MABF959

Przeciwciało anty-CD47, klon C5/D5

clone C5/D5, from mouse

• Synonim(y): Leukocyte surface antigen CD47, Antigenic surface determinant protein OA3, CD47, IAP, Integrin-associated protein, Protein MER6
• Kod UNSPSC: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41

Właściwości

• pochodzenie biologiczne: mouse
• Poziom jakości: 100
• forma przeciwciała: purified immunoglobulin
• rodzaj przeciwciała: primary antibodies
• klon: C5/D5, monoclonal
• reaktywność gatunkowa: human
• metody: flow cytometry: suitable
• izotyp: IgG1κ
• numer dostępu NCBI: NP_001768
• numer dostępu UniProt: Q08722
• Warunki transportu: ambient
• docelowa modyfikacja potranslacyjna: unmodified
• informacje o genach: human ... CD47(961)

Opis

Opis ogólny

Antygen powierzchniowy leukocytów CD47 (UniProt Q08722; znany również jako antygenowe białko determinujące powierzchnię OA3, CD47, IAP, białko związane z integryną, białko MER6) jest kodowany przez gen CD47 (znany również jako MER6) (identyfikator genu 861) u człowieka. Pierwotnie zdefiniowana jako marker specyficzny dla raka jajnika, CD47 jest wieloprzezbłonową glikoproteiną ulegającą szerokiej ekspresji na wszystkich komórkach krwiotwórczych i większości innych typów komórek. CD47 odgrywa rolę w adhezji komórek za pośrednictwem αvβ3 i napływie Ca2+, a także w aktywacji płytek krwi poprzez interakcję z trombospondyną-1. Ponadto CD47 moduluje migrację neutrofili jednojądrzastych (PMN) przez monowarstwy śródbłonka i nabłonka. Wykazano, że szybkość migracji PMN stymulowanej fMLP jest zmniejszona przez blokadę funkcjonalną CD47 po leczeniu przeciwciałem neutralizującym, co można częściowo odwrócić przez hamowanie PI3K. Po stymulacji fMLP i po transmigracji PMN wykazano, że cząsteczki CD47 pochodzące z granulek wtórnych gromadzą się na błonie plazmatycznej, co skutkuje zwiększoną immunoreaktywnością CD47 na powierzchni komórki. CD47 jest wytwarzany z sekwencją peptydu sygnałowego (a.a. 1-18), która jest usuwana potranslacyjnie w celu uwolnienia 5-transbłonowego (a.a. 142-162, 177-197, 208-228, 236-256, 269-289) białka z jego N-końcowym końcem (a.19-141), składającym się prawie w całości z domeny podobnej do Ig typu V (a.a. 19-127), eksponowanym zewnątrzkomórkowo i jego C-końcowym końcem (a.a. 290-323) po stronie cytoplazmatycznej.

Specyficzność

Klon C5/D5 (C5D5) neutralizował sygnalizację komórkową zależną od CD47 poprzez celowanie w ludzką domenę zewnątrzkomórkową CD47 (Liu, Y., et al. (2001). J. Biol. Chem. 276(43). W przeciwieństwie do klonu PF3.1 (nr kat. MABF958), klon C5/D5 jest odpowiedni do neutralizowania sygnalizacji komórkowej zależnej od CD47, ale nie nadaje się do immunoblottingu, podczas gdy oba klony mogą barwić powierzchnię komórki CD47.

Immunogen

Epitop: domena zewnątrzkomórkowa

Preparat błony komórkowej ludzkich komórek nabłonka jelitowego T84 (Parkos, C.A., et al. (1996). J. Cell Biol. 132(3):437-450).

Zastosowanie

Analiza ELISA: Reprezentatywna partia wykryła powinowactwo oczyszczonego CD47 za pomocą standardowego testu ELISA, a także zwiększoną immunoreaktywność powierzchniową CD47 na monowarstwie T84 i HT29 (subklon Cl 19.A) za pomocą "ELISA komórkowego" po stymulacji IFN- (Parkos, C.A., et al. (1996). J. Cell Biol. 132(3):437-450).

Analiza cytometrii przepływowej: Reprezentatywna partia wykryła ekspresję egzogennie transfekowanego ludzkiego CD47 na powierzchni komórek CaCO2 (Liu, Y., et al. (2001). J. Biol. Chem. 276(43):40156-40166).

Analiza cytometrii przepływowej: Reprezentatywne partie wykryły immunoreaktywność powierzchniową CD47 ludzkich neutrofili polimorfojądrowych (PMN), która była zwiększona po stymulacji fMLP (Liu, Y., et al. (2001). J. Biol. Chem. 276(43):40156-40166; Parkos, C.A., et al. (1996). J. Cell Biol. 132(3):437-450).

