Cromatografía de líquidos de baja presión

Cromatografía de adsorción

También conocida como cromatografía de líquido-sólido, la cromatografía de adsorción retiene sustancias químicas mediante su adsorción y desorción en la superficie del soporte, la fase estacionaria. El adsorbente constituye la fase estacionaria y el soluto se une a él mediante fuerzas de Van der Waal e interacciones estéricas. Dado que los sitios de adsorción suelen encontrarse en la superficie exterior de la fase estacionaria, se utilizan partículas relativamente pequeñas como fase estacionaria. Sílice, alúmina, carbón vegetal, Florisil, poliamidas, celite y tierra de diatomeas son los adsorbentes más utilizados.

Cromatografía de reparto

La cromatografía de reparto permite la separación mediante la distribución de los componentes entre dos líquidos no miscibles. Uno es la fase móvil líquida, mientras que el otro es el líquido que se mantiene estacionario sobre un soporte sólido. Entre los materiales utilizados como soporte sólido se cuentan el gel de sílice, la tierra de diatomeas, la celulosa, el politetrafluoroetileno (PTFE) y el poliestireno. El soporte sólido inerte proporciona una gran superficie para la fase estacionaria líquida.

Cromatografía de afinidad

La cromatografía de afinidad separa los constituyentes mediante interacciones selectivas y reversibles, como pares anticuerpo-antígeno, enzima-sustrato u hormona-receptor, con uno de los agentes interactuantes como fase estacionaria. El "ligando de afinidad" es la especie que interactúa inmovilizada sobre un soporte sólido, como microesferas acrílicas, agarosa y resinas Toyopearl, y sirve de fase estacionaria para la columna de afinidad.

Cromatografía de filtración en gel

También conocida como cromatografía de exclusión por tamaño, separa moléculas de distinto tamaño, como proteínas de diferentes tamaños y formas oligoméricas. La fase estacionaria es una resina constituida por una matriz reticulada de microesferas que contienen poros de un tamaño específico. Las columnas de filtración en gel contienen microesferas de poliacrilamida, agarosa, dextrano o una mezcla de cualquiera de ellas. Aísla los analitos más pequeños proporcionando un acceso parcial o total al volumen de poros dentro de las partículas de relleno de la columna.

Cromatografía de interacción hidrófoba (HIC)

La cromatografía de interacción hidrófoba (HIC) separa biomoléculas en función de las diferencias de hidrofobicidad de su superficie. Se basa en la interacción de grupos hidrófobos no polares unidos a la resina de la columna, como butilo, octilo o fenilo, con los grupos hidrófobos de las biomoléculas. Se utiliza mucho para separar proteínas al tiempo que se preserva su actividad biológica, ya que utiliza condiciones y matrices menos desnaturalizantes.

Cromatografía de intercambio iónico (IEX)

La cromatografía de intercambio iónico permite separar las moléculas en función de sus diferencias en carga superficial neta. La superficie de la matriz, como la celulosa, la sílice o el estireno-divinilbenceno, está unida covalentemente a grupos funcionales cargados. Los grupos de intercambio iónico inmovilizados de la resina interactúan con moléculas que tienen cargas opuestas. En la cromatografía de intercambio catiónico, las especies con carga positiva de la fase móvil se unen a una resina de intercambio iónico con carga negativa. En la cromatografía de intercambio aniónico, las especies con carga negativa de la fase móvil se unen a las cargas positivas de la resina de intercambio iónico.

Sistema de cromatografía de líquidos a baja presión

Un sistema de cromatografía de líquidos de baja presión (LPLC) suele constar de una columna llena de una fase estacionaria para la separación, una bomba para distribuir la fase móvil a través de la columna a caudales controlados y un detector para medir el eluyente a su salida de la columna.
Los sistemas de LPLC también incorporan un sistema de inyección para introducir la muestra en la corriente de fase móvil, lo que garantiza una introducción precisa y reproducible de la muestra. Algunas configuraciones incluyen un colector de fracciones para recoger los componentes separados para su ulterior análisis.