D4513
Désoxyribonucléase I from bovine pancreas
Type II-S, lyophilized powder, Protein ≥80 %, ≥2,000 units/mg protein
Synonyme(s) :
DNase I, Désoxyribonucléate-5′-oligonucléotido-hydrolase
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About This Item
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Source biologique
bovine pancreas
Stérilité
sterile-filtered
Type
Type II-S
Forme
lyophilized powder
Activité spécifique
≥2,000 units/mg protein
Poids mol.
~31 kDa
Produit purifié par
chromatography
Composition
Protein, ≥80%
Conditionnement
vial of ≥10.0 mg protein
Technique(s)
DNA purification: suitable
Impuretés
endotoxin, tested
Solubilité
0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, clear(lit.)
Adéquation
suitable for molecular biology
Application(s)
diagnostic assay manufacturing
diagnostic assay manufacturing
Activité étrangère
Chymotrypsin ≤0.01%
Protease ≤0.005%
RNase ≤0.01%
Température de stockage
−20°C
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Application
La DNAse I de Sigma a été comparée à un inhibiteur de l'interleukine 1 dérivé d'urine humaine quant à leur capacité à hydrolyser l'ADN[14C]. Elle a également été utilisée pour cliver un fragment de restriction Hind III/Nci I de 139 paires de bases afin d'étudier sa stabilité dans des expériences de footprinting. La DNase I est très utilisée comme agent de footprinting pour l'étude de la liaison de médicaments et de protéines à l'ADN.
La désoxyribonucléase I de pancréas de bovin a été utilisée dans une étude sur une nouvelle technique d'obtention de RNase, de DNase, de cholestérolestérase et de trypsine hautement actives à partir de pancréas de bovin. La désoxyribonucléase I de pancréas de bovin a également été utilisée dans une étude portant sur l'isolement puis la caractérisation de DNase de foie de carpe.
Produit utilisé pour éliminer l'ADN présent dans les échantillons de protéines.
Actions biochimiques/physiologiques
La DNase I est une endonucléase qui agit sur les liaisons phosphodiester adjacentes à des pyrimidines et qui produit des polynucléotides ayant des groupements 5′-phosphate terminaux. En présence de Mg2+, la DNase I clive indépendamment chaque brin d'ADN et les sites de clivage sont aléatoires. Les deux brins d'ADN sont clivés approximativement au niveau du même site en présence de Mn2+. Le pH optimal se situe entre 7 et 8. Les cations divalents tels que Mn2+, Ca2+, Co2+ et Zn2+ sont des activateurs de cette enzyme. Une concentration en Ca2+ de 5 mM la stabilise vis-à-vis de la digestion protéolytique. La DNase I de pancréas de bovin est constituée de quatre éléments, A, B, C et D, qui peuvent être distingués par chromatographie. Le rapport molaire des éléments A, B et C est de respectivement 4:1:1. L'élément D est présent en très faible quantité. Le 2-mercaptoéthanol, les chélateurs, le dodécylsulfate de sodium (SDS) et l'actine sont connus pour inhiber l'activité de cette enzyme.
Définition de l'unité
Une unité Kunitz produit une ΔA260 de 0,001 par minute et par millilitre, à pH 5,0 et à 25 °C, avec de l'ADN de type I ou III comme substrat. (1 unité = 1 unité Kunitz)
Forme physique
Poudre lyophilisée contenant du chlorure de calcium
Notes préparatoires
La poudre d'enzyme peut être reconstituée dans de l'eau ou tout tampon de pH 4,0 à 9,0, à l'exception des tampons phosphates. Les chélateurs de calcium doivent être évités. Une solution de DNase I à 10 mg/ml dans du NaCl 0,15 M peut perdre < 10 % de son activité lorsqu'elle est conservée une semaine en aliquotes à −20 °C. La perte d'activité peut être d'environ 20 % si la même solution est conservée en aliquotes entre 2 et 8 °C. Elle reste active pendant 5 heures maximum à 60 °C entre pH 5 et pH 7 et devient inactive après moins de 10 minutes à 68 °C. Sa perte d'activité est de 6 % par heure dans un tampon acétate (pH 5,0) ou un tampon Tris (pH 7,2) à une concentration de 1 mg/ml.
Remarque sur l'analyse
Protéine déterminée par la réaction du biuret.
Inhibiteur
Réf. du produit
Description
Tarif
Mention d'avertissement
Danger
Mentions de danger
Conseils de prudence
Classification des risques
Resp. Sens. 1
Code de la classe de stockage
11 - Combustible Solids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 3
Point d'éclair (°F)
Not applicable
Point d'éclair (°C)
Not applicable
Équipement de protection individuelle
Eyeshields, Gloves, type N95 (US)
Certificats d'analyse (COA)
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