MAB351
Anti-GAD65 Antibody
clone GAD-6, Chemicon®, from mouse
Synonym(e):
GAD65
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Über diesen Artikel
UNSPSC Code:
12352203
NACRES:
NA.41
eCl@ss:
32160702
Clone:
GAD-6, monoclonal
Species reactivity:
rat, human, mouse
Application:
IHC, WB
Citations:
76
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Unterstützung erhaltenProduktname
Anti-Glutamatdecarboxylase-Antikörper, 65-kDa-Isoform, Klon GAD-6, clone GAD-6, Chemicon®, from mouse
biological source
mouse
Quality Segment
antibody form
purified immunoglobulin
antibody product type
primary antibodies
clone
GAD-6, monoclonal
species reactivity
rat, human, mouse
manufacturer/tradename
Chemicon®
technique(s)
immunohistochemistry: suitable, western blot: suitable
isotype
IgG2a
NCBI accession no.
UniProt accession no.
shipped in
dry ice
target post-translational modification
unmodified
Gene Information
human ... GAD2(2572)
General description
65 kDa
Glutamat-Decarboxylase (GAD; E.C. 4.1.1.15) ist ein Enzym, das für die Umwandlung von Glutaminsäure in Gamma-Aminobuttersäure (GABA), dem wichtigsten inhibitorischen Transmitter in höheren Hirnregionen und Hemmer des mutmaßlichen parakrinen Hormons in Langerhans-Inseln, verantwortlich ist. Zwei molekulare Formen von GAD (65 kDa und 67 kDa, 64 % AS-Identität zwischen Formen) sind hoch-konserviert und beide Formen werden im ZNS, den Langerhans-Inselzellen, Hoden, Eileitern und Eierstöcken exprimiert. Die Isoformen sind zytoplasmatisch und bereichsweise im Gehirn von Ratten und Mäusen verteilt (Sheikh, S. et al. 1999). Bei GAD65 handelt es sich um ein amphiphiles, membranverankertes Protein (AS 585), das auf dem menschlichen Chromosom 10 kodiert wird und für die vesikuläre GABA-Bildung verantwortlich ist. GAD67 ist zytoplasmatisch (594 a.a.), wird auf dem Chromosom 2 kodiert und scheint zu einem beträchtlichen Teil für die zytoplasmatische GABA-Bildung verantwortlich zu sein. Während der neuronalen Entwicklung ändert sich die GAD-Expression im Rückenmark von Ratten. GAD65 wird transient in Kommissuralaxonen um E13 herum exprimiert, jedoch am nächsten Tag herunterreguliert, während sich die Expression von GAD67 in den Somata dieser Neuronen größtenteils erhöht (Phelps, P. et al. 1999). Bei der voll entwickelten Bauchspeicheldrüse von Ratten scheinen GAD65 und GAD67 unterschiedlich lokalisiert zu sein, GAD65 hauptsächlich in Insulin enthaltenden Beta-Zellen und GAD67 in Glucagon enthaltenden (A) Zellen (Li, L. et al. 1995). Die GAD67-Expression scheint vor allem plastisch zu sein und kann sich als Reaktion auf experimentelle Manipulationen (zum Beispiel durch neuronale Stimulation oder Durchtrennung) oder Krankheitsprogression und auftretende Störungen wie Schizophrenie ändern (Volk et al., 2000). Die Kolokalisierung der beiden GAD-Isoforme zeigt ebenfalls Änderungen bei der GAD65/GAD67-Verteilung, die mit bestimmten Krankheitsstadien wie IDDM und SMS zusammenhängen.
Immunogen
Aufgereinigte Glutamat-Decarboxylase aus Rattenhirn.
Application
Anti-GAD-Antikörper. 65 kDa Isoform, Klon GAD-6, weist den Gehalt an Glutamatdecarboxylase nach und wurde zur Verwendung in IH und WB in Publikationen beschrieben und validiert.
Forschungskategorie
Neurowissenschaft
Neurowissenschaft
Forschungsunterkategorie
Neurotransmitter und Rezeptoren
Neurotransmitter und Rezeptoren
Immunhistochemie: (1 μg/ml * siehe Protokoll)
Western Blot
Optimale Arbeitsverdünnungen müssen vom Endanwender bestimmt werden.
ANWENDUNGSHINWEISE FÜR MAB351
IMMUNHISTOCHEMIE
1) Ratten mit 100 mmol/l Phosphatpuffer, pH 7,4 mit 1 % Paraformaldehyd, 0,34 % L-Lysin und 0,05 % m-Periodat (1 % PLP) perfundieren.
2) Gehirne 1 bis 2 Stunden lang in 1 % PLP einlegen.
3) Gehirne in 100 mmol/l Phosphatpuffer mit 30 % Saccharose überführen und auf einem Schüttler bei +4 °C 48 bis 60 Stunden lang vorsichtig schütteln.
