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ChIPAb+-Trimethyl-Histon H3 (Lys27) - durch ChIP validiertes Antikörper- und Primer-Set

from rabbit, purified by using Protein A

• Synonym(e): H3K27me3, Histone H3 (tri methyl K27), Histone H3K27me3
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.32
• eCl@ss: 32160702
• Clone: polyclonal
• Species reactivity: human, mouse
• Application: ChIP, WB
• Citations: 196

Eigenschaften

• biological source: rabbit
• Quality Segment: 100
• clone: polyclonal
• purified by: using Protein A
• species reactivity: human, mouse
• manufacturer/tradename: ChIPAb+, Upstate^®
• technique(s): ChIP: suitable, western blot: suitable
• NCBI accession no.: NP_003484
• UniProt accession no.: Q16695
• shipped in: dry ice
• Gene Information: human ... H3F3B(3021)

Beschreibung

General description

17 kDa

Alle ChIPAb+-Antikörper werden einzeln (jede Charge, jedes Mal) für die Chromatin-Immunpräzipitation
validiert. Jedes ChIPAb+-Antikörper-Set enthält Kontrollprimer (jede Charge wurde durch qPCR geprüft), um Ihre IP-Ergebnisse im stellenspezifischen Kontext biologisch zu validieren. Das qPCR-Protokoll und die Primer-Sequenzen werden bereitgestellt, was es Forschenden ermöglicht, ChIP-Protokolle zu validieren, wenn sie unseren Antikörper in ihrem Chromatin-Kontext nutzen.
Jedes Set enthält außerdem einen Negativkontrolle-Antikörper, um die Spezifizität der ChIP-Reaktion zu gewährleisten. Das ChIPAb+-Trimethyl-Histon-H3(Lys27)-Set enthält den Anti-Trimethyl-Histon-H3(Lys27)-Antikörper, einen Negativkontrolle-Antikörper (aufgereinigtes Kaninchen-IgG) und qPCR-Primer, die eine 139-bp-Region des humanen alpha-Satelliten amplifizieren. Das Trimethyl-Histon H3 (Lys27) und die Negativkontrolle-Antikörper werden in skalierbarer „je ChIP“-Reaktionsgröße geliefert und können verwendet werden, um die Ausfällung von Trimethyl-Histon-H3(Lys27)-assoziiertem Chromatin funktionell zu validieren.

Die Methylierung von Histonen kann an zwei verschiedenen Resten erfolgen: Arginin oder Lysin. Die Histon-Methylierung kann, abhängig vom methylierten Rest, mit einer Transkriptionsaktivierung oder -unterdrückung in Zusammenhang stehen. Lysin 27 von Histon H3 kann durch verschiedene Histon-Methyltransferasen wie EZH2 oder NSD3 mono-, di- oder trimethyliert werden (Histon H3-Monomethyl-Lys27, Histon H3-Dimethyl-Lys27 oder Histon H3-Trimethyl-Lys27). Die Methylierung dieses Rests ist primär mit der Transkriptionsunterdrückung assoziiert.

Immunogen

Epitop: Trimethyl-Lys27

KLH-konjugiertes, synthetisches, zweifach verzweigtes Peptid, das die Sequenz ...AR(me3K)SAP... enthält, wobei me3K dem Trimethyl-Lysin an Rest 27 von humanem Histon H3 entspricht.

Application

Chromatin-Immunpräzipitation:
Beschalltes Chromatin aus 2 x 10⁶ HeLa-Zellen wurde einer Chromatin-Immunpräzipitation mit 4 μg aufgereinigtem Anti-Trimethyl-Histon-H3(Lys27)-Antikörper oder normalem Kaninchen-IgG und dem Magna ChIP A Kit (Katalognr. 17-610) unterzogen. Die erfolgreiche Anreicherung von Trimethyl-Histon-H3(Lys27)-assoziierten DNA-Fragmenten wurde durch qPCR mit ChIP-Primern für GAPDH, die den humanen GAPDH-Promotor flankieren, und Primern, die auf den Promotor für humanes MyoD abzielen, verifiziert.
Bitte beziehen Sie sich für experimentelle Details auf die Protokolle für das EZ-Magna ChiP A Kit (Katalognr. 17-408) oder das EZ-ChIP Kit (Katalognr. 17-371).

