MAB377B

Anticuerpo anti-NeuN, clon A60, conjugada con biotina

clone A60, Chemicon^®, from mouse

• Sinónimos: Neuron-Specific Nuclear Protein
• Código UNSPSC: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41

Propiedades

• origen biológico: mouse
• Nivel de calidad: 100
• conjugado: biotin conjugate
• forma del anticuerpo: purified immunoglobulin
• tipo de anticuerpo: primary antibodies
• clon: A60, monoclonal
• reactividad de especies: rat, mouse
• reactividad de especies (predicha por homología): ferret, salamander, human, chicken
• fabricante / nombre comercial: Chemicon^®
• técnicas: immunocytochemistry: suitable; immunohistochemistry (formalin-fixed, paraffin-embedded sections): suitable; western blot: suitable
• isotipo: IgG1
• Condiciones de envío: wet ice
• modificación del objetivo postraduccional: unmodified
• Información sobre el gen: human ... RBFOX3(146713) ; mouse ... Rbfox3(52897) ; rat ... Rbfox3(287847)

Descripción

Descripción general

El anticuerpo anti-NeuN (núcleos NEUronales; clon A60) reconoce específicamente la proteína NeuN, específica de las neuronas que se une al ADN, que está presente en la mayor parte de los tipos de células neuronales del SNC y el SNP de todos los vertebrados estudiados. La distribución de la proteína NeuN está aparentemente restringida a los núcleos neuronales, a los cuerpos celulares y algunos procesos neuronales proximales en el cerebro fetal y adulto, aunque algunas neuronas no son reconocidas por el NeuN a todas las edades: las células retinianas INL, las células de Cajal-Retzius, las células de Purkinje, las neuronas del núcleo dentado y olivar inferior, y las células de los ganglios simpáticos son ejemplos (Mullen et al., 1992; Wolf et al., 1996). La proteína NeuN inmunohistoquímicamente detectable aparece primero en las etapas del desarrollo que se corresponden con la retirada de las neuronas del ciclo celular o con el comienzo de la diferenciación terminal de la neurona (Mullen et al., 1992). La inmunorreactividad aparece en torno a E9.5 en el tubo neuronal de ratón y se extiende por todo el sistema nervioso en desarrollo para E12.5. Una fuerte tinción nuclear sugiere una función proteica reguladora nuclear; sin embargo, en la actualidad no existen pruebas de si el antígeno NeuN tiene alguna función en el citoplasma distal o si simplemente es sintetizada allí antes de ser transportada de vuelta al núcleo. No se han encontrado diferencias entre la proteína aislada de núcleos purificados y la procedente de extractos cerebrales completos mediante inmunotransferencia (Mullen et al., 1992).

Especificidad

La proteína nuclear específica de las neuronas de vertebrados denominada NeuN (o Núcleos Neuronales) MAB377X reacciona con la mayor parte de tipos celulares del sistema nervioso de ratones: cerebelo, corteza cerebral, hipocampo, tálamo, médula espinal y neuronas del sistema nervioso periférico, como los ganglios dorsales, los ganglios de la cadena simpática y los ganglios entéricos. La tinción inmunohistoquímica se localiza fundamentalmente en el núcleo de las neuronas con una tinción más clara en el citoplasma. Los pocos tipos de células no reactivas con MAB377 son las células de Purkinje, las células mitrales y las células fotorreceptoras. Desde el punto de vista del desarrollo, la inmunorreactividad se observa por primera vez poco después de que las neuronas devengan posmitóticas; no se ha observado tinción en las zonas proliferativas. El anticuerpo es un excelente marcador para las neuronas en cultivos primarios y en las células P19 estimuladas con ácido retinoico. También es útil para la identificación de neuronas en los trasplantes.

Inmunógeno

Núcleos celulares purificados de cerebro de ratón

Aplicación

Análisis mediante inmunocitoquímica:
se utilizó una dilución 1:10 -1:500 de un lote anterior. Las neuronas en cultivo deben permeabilizarse con Tritón X-100 al 0,1%. Todas las diluciones de los anticuerpos primarios deben realizarse con disoluciones simples que contengan sólo el amortiguador y el anticuerpo primario sin un exceso de proteínas de bloqueo ni de detergentes.

En los estudios de marcado doble con monoclonales de ratón, las incubaciones de anticuerpo deben ser secuenciales con MAB377B en último lugar. El primer anticuerpo monoclonal de ratón debe detectarse primero con un anticuerpo secundario anti-ratón antes de incubar con MAB377B. El exceso de IgG anti-ratón puede bloquearse incubando con suero de ratón al 1 % antes de la incubación con MAB377B. La detección de anticuerpo monoclonal anti NeuN biotinilado se realiza a través de estreptavidina. En algunos casos, puede ser necesario pretratar el tejido con avidina para bloquear el exceso de biotina antes de la inmunohistoquímica (Wood y Warnke, 1981).

Inmunohistoquímica:
1:200-1:2 000. El anticuerpo funciona mejor en tejido incluido en cera de poliéster, pero también funciona en tejido incluido en parafina a una menor dilución de trabajo. El anticuerpo funciona bien con fijadores que contengan formaldehído. Se ha utilizado el tratamiento con ácido cítrico y microondas de manera satisfactoria (Sarnat, 1998).

Análisis mediante inmunoelectrotransferencia (WB):
se utilizó un lote anterior de este anticuerpo en inmunoelectrotransferencia. Reconoce 2-3 bandas en el intervalo de 46-48 kDa y posiblemente otra banda a aproximadamente 66 kDa.

El usuario debe determinar las diluciones de trabajo óptimas.

Categoría de investigación
Neurociencia

Este anticuerpo anti-NeuN, clon A60, conjugado con biotina está validado para utilizar en IC, IH, IH(P), WB para la detección de la NeuN.

Subcategoría de investigación
Marcadores neuronales y de la glía

Calidad

Evaluada sistemáticamente mediante inmunohistoquímica en tejido cerebral

Análisis mediante inmunohistoquímia (parafina):
Patrón/morfología de tinción NeuN (nº de ref. MAB377) en cerebelo de rata. Tejido pretratado con citrato, pH 6,0. Este lote de anticuerpo fue diluido 1:100, utilizando detección IHC-Select con HRP-DAB. La inmunorreactividad se observa como una tinción nuclear en las neuronas de la capa granular. Nótese que no se detecta señal en el núcleo de las células de Purkinje.
Tinción óptima con tampón citrato, pH 6,0, Recuperación del epítopo: Cerebelo de rata

Descripción de destino

46-48 kDa

Forma física

IgG1 monoclonal de ratón purificado en tampón que contiene PBS 0,01 M, pH 7,1, azida sódica al 0,1 % con 15 mg/ml de BSA como estabilizador.

Proteína A purificada

Almacenamiento y estabilidad

Estable durante 1 año a 2-8ºC desde la fecha de recepción.

Nota de análisis

Control
Tejido cerebral, la mayoría de los tipos de células neuronales de todo el sistema nervioso adulto

Otras notas

Concentración: Para conocer la concentración específica del lote, consulte el certificado de análisis.

Información legal

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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Información de seguridad

• Código de clase de almacenamiento: 12 - Non Combustible Liquids
• Clase de riesgo para el agua (WGK): WGK 2
• Punto de inflamabilidad (°F): Not applicable
• Punto de inflamabilidad (°C): Not applicable