4) Schneiden Sie mit einem Schlittenmikrotom 30 mm lange Schnitte aus dem gefrorenen Kleinhirn. Sammeln Sie die Schnitte nach dem Schneiden in einem Fläschchen mit 100 mmol/l kaltem Phosphatpuffer.
5) Inkubieren Sie die Schnitte 30 Minuten lang in PBS mit 1,5 % normalem Serum und 0,2 % Triton X-100.
6) Inkubieren Sie die Schnitte auf einem Schüttler bei +4 °C 12 bis 36 Stunden lang in MAB351 (verdünnt mit 1 μg/ml in PBS mit 1,5 % normalem Serum und 0,2 % Triton X-100).
7) Spülen Sie die Schnitte auf einem Schüttler achtmal 10 bis 15 Minuten lang pro Spülung in PBS.
8) Führen Sie den Nachweis mit einem Standard-Sekundärantikörper-Detektionssystem (PAP, ABC usw.) durch.
9) Tragen Sie die Schnitte auf, dehydrieren Sie sie und bringen Sie Deckgläser an.
Western Blot
Optimale Arbeitsverdünnungen müssen vom Endanwender bestimmt werden.
ANWENDUNGSHINWEISE FÜR MAB351
IMMUNHISTOCHEMIE
1) Ratten mit 100 mmol/l Phosphatpuffer, pH 7,4 mit 1 % Paraformaldehyd, 0,34 % L-Lysin und 0,05 % m-Periodat (1 % PLP) perfundieren.
2) Gehirne 1 bis 2 Stunden lang in 1 % PLP einlegen.
3) Gehirne in 100 mmol/l Phosphatpuffer mit 30 % Saccharose überführen und auf einem Schüttler bei +4 °C 48 bis 60 Stunden lang vorsichtig schütteln.
4) Schneiden Sie mit einem Schlittenmikrotom 30 mm lange Schnitte aus dem gefrorenen Kleinhirn. Sammeln Sie die Schnitte nach dem Schneiden in einem Fläschchen mit 100 mmol/l kaltem Phosphatpuffer.
5) Inkubieren Sie die Schnitte 30 Minuten lang in PBS mit 1,5 % normalem Serum und 0,2 % Triton X-100.
6) Inkubieren Sie die Schnitte auf einem Schüttler bei +4 °C 12 bis 36 Stunden lang in MAB351 (verdünnt mit 1 μg/ml in PBS mit 1,5 % normalem Serum und 0,2 % Triton X-100).
7) Spülen Sie die Schnitte auf einem Schüttler achtmal 10 bis 15 Minuten lang pro Spülung in PBS.
8) Führen Sie den Nachweis mit einem Standard-Sekundärantikörper-Detektionssystem (PAP, ABC usw.) durch.
9) Tragen Sie die Schnitte auf, dehydrieren Sie sie und bringen Sie Deckgläser an.
Biochem/physiol Actions
Erkennt die Isoform mit dem geringeren Molekulargewicht der beiden im Gehirn identifizierten GAD-Isoformen (Gottlieb, et al., 1986; Chang & Gottlieb, 1988). Dieser monoklonale Antikörper kann für die immunhistochemische Lokalisierung in Gehirn oder Pankreas verwendet werden. Anti-GAD wurde auch zur Markierung von aufgereinigter GAD in Western Blots verwendet (Chang & Gottlieb, 1988).
Physical form
Aufgereinigtes Immunglobulin. Lyophilisiert aus 10 mmol/l Natriumphosphatpuffer, 70 mmol/l Natriumchlorid, pH 7,4, 0,02 % Natriumazid. Mit 100 μl sterilem Wasser (1 mg/ml) rekonstituieren.
Format: Aufgereinigt
Mit Protein A aufgereinigt
Preparation Note
Das lyophilisierte Material ist bei -20 °C bis zu 12 Monate haltbar. Nach der Rekonstitution bei -20 °C gefroren in unverdünnten Aliquoten bis zu 6 Monate haltbar. Wiederholte Einfrier-/Auftauzyklen vermeiden.
Analysis Note
Kontrolle
Rattenhirngewebe
humanes Hirnlysat
Rattenhirngewebe
humanes Hirnlysat
Other Notes
Konzentration: Die chargenspezifische Konzentration entnehmen Sie bitte dem Analysenzertifikat.
Legal Information
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Disclaimer
Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich u. a. zur unautorisierten kommerziellen Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.
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signalword
Warning
hcodes
Hazard Classifications
Acute Tox. 4 Dermal - Acute Tox. 4 Inhalation - Acute Tox. 4 Oral - Aquatic Chronic 3
Lagerklasse
13 - Non Combustible Solids
wgk
WGK 3
flash_point_f
Not applicable
flash_point_c
Not applicable
Analysenzertifikate (COA)
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