Western-Blot-Analyse:
Rekombinantes Histon H3 (Bahn 2) und HeLa-Zellsäureextrakte (Bahn 1) wurden durch Elektrophorese aufgelöst, auf Nitrocellulose übertragen und mit einer 1:5000-Verdünnung von Anti-Trimethyl-Histon H3 (Lys27) (0,4 μg/ml) untersucht.
Die Proteine wurden mit einem an HRP konjugierten Anti-Kaninchen-Sekundärantikörper der Ziege und einem Chemilumineszenz-Nachweissystem veranschaulicht (siehe Abbildungen).

Durch ChIP validiertes Trimethyl-Histon-H3(Lys27)-Antikörper- und Primer-Set, einschließlich Antikörper in ChIP-Qualität und spezifische Kontroll-PCR-Primer für die Chromatin-Immunpräzipitation von H3K27Me3.

Forschungs-Unterkategorie
Histone

Forschungskategorie
Epigenetik & Zellkernfunktion

Biochem/physiol Actions

Eine weitreichende artenübergreifende Kreuzreaktivität ist zu erwarten.

Trimethyl-Histon H3 (Lys27)

Packaging

25 Assays je Kit, ~4 μl je Chromatin-Immunpräzipitation.

Physical form

Anti-Trimethyl-Histon H3 (Lys27) (polyklonales Kaninchen-IgG). Ein Fläschchen mit 100 μg mit Protein A aufgereinigtem IgG in 100 μl Puffer mit 0,1 mol/l Tris-Glycin, pH-Wert 7,4, 0,15 mol/l NaCl, 0,05 % Natriumazid. Bei -20 °C aufbewahren.

Normales Kaninchen-IgG. Ein Fläschchen mit 125 μg aufgereinigtem Kaninchen-IgG in 125 μl Lagerpuffer mit 0,1 % Natriumazid. Bei -20 °C aufbewahren.

ChIP-Primer für den humanen alpha-Satellit. Ein Fläschchen mit 75 μl von 5 μmol/l jedes Primers, spezifisch für den humanen alpha-Satellit. Bei -20 °C aufbewahren.
FÜR: CTG CAC TAC CTG AAG AGG AC
REV: GAT GGT TCA ACA CTC TTA CA

Preparation Note

Bei -20 °C ab Versanddatum 1 Jahr haltbar

Analysis Note

Chromatin-Immunpräzipitation:
Beschalltes Chromatin aus 3 x 10⁶ NIH/3T3-L1-Zellen wurde einer Chromatin-Immunpräzipitation mit 4 μg aufgereinigtem Antikörper oder normalem Kaninchen-IgG und dem Magna ChIP^® A Kit (Katalognr. 17-610) unterzogen. Die erfolgreiche Anreicherung von Trimethyl-Histon-H3(Lys27)-assoziierten
DNA-Fragmenten wurde durch qPCR mit ChIP-Primern für den humanen alpha-Satellit verifiziert (siehe Abbildungen).
Bitte beziehen Sie sich für experimentelle Details auf das Protokoll für EZ-Magna ChIP A (Katalognr. 17-408) oder EZ-ChIP (Katalognr. 17-371).

Kontrolle
Ein Fläschchen mit 75 μl von 5 μmol/l jedes Primers, spezifisch für den humanen alpha-Satellit. Bei -20 °C aufbewahren.

FÜR: CTG CAC TAC CTG AAG AGG AC

REV: GAT GGT TCA ACA CTC TTA CA

Other Notes

Polyklonaler Anti-Trimethyl-Histon-H3(Lys27)-Antikörper, 1 Fläschchen

Polyklonales Kaninchenserum als Kontrolle, 1 Fläschchen

Humaner alpha-Satellit-Primer-Set, 1 Fläschchen

Legal Information

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.

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