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DUO92009

Sigma-Aldrich

Duolink® 原位探针器 PLUS

别名:

in situ Proximity Ligation Assay reagent, Protein Protein Interaction Assay reagent

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About This Item

分類程式碼代碼:
12352200
NACRES:
NA.32

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產品線

Duolink®

品質等級

200

技術

immunofluorescence: suitable
proximity ligation assay: suitable

適合性

suitable for brightfield
suitable for fluorescence

運輸包裝

wet ice

儲存溫度

−20°C

相关类别

應用

在标准免疫荧光（IF）、免疫组织化学（IHC）或免疫细胞化学（ICC）检测中测试您的一抗（IgG类，单克隆或多克隆），以确定最佳的固定、封闭和滴度条件。Duolink® 原位试剂适用于固定的细胞、离心涂片细胞、载玻片上生长的细胞、福尔马林固定或石蜡包埋（FFPE）的组织（新鲜或冷冻）。无最小细胞数量要求。

让我们为您完成相关工作，了解更多关于我们定制服务计划的相关信息，以加速您的Duolink®项目

查看完整的Duolink®产品列表
要执行完整的 Duolink ® PLA 原位 实验，您将需要识别两个目标抗原决定簇的两种一抗 （PLA、IHC、ICC 或如果经验证）。其他必要的试剂包括来自不同物种的一对 PLA 探针（一个正一个负）、检测试剂、清洗缓冲液和封固剂。请注意，一抗必须来自与 Duolink ® PLA 探针相同的物种。使用标准免疫荧光分析设备进行分析。HRP 也可用于明场检测。

特异性
Duolink ® 原位 Probemaker 通过允许您创建自己的 PLA 探针来满足特定的检测要求，从而进一步扩展了您的可能性。
  • 研究同源二聚体
  • 研究来源于同一物种的两种一抗的蛋白质-蛋白质相互作用
  • 研究与任何物种一抗的蛋白质-蛋白质相互作用

使用 Duolink®原位 Probemaker 加号、减号探针，您只需将加号、减号寡核苷酸臂直接偶联到您的抗体上，即可快速方便地操作。除了提供独特的功能，这也意味着在执行 Duolink ® 原位检测时，您的一抗必须来自于哪个物种不再有任何限制。

应用说明
待偶联抗体的浓度必须为 1 mg/mL。不得使用大于 20 mL 的体积进行偶联。抗体必须在无胺缓冲液中，理想的 PBS。缓冲液应不含载体，但可能含有 0.1%BSA、5% 海藻糖和 0.02% 叠氮化钠。
  • 使用分成两半的单克隆抗体研究同源二聚体。一个用加性寡核苷酸标记，另一个用负性寡核苷酸标记。
  • 使用来自相同种属的抗体：使用来自相同种属的两种一抗研究蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质修饰或单一蛋白质。用正寡核苷酸标记其中一种抗体，用负寡核苷酸标记另一种抗体
  • 使用来自任何物种的抗体：研究蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质修饰或单一蛋白质，使用来自小鼠、兔或山羊以外物种的一种或两种一抗。用正寡核苷酸标记您的一个二抗，用负寡核苷酸标记另一个二抗。或者，将一种标记的二抗与标准二抗 Duolink®原位 PLA 探针结合。

在标准免疫荧光 (IF)、免疫组织化学 (IHC) 或免疫细胞化学 (IHC) 分析中测试您的初级抗体（IgG类、单克隆或多克隆），以确定最佳固定、阻断和滴度条件。Duolink® 原位试剂适用于固定细胞、细胞离心涂片器细胞、载玻片上生长的细胞、福尔马林固定的、石蜡包埋 (FFPE) 或组织（新鲜或冷冻）。没有要求最小数量的细胞。

让我们替您做这些工作，了解更多关于我们的客户服务计划的信息，以加速您的Duolink®项目

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特點和優勢

  • 不需要过度表达或基因操作
  • 高特异性（假阳性更少）
  • 滚环扩增导致的单分子灵敏度
  • 相对量化是可能的
  • 不需要特殊设备
  • 比FRET更快更简单
  • 与co-IP相比，准确性更高
  • 可发布的结果

