ABS1670

Antifosfohistidina (pHis)

from rabbit, purified by affinity chromatography

• Sinónimos: pHis, phosphohistidine
• UNSPSC Code: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41

Propiedades

• biological source: rabbit
• Quality Level: 100
• antibody form: affinity isolated antibody
• antibody product type: primary antibodies
• clone: polyclonal
• purified by: affinity chromatography
• species reactivity: all, human, sheep, mouse
• technique(s): ELISA: suitable; dot blot: suitable; immunoprecipitation (IP): suitable; western blot: suitable
• shipped in: ambient
• target post-translational modification: phosphorylation (pHis )
• Gene Information: human ... PHPT1(29085)

Descripción

General description

La fosforilación desempeña un papel importante en la regulación de las actividades proteicas y varios eventos de señalización celular. Limitados por las herramientas disponibles para la detección de fosfohistidina (pHis), la mayoría de los estudios se centran en las fosforilaciones de serina, treonina y tirosina. La fosforilación de la histidina puede producirse en el N1 (1-pHis) o el N3 (3-pHis) del anillo imidazol. El desarrollo de análogos fosforiltriazolilalanina estables de la pHis (pTza y pPza) permite la generación de anticuerpos para estudiar las fosforilaciones en histidina N1 y N3 de la histidina en los eventos de señalización. Cada vez hay más datos que involucran las His cinasas en el cáncer y las metástasis tumorales y el primer gen supresor de metástasis identificado es el correspondiente a una de las dos His cinasas de mamífero conocidas, la Nm23-H1 (también conocida como NME1, nucleósido difosfato cinasa, o NDPK-A). La Nm23-H1/NME1 y la estrechamente relacionada Nm23-H2 (NME2/NDPK-B) catalizan la transferencia de fosfato desde el ATP a los difosfato de nucleósidos (NDP) a través de un intermediario de la enzima 1-pHis. La Nm23-H1/-H2 también posee actividad His cinasa, transfiriendo el fosfato del sitio activo de la pHis a una His de una proteína diana. Las enzimas metabólicas como la fosfoglicerato mutasa (PGAM), la succinil CoA sintasa (SCS) y la ATP citrato liasa (ACL) también utilizan la pHis como intermediario enzimático. Por el contrario, NME1/2, PGAM utiliza la 3-pHis como intermediario enzimático. Además de en eucariotas, la fosforilación de la histidina está bien documentada en las vías de señalización bacterianas de dos componentes que intervienen en la quimiotaxis, aunque el fosfato es transferido desde la pHis formada en el receptor/proteína sensor hasta los residuos de Asp de una proteína reguladora de la respuesta aceptora, y el receptor/proteína sensor funciona esencialmente como una aspartato cinasa.

Specificity

Este anticuerpo policlonal de conejo reaccionó con pHis- y pPza-, pero no con His-, pTyr-, pSer- o pThr-, conjugada con BSA. Las pruebas de especificidad en las que se utilizó el análogo N1-pHis demostraron una mínima reactividad cruzada.

La modificación diana no es específica de especie.

Immunogen

Análogo de la fosfohistidina no hidrolizable conjugada con KLH 4-fosfopirazol-2-il alanina (pPza).

Application

Análisis mediante inmunotransferencia por puntos: una dilución 1:1 200 de un lote representativo detectó 5 µg de pHis- y pPza-, pero no de His-, pTyr-, pSer- ni pThr-, conjugada con BSA (Cortesía de Bezaleel Mambwe, Richmond Muimo y RFW Jackson, Department of Infection, Immunity and Cardiovascular Disease/ Department of Chemistry, University of Sheffield, Reino Unido).

Análisis mediante inmunoelectrotransferencia: una dilución 1:120 de un lote representativo detectó proteínas con fosforilación de histidina en extracto citosólico de tráquea ovina y lisados de células humanas, incluidas 16HBE14o-, HEK293T, THP-1 y los macrófagos derivados de THP-1 (cortesía de Bezaleel Mambwe, Richmond Muimo y RFW Jackson, Department of Infection, Immunity and Cardiovascular Disease/ Department of Chemistry, University of Sheffield, Reino Unido).

