SCM133

PluriSTEM^® Dispase-II-Lösung

Dispase-II has proven to be a rapid and effective, yet gentle, agent for separating many tissues and cells grown in vitro.

• Synonym(e): Dispase, Dispase 2
• UNSPSC Code: 12352204
• NACRES: NA.75
• eCl@ss: 32160801
• Concentration: 1 mg/mL in sterile DMEM/F-12

Eigenschaften

• Quality Segment: 100
• form: liquid
• manufacturer/tradename: PluriSTEM^®
• concentration: 1 mg/mL in sterile DMEM/F-12
• technique(s): cell culture | mammalian: suitable, cell culture | stem cell: suitable
• shipped in: dry ice
• storage temp.: -10 to -25°C

Beschreibung

General description

Proteolytische Enzyme wie Trypsin, Collagenase und Pronase werden üblicherweise zur Dispersion von Geweben und Zellen verwendet. Diese Enzyme verletzen jedoch häufig die Zellen, sind während der Inkubation instabil, können heterogen sein und auch eine Quelle für Mykoplasmen-Kontaminationen darstellen. Dispase-II wird zur Präparation von Zellen aus vielen verschiedenen Geweben und Organen verwendet. Dispase-II ist nachweislich ein rasches und effektives, aber dennoch sanftes Mittel zur Trennung vieler in vitro gezüchteter Gewebe und Zellen. Dispase eignet sich insbesondere für die Gewebedisaggregation und Subkultivierung, da es die Zellmembranen nicht beschädigt.

PluriSTEM Dispase-II wurde zusammen mit PluriSTEM-Medium für humane ES/iPS-Zellen (SCM130) für die Kultur und Passage von humanen embryonalen und induzierten pluripotenten Stammzellen validiert.

Dispase-II Enzym wird in Bacillus polymyxa hergestellt.

Application

Die optimale Passagierungstechnik muss vom Endnutzer bestimmt werden und hängt vom Zelltyp und den Kulturbedingungen ab.

1. 6-Well-Platten mit 1:20-Matrigel-Beschichtung (1,5 ml pro Well) beschichten. Bei 2–8 ºC über Nacht inkubieren oder vor der Verwendung mindestens 30 Minuten bis 1 Stunde bei RT beschichten.
2. Die Matrigelschicht entfernen. 2 ml Komplettmedium pro Well hinzugeben.
3. Bereiche der Differenzierung innerhalb der Kultur entfernen.
4. Medium aspirieren.
5. Einmal mit 2 ml PBS waschen.
6. 1,5 ml Dispase II pro Well hinzugeben. Stattdessen bei 37 ºC 7 Minuten inkubieren.
7. 2x mit 2 ml PBS, ohne Mg und Ca waschen.
8. 2 ml Komplettmedium in jedes Well geben und einen Zellschaber verwenden, um die Kolonien zu lösen.
9. Abgeschabte Zellen in einem konischen 15-ml-Röhrchen sammeln.
10. 5 Minuten lang mit 800 U/min zentrifugieren.
11. In einem geeigneten Volumen mit Komplettmedien resuspendieren. Das typische Aufteilungsverhältnis beträgt 1:5–1:6, je nach Zelldichte. Die Zellen sollten in 5 bis 6 Tagen unter Verwendung von PluriSTEM-Medium für humane ES/iPS-Zellen für die Passagierung bereit sein.

Forschungskategorie
Stammzellenforschung

Forschungsunterkategorie
Enzyme und Biochemie

Physical form

Das Produkt wird in sterilem DMEMF12 bei 1 mg/ml angeboten. Das Produkt wird vor dem Einfrieren durch einen 0,2-µm-Filter filtriert.
Dispase-II Enzym wird in Bacillus polymyxa hergestellt.

Preparation Note

Kann bei -20 °C bis zu 4 Monate ab Empfangsdatum aufbewahrt werden. Nach dem Auftauen in kleinere Volumen aliquotieren und bei -20 ºC lagern. Zur Wahrung der ordnungsgemäßen enzymatischen Aktivität sind wiederholte Einfrier-/Auftauzyklen zu vermeiden.

Analysis Note

Die Lösung ist rot und enthält keine Partikel. Die Lösung ist steril und für alle Zellkulturanwendungen geeignet.

Legal Information

PLURISTEM is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich u. a. zur unautorisierten kommerziellen Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.

Sicherheitshinweise

• Lagerklasse: 10 - Combustible liquids
• wgk: WGK 1