S7110
ApopTag Fluoreszein-In-situ-Apoptosenachweis-Kit
The ApopTag Fluorescein In Situ Apoptosis Detection Kit detects apoptotic cells in situ by the indirect TUNEL method, utilizing an anti-digoxigenin antibody that is conjugated to a Fluorescein reporter molecule.
Synonym(e):
Apoptose-Nachweiskit
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Über diesen Artikel
UNSPSC Code:
12161503
NACRES:
NA.84
eCl@ss:
32161000
Technique(s):
flow cytometry: suitable, immunocytochemistry: suitable, immunohistochemistry (formalin-fixed, paraffin-embedded sections): suitable
Detection method:
fluorometric
Shipped in:
dry ice
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ApopTag, Chemicon®
technique(s)
flow cytometry: suitable, immunocytochemistry: suitable, immunohistochemistry (formalin-fixed, paraffin-embedded sections): suitable
detection method
fluorometric
shipped in
dry ice
Quality Level
General description
Das ApopTag-Fluorescein-In-situ-Apoptose-Detektions-Kit weist apoptotische Zellen mit der indirekten TUNEL-Methode in situ nach, wozu ein Anti-Digoxigenin-Antikörper, der an ein Fluorescein-Reportermolekül konjugiert ist, verwendet wird. Es bietet indirekte Immunfluoreszenzfärbung für 40 Proben. Die Ergebnisse werden entweder mithilfe der Durchflusszytometrie oder der Fluoreszenzmikroskopie analysiert.
Das ApopTag-Fluorescein-In-situ-Apoptose-Detektions-Kit wurde in den folgenden Modellsystemen auf spezifische Färbung getestet: (a) mit Dexamethason induzierte normale periphere Blutlymphozyten vom Menschen, wie sie in Zytospinen angefärbt werden, (b) sich zurückentwickelnde Brustdrüse der Ratte, wie sie in formalinfixierten, paraffineingebetteten Abschnitten angefärbt wird und (c) mit Camptothecin induzierte leukämische periphere Blutlymphozyten vom Menschen, wie sie in Zellsuspensionen angefärbt und für die quantitative Durchflusszytometrie verwendet werden.
Das ApopTag-Fluorescein-In-situ-Apoptose-Detektions-Kit wurde in den folgenden Modellsystemen auf spezifische Färbung getestet: (a) mit Dexamethason induzierte normale periphere Blutlymphozyten vom Menschen, wie sie in Zytospinen angefärbt werden, (b) sich zurückentwickelnde Brustdrüse der Ratte, wie sie in formalinfixierten, paraffineingebetteten Abschnitten angefärbt wird und (c) mit Camptothecin induzierte leukämische periphere Blutlymphozyten vom Menschen, wie sie in Zellsuspensionen angefärbt und für die quantitative Durchflusszytometrie verwendet werden.
Application
Das ApopTag-Fluorescein-In-situ-Apoptose-Detektions-Kit weist apoptotische Zellen mit der indirekten TUNEL-Methode in situ nach, wozu ein Anti-Digoxigenin-Antikörper, der an ein Fluorescein-Reportermolekül konjugiert ist, verwendet wird.
EINLEITUNG
ApopTag In-situ-Apoptose-Detektions-Kits markieren apoptotische Zellen in Forschungsproben durch Modifizierung genomischer DNA unter Verwendung der terminalen Desoxynukleotidyltransferase (TdT) zum Nachweis positiver Zellen durch spezifische Färbung. Diese Anleitung enthält Informationen und Protokolle für das ApopTag Fluorescein-In-situ-Apoptose-Detektions-Kit (Artikelnummer S7110).
