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Merck

T4799

Sigma-Aldrich

Tripsina from porcine pancreas

lyophilized powder, BioReagent, suitable for cell culture, 1,000-2,000 BAEE units/mg solid

Sinónimos:

Cocoonase, Tryptar, Tryptase

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About This Item

Número de CAS:
Comisión internacional de enzimas:
EC Number:
MDL number:
UNSPSC Code:
12352204
NACRES:
NA.75

biological source

Porcine pancreas

product line

BioReagent

form

lyophilized powder

specific activity

1,000-2,000 BAEE units/mg solid

mol wt

23.8 kDa

concentration

25 mg/mL

technique(s)

cell culture | mammalian: suitable
single cell analysis: suitable

pH

7.6

shipped in

ambient

storage temp.

−20°C

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General description

La tripsina puede utilizarse para la desagregación tisular, debido a su acción efectiva y su tolerancia hacia diferentes tipos de células y neutralización inducida por suero.

Application

La tripsina del páncreas porcino se ha utilizado para digerir huesos de pollo. También se ha utilizado en el aislamiento de las células del endotelio luteínico.
Para la digestión de los péptidos con tripsina, utilice una proporción de aproximadamente 1:100 a 1:20 de tripsina:péptido. La utilización habitual de este producto es la separación de las células adherentes de una superficie de cultivo. La concentración necesaria de tripsina para separar las células de su sustrato depende fundamentalmente del tipo de célula y de la edad del cultivo. También se han utilizado tripsinas para la re-suspensión de células durante el cultivo celular, en investigación en proteómica para la digestión de proteínas y en varias digestiones en gel†. Otras aplicaciones son la evaluación de la cristalización mediante técnicas de membrana y en un estudio para determinar que las tasas de plegado y los rendimientos de las proteínas pueden limitarse por la presencia de trampas cinéticas.

Biochem/physiol Actions

La tripsina rompe los péptidos por el lado C-terminal de los restos de lisina y de arginina. La velocidad de hidrólisis de esta reacción se reduce si a cada lado del punto de rotura hay un residuo ácido, y la hidrólisis se interrumpe si en el lado carboxilo del sitio de ruptura hay un resto de prolina. El pH óptimo de actividad de la tripsina es 7-9. La tripsina también puede actuar rompiendo las uniones éster y amida de los derivados sintéticos de aminoácidos. Se añade EDTA a las disoluciones de tripsina como agente quelante que neutraliza los iones de calcio y de magnesio, los cuales ocultan los enlaces peptídicos sobre los que actúa la tripsina. La eliminación de esos iones aumenta la actividad enzimática.

Los inhibidores de las proteasas de serina, como DFP, TLCK, APMSF, AEBSEF y la aprotinina, entre otros, inhibirán la tripsina.

Components

La tripsina consiste en una sola cadena polipeptídica de 223 restos de aminoácidos, producida por la eliminación del hexapéptido N-terminal del tripsinógeno, que es hidrolizado en el enlace peptídico entre Lys e Ile. La secuencia de aminoácidos está entrecruzada por 6 puentes disulfuro. Esta es la forma nativa de la tripsina, la beta-tripsina. La BETA-tripsina puede autolisarse, rompiendo en el resto Lys - Ser, para producir alfa-tripsina. La tripsina es miembro de la familia de proteasas de serina.

Caution

Las disoluciones en HCl 1 mM son estables durante 1 año en alícuotas y conservadas a -20°C. La presencia de Ca2+ también reducirá la autólisis de la tripsina y mantendrá su estabilidad en disolución. La tripsina retendrá también la mayor parte de su actividad en urea 2,0 M, HCl de guanidina 2,0 M o SDS al 0,1 % (p/v).

Unit Definition

Una unidad BAEE producirá una ΔA253 de 0,001 por min a pH 7,6 y 25°C utilizando BAEE como sustrato. Una unidad BTEE = 320 unidades ATEE. Volumen de reacción = 3,2 ml (trayectoria de la luz 1 cm).

Preparation Note

Este producto es un polvo liofilizado soluble en disolución salina equilibrada de Hank a 25 mg/ml.
Para aplicaciones que requieran EDTA, la solubilización de la tripsina debe realizarse con una disolución salina tamponada que no contenga Ca2+ ni Mg2+.

pictograms

Health hazardExclamation mark

signalword

Danger

Hazard Classifications

Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3

target_organs

Respiratory system

Storage Class

11 - Combustible Solids

wgk_germany

WGK 1

ppe

dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves


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Protocolos

Continuous spectrophotometric rate determination method using BAEE substrate measures trypsin activity, essential for enzyme characterization.

Continuous spectrophotometric rate determination method using BAEE substrate measures trypsin activity, essential for enzyme characterization.

Continuous spectrophotometric rate determination method using BAEE substrate measures trypsin activity, essential for enzyme characterization.

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