17-685
ChIPAb+ fosfo-histona H3 (Ser10) - Conjunto de anticuerpos y cebadores validados para ChIP
clone CMA312, from mouse, purified by using protein G
Sinónimos:
H3S10P, Histone H3 (phospho S10), H3 histone, family 3A
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About This Item
UNSPSC Code:
12352203
eCl@ss:
32160702
NACRES:
NA.32
Productos recomendados
General description
Todos los anticuerpos ChiPAb+ se validan individualmente para la precipitación de cromatina, en cada lote y en todo momento. Cada conjunto de anticuerpos ChiPAb+ incluye cebadores de control (probados en cada lote mediante qPCR) para validar biológicamente los resultados de IP en un contexto específico de locus. Se proporcionan el protocolo de qPCR y las secuencias de los cebadores, lo que permite a los investigadores validar los protocolos de ChIP al utilizar nuestro anticuerpo en su contexto de cromatina. Cada conjunto incluye también un anticuerpo de control negativo para garantizar la especificidad de la reacción de ChIP.
El conjunto de ChiPAb+ fosfo-histona H3 (Ser10) contiene el anticuerpo anti-fosfo-histona H3 (Ser10), un anticuerpo de control negativo (IgG de ratón purificada) y cebadores de qPCR que amplifican una región de 166 pb dentro del promotor del gen humano de la GAPDH. Los anticuerpos anti-fosfo-histona H3 (Ser10) y los controles negativos se suministran en un tamaño de reacción escalable «por ChIP» y pueden utilizarse para validar funcionalmente la precipitación de la cromatina asociada a la fosfo-histona H3 (Ser10).
El conjunto de ChiPAb+ fosfo-histona H3 (Ser10) contiene el anticuerpo anti-fosfo-histona H3 (Ser10), un anticuerpo de control negativo (IgG de ratón purificada) y cebadores de qPCR que amplifican una región de 166 pb dentro del promotor del gen humano de la GAPDH. Los anticuerpos anti-fosfo-histona H3 (Ser10) y los controles negativos se suministran en un tamaño de reacción escalable «por ChIP» y pueden utilizarse para validar funcionalmente la precipitación de la cromatina asociada a la fosfo-histona H3 (Ser10).
Specificity
La secuencia del inmunógeno es idéntica en una gran variedad de especies animales y vegetales, por lo que se espera mucha reactividad cruzada.
Reconoce la histona H3, Pm 17 kDa, fosforilada en la Ser10.
Immunogen
El inmunógeno era un péptido sintético correspondiente a los aminoácidos 1-19 de la histona H3 fosforilada en la Ser10.
Epítopo: aminoácidos 1-19
Application
Categoría de investigación
Epigenética y función nuclear
Epigenética y función nuclear
Este conjunto de cebadores y anticuerpos ChiPAb+ fosfohistona H3 (Ser10) validados con ChIP consta del anticuerpo y los cebadores de control específicos para PCR.
Inmunoprecipitación de la cromatina:
La cromatina tratada con ultrasonidos preparada a partir de células HeLa tratadas con colcemid (2 X 106 equivalentes por IP) se sometió a inmunoprecipitación utilizando 2 μl de IgG de ratón sano o anticuerpo anti-fosfo-histona H3 (Ser10) y el kit Magna ChIP G (Nº de ref. 17-611). La inmunoprecipitación satisfactoria de fragmentos de ADN asociados a la fosfo-histona H3 (Ser10) se verificó mediante qPCR utilizando cebadores control para muestras de cromatina tratadas y no tratadas (consultar las figuras). Los datos se presentan como porcentaje del "input" de cada muestra para IP con respecto a la cromatina de entrada para cada amplicon y muestra de ChIP, tal como se indica.
Para conocer los detalles experimentales, consulte los protocolos del kit EZ-Magna G ChIP (Nº de ref. 17-409) o del EZ-ChIP (Nº de ref. 17-371).
Análisis mediante inmunoelectrotransferencia (WB):
se resolvieron por electroforesis histona H3 recombinante o extractos ácidos de las células HeLa tratadas con colcemid (1 μg), se transfirieron a la membrana de PVDF y se probaron con anti-fosfohistona H3 (Ser10), clon CMA312. Las proteínas se visualizaron utilizando anticuerpo secundario de cabra anti-ratón conjugado con HRP y un sistema de detección de quimioluminiscencia (Véanse las figuras).
La cromatina tratada con ultrasonidos preparada a partir de células HeLa tratadas con colcemid (2 X 106 equivalentes por IP) se sometió a inmunoprecipitación utilizando 2 μl de IgG de ratón sano o anticuerpo anti-fosfo-histona H3 (Ser10) y el kit Magna ChIP G (Nº de ref. 17-611). La inmunoprecipitación satisfactoria de fragmentos de ADN asociados a la fosfo-histona H3 (Ser10) se verificó mediante qPCR utilizando cebadores control para muestras de cromatina tratadas y no tratadas (consultar las figuras). Los datos se presentan como porcentaje del "input" de cada muestra para IP con respecto a la cromatina de entrada para cada amplicon y muestra de ChIP, tal como se indica.