Verfahrensgrundsätze
Die in allen ApopTag Kits bereitgestellten Reagenzien sind dazu bestimmt, die freien 3′OH-DNA-Enden in situ mit chemisch markierten und unmarkierten Nukleotiden zu markieren. Die im Reaktionspuffer enthaltenen Nukleotide werden der DNA durch terminale Desoxynukleotidyltransferase (TdT) (13, 31) enzymatisch hinzugefügt. TdT katalysiert eine template-unabhängige Hinzufügung von Nukleotidtriphosphaten an die 3′-OH-Enden von doppelsträngiger oder einzelsträngiger DNA. Die eingebauten Nukleotide bilden ein Oligomer aus Digoxigenin-Nukleotid und unmarkiertem Nukleotid in zufälliger Reihenfolge. Das Verhältnis von markiertem zu unmarkiertem Nukleotid in ApopTag Kits wird optimiert, um die Bindung von Anti-Digoxigenin-Antikörpern zu fördern oder die Fluorescein-Selbstlöschung zu minimieren. Die genaue Länge des zugesetzten Oligomers wurde nicht gemessen.
DNA-Fragmente, die mit dem Digoxigenin-Nukleotid markiert wurden, dürfen dann einen Anti-Digoxigenin-Antikörper binden, der an Fluorescein konjugiert ist (Abbildung 1A). Fluoreszente Antikörper bieten einen empfindlichen Nachweis in der Immunhistochemie oder Immunzytochemie (d. h. auf Gewebe oder Zellen) und unterliegen keinen durch das Substrat oder den Entwicklungsschritt bedingten experimentellen Schwankungen. Dieses gemischte molekularbiologisch-histochemische System ermöglicht eine empfindliche und spezifische Färbung von sehr hohen Konzentrationen von 3′-OH-Enden, die in apoptotischen Körpern lokalisiert sind. Das ApopTag System unterscheidet sich signifikant von den zuvor beschriebenen In-situ-Markierungstechniken für Apoptose (13, 16, 38, 46), bei denen die Avidin-Bindung an zelluläres Biotin zu Fehlern führen kann. Es wurde nachgewiesen, dass das Digoxigenin-/Anti-Digoxigenin-System auf Avidin-/Biotin-Systeme gleichermaßen empfindlich reagiert (22). Immunchemisch ähnliche Liganden für die Bindung des Anti-Digoxigenin-Antikörpers kommen in tierischen Geweben im Allgemeinen nur geringfügig vor und gewährleisten daher eine geringe Hintergrundfärbung. Das in den ApopTag Kits verwendete spezifische Anti-Digoxigenin-Reagens ist ein affinitätsgereinigter polyklonaler Schaf-Antikörper, der eine Kreuzreaktivität von < 1 % mit den wichtigsten Wirbeltiersteroiden aufweist. Zudem wurde der Fc-Abschnitt dieses Antikörpers durch proteolytischen Verdau entfernt, um jegliche unspezifische Adsorption an zelluläre Fc-Rezeptoren auszuschließen.
ApopTag In-situ-Apoptose-Detektions-Kits markieren apoptotische Zellen in Forschungsproben durch Modifizierung genomischer DNA unter Verwendung der terminalen Desoxynukleotidyltransferase (TdT) zum Nachweis positiver Zellen durch spezifische Färbung. Diese Anleitung enthält Informationen und Protokolle für das ApopTag Fluorescein-In-situ-Apoptose-Detektions-Kit (Artikelnummer S7110).
Verfahrensgrundsätze
Die in allen ApopTag Kits bereitgestellten Reagenzien sind dazu bestimmt, die freien 3′OH-DNA-Enden in situ mit chemisch markierten und unmarkierten Nukleotiden zu markieren. Die im Reaktionspuffer enthaltenen Nukleotide werden der DNA durch terminale Desoxynukleotidyltransferase (TdT) (13, 31) enzymatisch hinzugefügt. TdT katalysiert eine template-unabhängige Hinzufügung von Nukleotidtriphosphaten an die 3′-OH-Enden von doppelsträngiger oder einzelsträngiger DNA. Die eingebauten Nukleotide bilden ein Oligomer aus Digoxigenin-Nukleotid und unmarkiertem Nukleotid in zufälliger Reihenfolge. Das Verhältnis von markiertem zu unmarkiertem Nukleotid in ApopTag Kits wird optimiert, um die Bindung von Anti-Digoxigenin-Antikörpern zu fördern oder die Fluorescein-Selbstlöschung zu minimieren. Die genaue Länge des zugesetzten Oligomers wurde nicht gemessen.
