用於 DNA 檢測和定量的 Nancy-520

Monika Baeumle

Nancy-520是瓊脂糖電泳膠上雙股DNA (dsDNA)的螢光染色劑，靈敏度比溴化乙啶高，染色程序簡單、快速、穩定。根據 Ames 測試，它的致突變性比溴化乙啶和 SYBR^® Green I 低。Nancy-520 的最大激發波長為 520 nm，最大發射波長為 560 nm (圖 1)。Nancy-520 以 5000 倍的儲備溶液（500 μL）提供，足夠 50 個瓊脂糖凝膠使用。檢測限為 0.5 ng/band dsDNA。此外，Nancy-520 可用於測定溶液中的 dsDNA 濃度

。

圖 1. Nancy-520 在 dsDNA 存在下的歸一化螢光激發（紅色）和發射（藍色）光譜，在 Varian Cary® Eclipse 螢光分光光度計上的比色皿中，以 2 mL TBE、pH 8.3 測量。激發光譜是在固定的 560 nm 發射波長下測量，而發射光譜則是在固定的 520 nm 激發波長下測量。

DNA 染色

Nancy-520可用於琼脂糖凝膠上 DNA 的標準電泳後染色應用。電泳後，在黑暗中將凝膠染色 1 小時。凝膠的螢光圖像可在短時間沖洗後直接檢測（圖 2）。另外，Nancy-520 也可以用於電泳前染色，只需在倒入凝膠前將染料加入液體琼脂糖中即可。電泳完成後，凝膠可直接成像，不需任何其他步驟。Nancy-520 擁有比 SYBR^® Green 更多的檢測可能性。Nancy-520比SYBR^® Green有更多的檢測可能性，檢測方法是在UV螢幕上照亮凝膠，或使用Dark Reader^®，並使用CCD相機（例如、KODAK^® Gel-Logic-100)或寶麗來^® 相機進行成像。另外，也可以使用雷射掃描器 (例如 Fuji^® FLA-3000)，搭配 473 奈米的激發設定和 520 奈米的發射濾光片，或搭配 532 奈米的激發設定和 580 奈米的發射濾光片。其他成像系統也可以使用類似的激發源和發射濾光器設定。

圖二 以 2 種不同濃度的 DNA 標記 (Lambda DNA Hind III digest) 在 1% 瓊脂糖凝膠上分離，電泳後以 Nancy-520 染色，並在 2 種不同條件下成像。左圖：λex UV-Screen (300 nm)/λem 590 nm bandpass filter/CCD camera。右圖：雷射掃描器 Fuji FLA-3000/λex 532 奈米/λem 580 奈米截止濾光片。

溶液中的DNA定量

Nancy-520可用於測定溶液中的dsDNA濃度。此應用可在玻璃底 96 孔板中進行，使用已知濃度的 dsDNA 作為標準。Nancy-520 的線性檢測範圍為 0-2 μg/mL 的 DNA（圖 3）。

圖 3. 使用 Nancy-520 在 96 孔板中對溶液中的 DNA（Lambda DNA Pst I Digest）進行定量。使用 532 nm 激發和 580 nm 發射濾光片的雷射掃描儀 (FLA-3000,Fuji) 測量螢光。圖中顯示在 pH 7.5 的 TE 緩衝液中不同濃度的 DNA 及其相應的螢光值。