
• input: crude DNA
• storage temp.: −20°C

Beschreibung

General description

KAPA Maus-Genotypisierungskits beinhalten KAPA Express Extrakt, ein neues thermostabiles Protease- und Puffersystem, das die Extraktion von PCR-bereiter DNA aus Mausgewebe in nur 15 Minuten ermöglicht, sowie KAPA2G Fast Genotypisierungsmix mit Farbstoff, der eine DNA-Polymerase enthält, die durch gerichtete Evolution für hohe Verarbeitbarkeit und Geschwindigkeit optimiert wurde. Die Kombination aus KAPA Express Extrakt und KAPA2G Fast Genotypisierungsmix ermöglicht eine zuverlässige Extraktion und Amplifikation von DNA-Fragmenten aus Mausgewebe in nur einer Stunde. Herkömmliche Verfahren brauchen dagegen mehr als einen Tag. KAPA2G Fast Genotypisierungsmix (2X) ist ein gebrauchsfertiger Master-Mix, der mit Ausnahme von Primern und Templates alle Komponenten für eine schnelle PCR enthält.

Application

Das KAPA Maus-Genotypisierungskit wird zur Extraktion und Amplifikation von murinem Schwanz-,[1][2], Ohr-[3] und Zehengewebe verwendet. Das Kit eignet sich auch zur Extraktion und Amplifikation von DNA aus anderen Tiergeweben. Es kann jedoch eine Protokolloptimierung erforderlich sein.

Biochem/physiol Actions

Mit KAPA2G Fast Genotypisierungsmix erzeugte DNA-Fragmente haben 3′-dA-Enden und können in TA-Klonierungsvektoren kloniert werden. Sie können für routinemäßige Downstream-Analysen oder -Anwendungen, einschließlich Restriktionsenzymverdau, Klonierung und Sequenzierung verwendet werden. Wie das Wildtyp-Taq weist auch KAPA2G Fast eine 5′→3′-Polymerase- und 5′→3′-Exonuklease-Aktivität auf, jedoch keine 3′→5′-Exonuklease-(Korrekturlese)-Aktivität. Die Genauigkeit von KAPA2G Fast ist vergleichbar mit der von Wildtyp-Taq; die Fehlerquote liegt bei ca. 1 Fehler pro 1,7 x 105 einbezogenen Nukleotiden.

Features and Benefits

Höherer Durchsatz, schnellere Verarbeitungszeit und höhere Zuverlässigkeit:

• PCR-bereite DNA in nur 15 Minuten
• Reduzierte Gefahr von Probenverlust oder Kontamination durch minimale Handhabung
• Ausreichend Template für mehrere Assays; einfach skalierbar für Proben in einem 96-Well-Format
• Schnelle und zuverlässige Amplifikation von DNA-Fragmenten über eine große Bandbreite von Amplicon-Längen und GC-Gehalten

Übertrifft Rohextraktionsverfahren und kommerzielle Kits:

• Schnellere Verarbeitungszeiten, höhere Spezifität und geringere Kosten

Einige Anmerkungen:

• Extrahieren Sie PCR-bereite DNA aus murinem Schwanz-, Ohr- oder Zehengewebe in 15 Minuten
• Verdünnen Sie das DNA-Extrakt 10-fach vor der PCR in 10 mM Tris-HCl (pH 8,0–8,5) und verwenden Sie 1 μL DNA pro 25 μL Reaktion.
• Extrakte sind bei -20 °C >6 Monate haltbar.
• KAPA2G Fast (HotStart) Genotypisierungsmix enthält KAPA2G Fast DNA-Polymerase für die schnelle PCR sowie Puffer, MgCl₂ (1,5 mM bei 1X) und dNTPs (je 0,2 mM bei 1X).
• Ladefarbstoff für die Elektrophorese ist im KAPA2G Fast Genotypisierungsmix enthalten, damit PCR-Produkte zur Analyse direkt auf Agarosegele geladen werden können.
• Verwenden Sie eine Annealingdauer von 15 s und eine Extensionsdauer von 15 s für Amplicons von <1 kb oder eine 15–30 s/kb Extension für längere Amplicons.

Preparation Note

Stellen Sie stets sicher, dass das Produkt vor der Verwendung vollständig aufgetaut und gut gemischt ist. Reagenzien können kurzzeitig (bis zu 1 Monat) bei 4 °C aufbewahrt werden. Die langzeitige Lagerung sollte bei -20 °C erfolgen. Vorausgesetzt, dass alle Komponenten sorgfältig gehandhabt und nicht kontaminiert wurden, ist keine Beeinträchtigung des Kits zu erwarten, wenn es (unbeabsichtigt) für kurze Zeit (bis zu 3 Tage) bei Raumtemperatur aufbewahrt wird.

Analysis Note

Alle Komponenten der KAPA Maus-Genotypisierungskits werden strengen Qualitätskontrolltests unterzogen, sind frei von kontaminierender Exo- und Endonukleaseaktivität und erfüllen strenge Anforderungen in Bezug auf DNA-Kontamination.

Other Notes

Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren geeignet.

Nur Kit-Komponenten

• 2X KAPA2G Fast Standard or HotStart^® Genotyping Mix with dye
• KAPA Express Extract 1 U/μL
• 10X KAPA Express Extract Buffer

Sicherheitshinweise

• pictograms: GHS08
• signalword: Warning
• hcodes: H371
• pcodes: P260 - P264 - P270 - P308 + P311 - P405 - P501
• Hazard Classifications: STOT SE 2
• Lagerklasse: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk: WGK 1
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