DNA-Fragmente, die mit dem Digoxigenin-Nukleotid markiert wurden, dürfen dann einen Anti-Digoxigenin-Antikörper binden, der an Fluorescein konjugiert ist (Abbildung 1A). Fluoreszente Antikörper bieten einen empfindlichen Nachweis in der Immunhistochemie oder Immunzytochemie (d. h. auf Gewebe oder Zellen) und unterliegen keinen durch das Substrat oder den Entwicklungsschritt bedingten experimentellen Schwankungen. Dieses gemischte molekularbiologisch-histochemische System ermöglicht eine empfindliche und spezifische Färbung von sehr hohen Konzentrationen von 3′-OH-Enden, die in apoptotischen Körpern lokalisiert sind. Das ApopTag System unterscheidet sich signifikant von den zuvor beschriebenen In-situ-Markierungstechniken für Apoptose (13, 16, 38, 46), bei denen die Avidin-Bindung an zelluläres Biotin zu Fehlern führen kann. Es wurde nachgewiesen, dass das Digoxigenin-/Anti-Digoxigenin-System auf Avidin-/Biotin-Systeme gleichermaßen empfindlich reagiert (22). Immunchemisch ähnliche Liganden für die Bindung des Anti-Digoxigenin-Antikörpers kommen in tierischen Geweben im Allgemeinen nur geringfügig vor und gewährleisten daher eine geringe Hintergrundfärbung. Das in den ApopTag Kits verwendete spezifische Anti-Digoxigenin-Reagens ist ein affinitätsgereinigter polyklonaler Schaf-Antikörper, der eine Kreuzreaktivität von < 1 % mit den wichtigsten Wirbeltiersteroiden aufweist. Zudem wurde der Fc-Abschnitt dieses Antikörpers durch proteolytischen Verdau entfernt, um jegliche unspezifische Adsorption an zelluläre Fc-Rezeptoren auszuschließen.
Preparation Note
1. Das Kit bis zum ersten Gebrauch bei -15 °C bis -25 °C lagern. Wenn das Kit nach dem ersten Gebrauch binnen drei Monaten verwendet wird, ist das TdT-Enzym (90418) bei -15 °C bis -25 °C zu lagern; die restlichen Komponenten sind bei 2 °C bis 8 °C zu lagern.
2. Den Anti-Digoxigenin-Fluorescein-Antikörper (90426) vor unnötiger Lichtexposition schützen.
Vorsichtshinweise
1. Die folgenden Komponenten des Kits enthalten Kaliumcacodylat (Dimethylarsinsäure) als Puffer: Equilibrierungspuffer (90416), Reaktionspuffer (90417) und TdT-Enzym (90418). Diese Komponenten sind bei Verschlucken gesundheitsschädlich; Kontakt mit Haut und Augen vermeiden (Handschuhe, Schutzbrille tragen) und Kontaktbereiche sofort abwaschen.
2. Antikörperkonjugate (90426) und Blockierungslösungen (90425) enthalten 0,08 % Natriumazid als Konservierungsmittel.
3. TdT-Enzym (90418) enthält Glycerin und gefriert bei -20 °C nicht. Für eine maximale Haltbarkeitsdauer dieses Reagenz vor der Entnahme nicht auf Raumtemperatur erwärmen.
2. Den Anti-Digoxigenin-Fluorescein-Antikörper (90426) vor unnötiger Lichtexposition schützen.
Vorsichtshinweise
1. Die folgenden Komponenten des Kits enthalten Kaliumcacodylat (Dimethylarsinsäure) als Puffer: Equilibrierungspuffer (90416), Reaktionspuffer (90417) und TdT-Enzym (90418). Diese Komponenten sind bei Verschlucken gesundheitsschädlich; Kontakt mit Haut und Augen vermeiden (Handschuhe, Schutzbrille tragen) und Kontaktbereiche sofort abwaschen.
2. Antikörperkonjugate (90426) und Blockierungslösungen (90425) enthalten 0,08 % Natriumazid als Konservierungsmittel.
3. TdT-Enzym (90418) enthält Glycerin und gefriert bei -20 °C nicht. Für eine maximale Haltbarkeitsdauer dieses Reagenz vor der Entnahme nicht auf Raumtemperatur erwärmen.
