PCR反应需要多种关键试剂，包括用于扩增的模板序列、dNTPS、缓冲液和Taq DNA聚合酶，通过酶促的方式促进dNTPS的插入并最终生成目标序列的新拷贝。热启动PCR方法和试剂的基本原理在于，它们被设计为在反应构建过程中抑制热启动Taq聚合酶活性或修饰dNTP聚合，直至热激活步骤启动。控制热启动聚合酶的活性的方法多样，包括化学修饰、抗体介导及适配体介导技术。如需更多信息，请观看我们的热启动PCR视频，其对热启动PCR技术及其如何提高靶标特异性和产量进行了进一步的解释。
热启动PCR实验方案
热启动PCR、巢式PCR和多重PCR的优点
热启动PCR的优点包括便捷的室温构建，而无非特异性扩增和引物二聚体形成，这两者都会降低靶序列特异性和整体产率。 其他PCR方法，如巢式PCR或多重PCR，采用了不同的试剂和策略来针对一个或多个扩增子实现特异性和高产量。巢式PCR采用了两对引物，第一轮扩增中使用的第一对引物直接靶向的是目标序列的两侧区域。第二对引物特异性针对的是由第一轮扩增得到的目标序列，其随后通过使用巢式引物会被用作第二轮PCR的模板。多重PCR采用的是具有高度特异性的多个引物对，在同一反应中同时扩增多个目标序列。每种PCR方法都有一系列的优点，应针对研究人员的特定需求进行选择。
KOD热启动DNA聚合酶和预混液
KOD热启动DNA聚合酶是KOD DNA聚合酶的一种预混复合物，其利用两种高度特异性的单克隆抗体来抑制3′→5′外切酶活性。KOD热启动DNA聚合酶可消除引物错配以及引物二聚体的形成，是基因组DNA模板（最长12 kb）、质粒和lambda DNA模板（最长21 kb）进行长链扩增的理想试剂。KOD Xtreme热启动DNA聚合酶使用的是一种优化的酶用于PCR扩增长片段、高GC模板，可成功扩增来自粗制或难扩增样本的模板，包括植物组织和小鼠尾尖。此外，我们的KOD热启动预混液将KOD热启动DNA聚合酶、dNTP和优化的反应缓冲液进行了组合，以2X即用型混合液的形式提供了一种一体化的解决方案。
KOD热启动基因组和Lambda DNA扩增
左图展示的是使用KOD热启动DNA聚合酶对基因组DNA模板进行人肌球蛋白重链基因（8.4kb）和人β珠蛋白基因（12.3kb）的扩增。右图展示的是采用适当的引物和KOD热启动DNA聚合酶对lambda DNA进行扩增。M = 分子量标记
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FastStart™ Taq DNA聚合酶和高保真PCR系统
FastStart™ Taq DNA聚合酶是单靶标热启动PCR扩增及多种应用的理想选择。此外，FastStart™高保真PCR系统利用的是FastStart™ Taq DNA聚合酶和一种化学修饰、热稳定性校正蛋白的混合物。FastStart™聚合酶和校正蛋白在75 °C以下均无活性，仅需加热至95 °C后两分钟，便可通过去除封闭基团而实现激活。
采用FastStart™高保真PCR系统扩增人基因组DNA
使用人基因组DNA扩增4.8 kb的tPA基因片段。相对于来自其他两家供应商的酶，FastStart™高保真PCR系统扩增表现出了更高的灵敏度和特异性。
JumpStart™ Taq ReadyMix™和Taq DNA聚合酶
JumpStart™ Taq聚合酶采用的抗体介导的抑制原理，仅在反应达到70 °C而抗体从酶上解离后才会被激活。抗体-酶复合物可允许便捷的室温构建，并对于标准的热启动PCR、qPCR和多重PCR具有更低的非特异性扩增。此外，JumpStart™ Taq ReadyMix™具有与JumpStart™酶相同的特点，并结合了由具有惰性凝胶上样染料选择的ReadyMix™ PCR反应预混液所带来的其他所有PCR所需成分。
采用JumpStart™ REDTaq® ReadyMix™反应预混液扩增Lambda噬菌体
采用Sigma的JumpStart REDTaq ReadyMix™（奇数泳道）和竞品Direct Load ReadyMix（偶数泳道）扩增200 ng的Lambda噬菌体DNA。
AptaTaq™ Fast DNA聚合酶和AptaTaq™ Fast PCR预混液
其他热启动PCR反应都使用抗体介导的方法或化学修饰的DNA Taq聚合酶，而AptaTaq™ Fast DNA聚合酶采用了适配体技术来抑制室温反应构建时的非特异性扩增。此外，AptaTaq™ Fast PCR预混液可便捷地提供适配体介导地热启动Taq聚合酶和除DNA模板和引物之外的所有其他试剂，用于实现快速的反应构建和更快的反应时间。AptaTaq™ Fast DNA聚合酶的激活温度高于70 °C，是特异性引物配对和快速PCR应用的理想选择。
采用AptaTaq™ Fast PCR预混液进行PCR扩增
相对于竞品预混液，采用AptaTaq™ Fast PCR预混液的PCR反应表现出了更好的扩增效果。
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