Análisis ELISA: un lote representativo detectó pHis- y pPza-, pero no pTyr-, pSer-, pThr-, conjugada o no conjugada con BSA (Lilley, M., et al (2015). Chem. Commun. (Camb). 51(34):7305-7308).

Análisis mediante inmunoprecipitación: un lote representativo causó inmunoprecipitación de proteínas con fosforilación de histidina a partir de extracto epitelial de las vías respiratorias ovinas (Lilley, M., et al (2015). Chem. Commun. (Camb). 51(34):7305-7308).
Análisis mediante inmunoelectrotransferencia: un lote representativo detectó proteínas fosforiladas en histidina en lisado de células epiteliales bronquiales 16HBE14o- humanas y en extracto epitelial de vías respiratorias ovinas. El tratamiento ácido (HCl 0,1 M o ácido acético 0,4 M/hidroxilamina 0,1 M ), pero no alcalino (NaOH 0,1 M) de los lisados abolió la detección de bandas diana (Lilley, M., et al (2015). Chem. Commun. (Camb). 51(34):7305-7308).
Análisis mediante inmunoelectrotransferencia: un lote representativo detectó fosforilación de histidina de NDPK-A/B inmunoprecipitada a partir de extracto epitelial de las vías respiratorias ovinas, así como G -R/M a partir de lisado de células epiteliales bronquiales humanas 16HBE14o- (Lilley, M., et al (2015). Chem. Commun. (Camb). 51(34):7305-7308).

Nota: NO CALIENTE LAS MUESTRAS antes de la detección de la fosfohistidina. La fosforilación de la histidina es lábil al calor y al ácido. Para generar un control negativo para la prueba de especificidad, se puede calentar una alícuota de la muestra a 95ºC durante 10-15 minutos para revertir la fosforilación de la histidina. Como alternativa, se puede incubar una alícuota de la muestra bajo pH acidificado a 37ºC durante 15 minutos para reducir la fosforilación de la histidina. Acidifique cada muestra de 100 µl con 25 µl de HCl 1 M antes de la incubación y, a continuación, neutralice con 25 µl de NaOH 1 M antes de detectar la fosfohistidina.

Categoría de investigación
Comunicación molecular

Detección de la fosforilación de la histidina utilizando este anticuerpo policlonal anti-fosfohistidina (pHis) de conejo, Nº de ref. ABS1670, validado para utilizar en inmunotransferencia por puntos, ELISA, inmunoprecipitación e inmunotransferencia Western.

Quality

Evaluada mediante inmunotransferencia Western en lisado de células HEK293.

Análisis mediante inmunoelectrotransferencia (western blot): una dilución 1:200 de este anticuerpo detectó proteínas fosforiladas en histidina en 10 µg de lisado de células HEK293.

Target description

Variable dependiendo de las proteínas fosforiladas en histidina.

Physical form

Anticuerpo policlonal de conejo purificado en tampón que contiene glicina 100 M, pH 2,2, Tris 100 mM pH 10 con azida sódica al 0,05 %.

Purificada por afinidad

Storage and Stability

Estable durante 1 año a 2-8°C desde la fecha de recepción.

Other Notes

Concentración: Consulte la ficha técnica específica del lote.

Disclaimer

Salvo que se indique lo contrario en nuestro catálogo o en otra documentación de la empresa que acompañe al producto, nuestros productos están indicados sólo para investigación y no deben utilizarse para ningún otro propósito, como, entre otros, usos comerciales no autorizados, diagnóstico in vitro, usos terapéuticos ex vivo o in vivo o cualquier tipo de consumo o aplicación en humanos o animales.

Información de seguridad

• Storage Class: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk_germany: WGK 1
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• flash_point_c: Not applicable