Para conocer los detalles experimentales, consulte los protocolos del kit EZ-Magna G ChIP (Nº de ref. 17-409) o del EZ-ChIP (Nº de ref. 17-371).
Análisis mediante inmunoelectrotransferencia (WB):
se resolvieron por electroforesis histona H3 recombinante o extractos ácidos de las células HeLa tratadas con colcemid (1 μg), se transfirieron a la membrana de PVDF y se probaron con anti-fosfohistona H3 (Ser10), clon CMA312. Las proteínas se visualizaron utilizando anticuerpo secundario de cabra anti-ratón conjugado con HRP y un sistema de detección de quimioluminiscencia (Véanse las figuras).
Subcategoría de investigación
Biología de la cromatina
Histonas
Biología de la cromatina
Histonas
Packaging
25 ensayos por juego. Uso recomendado: ~2 μg de anticuerpo por inmunoprecipitación de la cromatina (dependiente del contexto biológico).
Quality
Inmunoprecipitación de la cromatina:
La cromatina tratada con ultrasonidos preparada a partir de células HeLa tratadas con colcemid (1 X 106 equivalentes por IP) se sometió a inmunoprecipitación utilizando 2 µl de IgG de ratón sano o anticuerpo anti-fosfo-Histona H3 (Ser10) y el kit Magna ChIP® G (Nº de ref. 17-611). La inmunoprecipitación satisfactoria de fragmentos de ADN asociados a la fosfo-histona H3 (Ser10) se verificó mediante qPCR utilizando cebadores control (consulte las figuras).
Para conocer los detalles experimentales, consulte los protocolos del kit EZ-Magna ChIP G (Nº de ref. 17-409) o del EZ-ChIP (Nº de ref. 17-371).
La cromatina tratada con ultrasonidos preparada a partir de células HeLa tratadas con colcemid (1 X 106 equivalentes por IP) se sometió a inmunoprecipitación utilizando 2 µl de IgG de ratón sano o anticuerpo anti-fosfo-Histona H3 (Ser10) y el kit Magna ChIP® G (Nº de ref. 17-611). La inmunoprecipitación satisfactoria de fragmentos de ADN asociados a la fosfo-histona H3 (Ser10) se verificó mediante qPCR utilizando cebadores control (consulte las figuras).
Para conocer los detalles experimentales, consulte los protocolos del kit EZ-Magna ChIP G (Nº de ref. 17-409) o del EZ-ChIP (Nº de ref. 17-371).
Target description
17 kDa
Physical form
Anti-fosfohistona H3 (Ser10) (IgG monoclonal de ratón, Clon CMA312). Un vial que contiene 50 μg de anticuerpo purificado en proteína G en 50 μl de PBS que contiene sodio al 0,05 %. Conservar a -20°C.
IgG de ratón sano. Dos viales que contienen 25 μg de IgG de ratón purificada en 25 μl de tampón de almacenamiento que contiene azida sódica al 0,1 %. Conservar a -20°C.
Cebadores de control. Un vial que contiene 75 μl de 5 μM de cada cebador específico para la región promotora de la GAPDH humana. Conservar a -20°C.
DIR: TAC TAG CGG TTT TAC GGG CG
INV: TCG AAC AGG AGG AGC AGA GAG CGA
IgG de ratón sano. Dos viales que contienen 25 μg de IgG de ratón purificada en 25 μl de tampón de almacenamiento que contiene azida sódica al 0,1 %. Conservar a -20°C.
Cebadores de control. Un vial que contiene 75 μl de 5 μM de cada cebador específico para la región promotora de la GAPDH humana. Conservar a -20°C.
DIR: TAC TAG CGG TTT TAC GGG CG
INV: TCG AAC AGG AGG AGC AGA GAG CGA
Storage and Stability
Estable durante 1 año a 2-8°C desde la fecha de recepción. Recomendaciones de manipulación: Tras la primera descongelación, y antes de quitar la tapa, centrifugue el vial y mezcle suavemente la disolución. Distribúyalo en alícuotas en tubos de microcentrífuga y guárdelo a -20°C. Evite ciclos repetidos de congelación y descongelación que pueden dañar la IgG y afectar al rendimiento del producto.
Analysis Note
Control
Incluye anticuerpos IgG de ratón de control negativo y cebadores de control específicos para el promotor de la GAPDH humana.
Incluye anticuerpos IgG de ratón de control negativo y cebadores de control específicos para el promotor de la GAPDH humana.
Legal Information
MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
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Storage Class
10 - Combustible liquids
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