成分

本产品由以下成分组成：
  • Duolink ® 原位寡核苷酸 PLUS – 一瓶冻干的活化 PLUS 寡核苷酸，用于 20 μg 抗体的一次偶联
  • 偶联缓冲液 – 用于偶联反应的缓冲液
  • 终止试剂-终止偶联反应
  • 保存液 – 保存制备的 PLA 探针的缓冲液（偶联抗体）
  • 20x 检定试剂– 加入实验者优化抗体稀释液的试剂
  • 封闭液-用 Duolink ® 原位染色前封闭样本
  • PLA 探针稀释液-用于将 PLA 探针（结合抗体）稀释至最终试验浓度的缓冲液
有关更多信息，请参见数据表。

其他說明

Duolink®邻位连接技术（PLA®）允许在固定细胞和组织样本中内源检测单分子水平的蛋白质相互作用、翻译后修饰和蛋白表达水平。

遵照 Duolink ® Probemaker 方案 使用 Duolink ®原位探针制造商 PLUS 和 MINUS。本产品可应用于 Duolink ® 原位荧光方案 和 Duolink ® 原位明场方案 ，具体取决于使用的检测试剂。有关详细信息，请参阅 创建您自己的 (PLA ®) 探测 。

请访问我们的Duolink® PLA资源中心了解如何运行Duolink®实验、应用、故障排除等信息。

法律資訊

Duolink is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
PLA is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

象形圖

Exclamation markEnvironment
GHS07,GHS09

訊號詞

Warning

危險聲明

H317,H411

危險分類

Aquatic Chronic 2 - Skin Sens. 1

儲存類別代碼

10 - Combustible liquids

水污染物質分類（WGK）

WGK 3

历史批次信息供参考:

分析证书(COA)

Lot/Batch Number
0000384578
0000369918
0000353591
0000326546
0000310642

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Nature microbiology, 4(7), 1196-1207 (2019-04-03)
Numerous human APOBEC3 cytidine deaminases have proven to be, inter alia, host cell restriction factors for retroviruses and hepadnaviruses. Although they can bind to genomic RNA and become encapsidated, they are only catalytically active on single-stranded DNA. As there are
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The in situ proximity ligation assay (PLA) allows a protein or protein complex to be represented as an amplifiable DNA molecule. Recognition is mediated by proximity probes consisting of antibodies coupled with oligonucleotides. Upon dual binding of the proximity probes
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The Prostate, 73(2), 219-226 (2012-07-19)
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如何优化 Duolink® 邻位连接实验

正确地准备、设置和执行 Duolink® PLA 实验方案需要考虑的因素。

How to Optimize the Duolink® Proximity Ligation Assay

Things to consider for preparation, setup and execution of the Duolink® assay protocol

Duolink® PLA Troubleshooting Guide

Support information including tips and tricks, frequently asked questions, and basic troubleshooting.

Duolink® PLA故障排除指南

包括建议和技巧、常见问题解答和基本故障排除的支持信息。

实验方案

如何创建PLA®探针

Duolink®试剂盒使用原位PLA®技术（一种邻位连接检测技术）准确、客观地量化单个蛋白质，以及这些蛋白在未修饰细胞和组织中的互作和修饰。

Creating PLA® Probes

Duolink® kits use in situ PLA® technology for accurate quantification of individual proteins, interactions, and modifications in cells and tissue.

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Duolink® PLA Applications

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Questions

1–2 of 2 Questions  

  1. What is the recommended concentration range for Probemaker conjugated PLA secondary antibodies?

    1 answer

    1. When following the Probemaker protocol, starting with a 1mg/mL secondary antibody, the final probe should be about 0.35mg/mL. Most secondaries are used in the 1 - 2 ug/mL range, so you can start with a 1:100 or 1:200 dilution of the probe for secondaries and optimize from there.

      As for the primary antibody, every primary antibody is different, so it's hard to give a starting dilution for a primary since it can vary widely. Unfortunately, that will need to be empirically determined, but a similar concentration to what you typically use in immunofluorescence would be a great place to start.

      Helpful?

  2. I ordered the DUO94102 Duolink® flowPLA Mouse/Rabbit Starter Kit - Green. I was wondering if I could add Duolink® In Situ Probemaker PLUS and use it not for in situ but flow cytometry PLA. Indeed, I would need to use two antibodies from the same species.

    1 answer

    1. Unfortunately, the In Situ Probemaker is not compatible with the flowPLA kit. The same is true for the reverse. These items are not interchangeable between flow and in situ.

      Helpful?

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