Other Notes
Equilibrierungspuffer 90416 3,0 mL, -15 °C bis -25 °C
Reaktionspuffer 90417 2,0 mL, -15 °C bis -25 °C
TdT-Enzym 90418 0,64 mL, -15 °C bis -25 °C
Stopp-/Waschpuffer 90419 20 mL, -15 °C bis -25 °C
Blockierungslösung 90425 2,6 mL, -15 °C bis -25 °C
Anti-Digoxigenin-Fluorescein* 90426 2,1 mL, 2 °C bis 8 °C
Kunststoff-Deckgläschen 90421 je 100 St. Raumtemperatur
*affinitätsgereinigter polyklonaler Schaf-Antikörper
Reaktionspuffer 90417 2,0 mL, -15 °C bis -25 °C
TdT-Enzym 90418 0,64 mL, -15 °C bis -25 °C
Stopp-/Waschpuffer 90419 20 mL, -15 °C bis -25 °C
Blockierungslösung 90425 2,6 mL, -15 °C bis -25 °C
Anti-Digoxigenin-Fluorescein* 90426 2,1 mL, 2 °C bis 8 °C
Kunststoff-Deckgläschen 90421 je 100 St. Raumtemperatur
*affinitätsgereinigter polyklonaler Schaf-Antikörper
Legal Information
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Disclaimer
Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.
signalword
Danger
target_organs
Respiratory Tract
Lagerklasse
6.1C - Combustible acute toxic Cat.3 / toxic compounds or compounds which causing chronic effects
wgk
WGK 3
hcodes
Hazard Classifications
Aquatic Chronic 2 - Carc. 1B - ED ENV 1 - STOT RE 2 Inhalation
Analysenzertifikate (COA)
Suchen Sie nach Analysenzertifikate (COA), indem Sie die Lot-/Chargennummer des Produkts eingeben. Lot- und Chargennummern sind auf dem Produktetikett hinter den Wörtern ‘Lot’ oder ‘Batch’ (Lot oder Charge) zu finden.
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In der Dokumentenbibliothek finden Sie die Dokumentation zu den Produkten, die Sie kürzlich erworben haben.
Tsutomu Sasaki et al.
Stroke, 38(5), 1597-1605 (2007-03-24)
Brain ischemia stimulates neurogenesis. However, newborn neurons show a progressive decrease in number over time. Under normal conditions, the cAMP-cAMP responsive element binding protein (CREB) pathway regulates the survival of newborn neurons. Constitutive activation of CREB after brain ischemia also
Louis Tong et al.
Investigative ophthalmology & visual science, 47(10), 4295-4301 (2006-09-28)
Ultraviolet light (UVB) is known to cause apoptosis in human corneal epithelial cells. This study evaluates the role of transglutaminase in regulating tumor necrosis factor (TNF) receptor clustering as well as caspase activation in UVB-induced apoptosis in human corneal epithelial
Kirsten A Baken et al.
Methods (San Diego, Calif.), 41(1), 132-141 (2006-12-13)
Microarray analysis is used for simultaneous measurement of expression of thousands of genes in a given sample and as such extends and deepens our understanding of biological processes. Application of the technique in toxicology is referred to as toxicogenomics. The
Scott F Gallagher et al.
Journal of gastrointestinal surgery : official journal of the Society for Surgery of the Alimentary Tract, 9(4), 467-474 (2005-03-31)
Liver injury is a clinical prognostic indicator in acute pancreatitis (AP). We have demonstrated that Kupffer cell-derived FasL mediates liver injury during AP and sought to determine its role in AP-induced hepatocyte apoptosis. AP was induced in National Institutes of
Toru Nakazawa et al.
Investigative ophthalmology & visual science, 48(6), 2760-2768 (2007-05-26)
To characterize the reactions of retinal glial cells (astrocytes and Müller cells) to retinal injury in mice that lack glial fibrillary acidic protein (GFAP) and vimentin (GFAP-/-Vim-/-) and to determine the role of glial cells in retinal detachment (RD)-induced photoreceptor
Artikel
Cellular apoptosis assays to detect programmed cell death using Annexin V, Caspase and TUNEL DNA fragmentation assays.
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