01-185

Vascular Endothelial Growth Factor human

recombinant, expressed in baculovirus infected Sf9 cells, liquid, suitable for cell culture

• Synonym(e): VEGF-Wachstumsfaktor
• UNSPSC Code: 12352202
• eCl@ss: 32160405
• NACRES: NA.75
• Biological source: human
• Recombinant: expressed in baculovirus infected Sf9 cells
• Form: liquid

Eigenschaften

• Produktname: VEGF-Protein, human, rekombinant, The human recombinant VEGF Protein is available in a 10 µg format.
• biological source: human
• Quality Segment: 100
• recombinant: expressed in baculovirus infected Sf9 cells
• form: liquid
• manufacturer/tradename: Upstate^®
• technique(s): cell culture | mammalian: suitable
• input: sample type neural stem cell(s); sample type hematopoietic stem cell(s); sample type mesenchymal stem cell(s)
• NCBI accession no.: NM_001025366.1, NM_001025367.1, NM_001025368.1, NM_001025369.1, NM_001025370.1, NM_001033756.1, NM_003376.4
• UniProt accession no.: P15692
• shipped in: dry ice
• storage temp.: -10 to -25°C
• Gene Information: human ... VEGFA(7422)

Beschreibung

General description

Produktherkunft: Rekombinante Human-DNA, die in mit Baculovirus infizierten Sf9-Zellen exprimiert wird.

Application

VEGF-Proliferations-Assay

1. Die HUVEC vor der Verwendung in diesem Assay in F-12K-Medium aufbewahren, das mit 10 % (v/v) FBS, 1 % Penicillin-Streptomycin-Glutamin, 0,1 mg/ml Heparin und 0,05 mg/ml Endothelzellwachstumsergänzung (ECGS) ergänzt wurde.

2. HUVEC für den VEGF-Assay mit einer Dichte von 4.000 Zellen je Well über Nacht in einer 96-Well-Mikrotiterplatte in dem Wachstumsmedium subkultivieren.

3. VEGF für eine Endkonzentration im Bereich von 0,2; 0,4; 0,8; 1,6; 3,2; 6,2; 12,5; 25 und 50 ng/ml zugeben. VEGF-Verdünnungsmittel als Negativkontrolle zu einem Satz Wells geben.
4. Vier Tage später 20 μl Promega Substrate Cell Titer 96 Aqueous One Solution Reagent zu jedem Well geben.
5. Bei 37 C 2 Std. inkubieren und bei einem OD von 490 nm ablesen.

Physical form

10 µg VEGF-Protein wurden aus Puffer mit 25 mmol/l HEPES und 150 mmol/l NaCl, pH-Wert 7,0 lyophilisiert. Trägerfrei.

10 µg VEGF-Protein, lyophilisiert aus Puffer mit 25 mmol/l HEPES und 150 mmol/l NaCl, pH-Wert 7,0. Trägerfrei.

Durch einen 0,2-μm-Membranfilter sterilisiert

Preparation Note

Das lyophilisierte Pulver ist bei Raumtemperatur einige Wochen haltbar, wird aber am besten bei -20 °C bis zu einem Jahr ab Empfangsdatum gelagert. Nach kurzem Schleudern mit sterilem Wasser oder 25 mmol/l HEPES und 150 mmol/l NaCl, pH-Wert 7,0 rekonstituieren. Das rekonstituierte Material kann eine Woche bei 2°–8 °C aufbewahrt werden, allerdings werden unverdünnte Aliquote bei -20 °C empfohlen. Wiederholte Einfrier-/Auftauzyklen vermeiden.

Dieses Produkt ist säurestabil. In entweder 0,1 % TFA oder 4 mmol/l HCl mit 25 μg BSA je μg VEGF verdünnen, um die Stabilität zu erhalten. Reduktionsmittel (wie Dithiothrietol oder 2-Mercaptoethanol) hemmen die VEGF-Aktivität.

Analysis Note

Regelmäßig in einem 5-tägigen Wachstumsassay mit humanen Nabelschnurvenen-Endothelzellen beurteilt

Zellproliferations-Assay: Die biologische Aktivität dieser Charge von VEGF wurde durch ihre mitogene Wirkung auf humane Nabelschnurvenen-Endothelzellen (HUVEC) mit einem ED50 von etwa 1,0 ng/ml bestimmt. Die Ergebnisse können abhängig von der verwendeten Zelllinie variieren. VEGF stimuliert auch Endothelzellen von anderen Spezies.

Legal Information

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Sicherheitshinweise

• Lagerklasse: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk: nwg