Interacciones de ácidos nucleicos y proteínas

Tecnología de ensayo de ligadura de proximidad

Curiosamente los científicos que aprovechan las tecnologías de proteínas y ADN han ideado nuevas herramientas y métodos para evaluar las interacciones proteína-proteína. Con una elevada especificidad y sensibilidad, la tecnología del ensayo de ligadura por proximidad (PLA) facilita la detección in situ de proteínas endógenas, modificaciones de proteínas e interacciones proteicas. Al igual que las técnicas de inmunoprecipitación, en el ensayo de PLA se utilizan anticuerpos primarios muy específicos para reconocer las dos proteínas de interés. Sin embargo, se utilizan anticuerpos secundarios etiquetados con oligonucleótidos modificados, que funcionan como la sonda de PLA, para unirse a los anticuerpos primarios. Sólo si ambas proteínas están presentes y cerca, los oligonucleótidos conectores de hibridación se unirán a las sondas de PLA. La adición de ligasa permite la formación de una plantilla de ADN circular cerrado. Con la nueva plantilla de ADN circular formada, ahora es posible la amplificación en círculo giratorio con la agregación de la ADN polimerasa. En última instancia, se genera una señal muy amplificada ligada a la sonda de PLA. La selección de la tecnología adecuada de interacción entre proteínas y ácidos nucleicos vendrá determinada en gran medida por las aplicaciones posteriores que necesite realizar el investigador.