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RIPAb+-Fragile-X-Mental-Retardation-1-Protein – RIP-validierte-Antikörper- und Primer-Set

from mouse

• Synonym(e): Fragile X mental retardation 1 protein
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.52
• eCl@ss: 32160702

Eigenschaften

• biological source: mouse
• Quality Level: 100
• clone: monoclonal
• species reactivity: human, rat, mouse
• manufacturer/tradename: RIPAb+, Upstate^®
• technique(s): ELISA: suitable, RIP: suitable, immunocytochemistry: suitable, immunohistochemistry (formalin-fixed, paraffin-embedded sections): suitable, immunoprecipitation (IP): suitable, western blot: suitable
• isotype: IgG1κ
• NCBI accession no.: NP_002015.1
• UniProt accession no.: Q06787
• shipped in: dry ice

Beschreibung

General description

71 kDa

RIPAb+-Antikörper werden mit dem RNA-Bindungsprotein-Immunpräzipitation(RIP)-Assay beurteilt. Jedes RIPAb+-Antikörper-Set beinhaltet einen Antikörper für die Negativkontrolle, um die Spezifität der RIP-Reaktion zu gewährleisten und ist für die Co-Immunpräzipitation von RNA, die speziell mit dem immunpräzipierten RNA-Bindungsprotein von Interesse assoziiert wird, verifiziert. Der RIPAb+-Satz enthält ggf. auch quantitative RT-PCR-Kontrollprimer (RIP-Primer) für die biologische Validierung Ihrer IP-Ergebnisse durch die erfolgreiche Co-Präzipitation der spezifischen RNA-Ziele, wie Boten-RNAs. Das qPCR-Protokoll und die Primer-Sequenzen werden bereitgestellt, was es Forschenden ermöglicht, RIP-Protokolle zu validieren, wenn sie den Antikörper für ihre Experimente nutzen. Wenn kein zielspezifischer Assay im Lieferumfang enthalten ist, wird das RIPAb+-Kit unter Verwendung eines automatisierten Mikrofluidik-basierten Assays validiert, indem die nachweisbare RNA per Kontroll-Immunpräzipitation angereichert wird.

Immunogen

Fusionsprotein mit einem (humanen) FMRP in voller Länge.

Application

WESTERN-Blot-Analyse:
Repräsentative Chargendaten.
Rückenmarklysat der Maus (E17) (Bahn 1), Gehirn der Maus (E16) (Bahn 2) und NIH/3T3-Lysat (Bahn 3) wurden mittels Elektrophorese aufgelöst, auf die PVDF-Membran übertragen und mit Anti-Fragile-X-Mental-Retardation-Protein (1:500-Verdünnung einer vorherigen Charge) getestet.
Die Proteine wurden mit einem mit HRP-konjugierten sekundären Anti-Maus-Antikörper von der Ziege und einem Chemilumineszenz-Nachweissystem visualisiert.
Der Pfeil zeigt das Fragile-X-Mental-Retardation-Protein (~71 kDa) (siehe Abbildungen).


Immunhistochemie: Gefrorene und Paraffinschnitte. Es wurde eine Verdünnung von 1:500–1:5.000 einer früheren Charge verwendet.

ELISA: Im ELISA wurde eine Verdünnung von 1:500–1:5.000 einer früheren Charge verwendet.

FMPR-Nachweis in Blutabstrichen: Es wurde eine Verdünnung von 1:500–1:5.000 einer früheren Charge verwendet.

Immunzytochemie: Es wurde eine Verdünnung von 1:500–1:5.000 einer früheren Charge an transfizierten Zellen verwendet. Leichte Fixierung (2 % PFA, mit 0,1 % Triton nur im Block permeabilisieren) (siehe Abbildungen)

Die optimalen Arbeitsverdünnungen müssen vom Endanwender bestimmt werden.

Dieses praktische Set aus validiertem RIPAb+-Anti-Fragile-X-Mental-Retardation-Protein-Antikörper und Primer enthält den Antikörper und die spezifischen PCR-Kontrollprimer.

Forschungskategorie
Epigenetik und Zellkernfunktion

Neurowissenschaft

Forschungsunterkategorie
RNA-Bindungsprotein (RBP)

RNA-Metabolismus- und Bindungsproteine

Neurodegenerative Erkrankungen

Biochem/physiol Actions

FMRP. Eine Kreuzreaktion mit dem FXR-Protein kann möglicherweise in Fällen mit einer starken Expression in Mäusen nachgewiesen werden.

Packaging

10 Assays je Set. Empfohlene Verwendung: ~5 μl Antikörper je RIP (abhängig vom biologischen Kontext).

Physical form

Anti-Fragile-X-Mental-Retardation-Protein (monoklonales Maus-IgG1κ). Ein Fläschchen mit 50 μl Flüssigkeit, enthält kein Konservierungsmittel. Bei -20 °C aufbewahren.

Normales Maus-IgG.
Ein Fläschchen mit 125 μg aufgereinigtem Maus-IgG in 125 µl Lagerpuffer mit 0,1 % Natriumazid. Bei -20 °C aufbewahren.
RIP-Primer, Iqsec1.

Ein Fläschchen mit 75 μl von 5 μM jedes Primers, spezifisch für Maus-Iqsec1.
Bei -20 °C aufbewahren.
FÜR: GCG TCT AGG ACC TTG TGA GC
REV: GAA GGC TGA CCT CCA TGT TG

Format: Aufgereinigt

Preparation Note

Bei -20 °C ab Empfangsdatum 1 Jahr haltbar.
Handhabungsempfehlungen: Das Fläschchen nach Empfang und vor dem Abnehmen der Kappe zentrifugieren und die Lösung vorsichtig mischen. In Mikrozentrifugenröhrchen aliquotieren und bei -20 °C aufbewahren. Wiederholte Einfrier-/Auftauzyklen sind zu vermeiden, da sie das IgG beschädigen und die Produktleistung beeinträchtigen können.

Analysis Note

RNA-Bindungsprotein-Immunpräzipitation:
RIP-Lysat aus NIH/3T3-Zellen (Äquivalent von 2 x 10⁷ Zellen je IP) wurde einer Immunpräzipitation mit 5 µl von entweder normalem Maus-IgG oder 5 µl Anti-Fragile-X-Mental-Retardation-Protein-Antikörpern und dem Magna RIP^®-RNA-Bindungsprotein-Immunpräzipitations-Kit (Katalognr. 17-700) unterzogen.
Die erfolgreiche Immunpräzipitation von Anti-Fragile-X-Mental-Retardation-Protein-assoziierter RNA wurde mittels qPCR mit RIP-Primern Iqsec1 bestätigt (siehe Abbildungen).
Nähere Informationen zu Experimenten entnehmen Sie bitte dem Protokoll für Magna RIP (Katalognr. 17-700) oder EZ-Magna RIP (Katalognr. 17-701).

Kontrolle
Umfasst Maus-IgG-Antikörper als Negativkontrolle sowie spezifische Kontrollprimer für Maus-Iqsec1.

Legal Information

MAGNA RIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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