Oczyszczanie metodą immunopowinowactwa: Reprezentatywną partię unieruchomiono na żywicach i zastosowano do oczyszczania powinowactwa CD47 z lizatu HT29 (podklon Cl 19.A) (Parkos, C.A., et al. (1996). J. Cell Biol. 132(3):437-450).

Analiza immunocytochemiczna: Reprezentatywna partia immunobarwiła podstawno-boczne powierzchnie utrwalonych metanolem monowarstw CaCO2 wyrażających egzogennie transfekowany ludzki CD47 metodą immunocytochemii fluorescencyjnej (Liu, Y., et al. (2001). J. Biol. Chem. 276(43):40156-40166).

Analiza immunocytochemiczna: Reprezentatywna partia immunobarwiła błonę podstawno-boczną utrwalonej paraformaldehydem monowarstwy ludzkich komórek nabłonka jelitowego T84 metodą immunocytochemii fluorescencyjnej (Parkos, C.A., et al. (1996). J. Cell Biol. 132(3):437-450).

Analiza immunofluorescencyjna: Reprezentatywna partia immunobarwiła krypty okrężnicy i leukocyty lamina propria w podstawnych i bocznych, ale nie wierzchołkowych, aspektach nabłonka w utrwalonych paraformaldehydem zamrożonych skrawkach ludzkiej tkanki okrężnicy metodą immunohistochemii fluorescencyjnej (Parkos, C.A., et al. (1996). J. Cell Biol. 132(3):437-450).

Analiza immunoprecypitacji: Reprezentatywna partia immunoprecypitowała ~60-65 kDa glikozylowanego CD47 z lizatu ludzkich komórek nabłonka jelitowego T84. Docelowy rozmiar pasma zmniejszył się do ~35 kDa po deglikozylacji przez traktowanie N glikozydazą F (Parkos, C.A., et al. (1996). J. Cell Biol. 132(3):437-450).

Analiza neutralizująca: Reprezentatywne partie powodowały opóźnienie migracji ludzkich neutrofili polimorfojądrowych (PMN) przez spolaryzowane monowarstwy ludzkich komórek nabłonka jelitowego T84 w sposób dwukierunkowy, bez wpływu na neutrofile PMN lub adhezję T84. Inhibitor fosforylacji tyrozyny genisteina zapobiegał opóźnieniu przez klon C5/D5 (Liu, Y., et al. (2001). J. Biol. Chem. 276(43):40156-40166; Parkos, C.A., et al. (1996). J. Cell Biol. 132(3):437-450).

To mysie monoklonalne przeciwciało anty-CD47, klon C5/D5, nr kat. MABF959 zostało zatwierdzone do stosowania w testach ELISA, cytometrii przepływowej, oczyszczaniu metodą immunopowinowactwa, immunocytochemii, immunofluorescencji, immunoprecypitacji i neutralizacji.

Research Category
Inflammation & Immunology

Jakość

Evaluated by Flow Cytometry in human PBMCs.

Flow Cytometry Analysis: 0.4 µL of this antibody detected CD47 surface expression on the gated lymphocytes population among one million human PBMCs.

Opis wartości docelowych

33,47/30,00/31,45/32,10 kDa (dojrzała izoforma OA3-323/OA3-293/OA3-305/OA3-312) w przeliczeniu. ~60-65 kDa (glikozylowana) i ~35 kDa (deglikozylowana) zgłoszone (Parkos, C.A., et al. (1996). J. Cell Biol. 132(3):437-450).

Postać fizyczna

Format: Oczyszczony

Oczyszczone mysie IgG1 w PBS bez konserwantów.

Protein G purified.

Przechowywanie i stabilność

Przechowywać przez 1 rok w temperaturze -20°C od daty otrzymania.
Zalecenia dotyczące postępowania: Po otrzymaniu i przed zdjęciem nasadki odwirować fiolkę i delikatnie wymieszać roztwór. Rozdzielić do probówek do mikrowirówki i przechowywać w temperaturze -20°C. Unikać powtarzających się cykli zamrażania/rozmrażania, które mogą uszkodzić IgG i wpłynąć na działanie produktu.

Inne uwagi

Stężenie: Należy zapoznać się z arkuszem danych dla konkretnej partii.

Oświadczenie o zrzeczeniu się odpowiedzialności

Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Kod klasy składowania: 12 - Non Combustible Liquids
• Klasa zagrożenia wodnego (WGK): WGK 2
• Temperatura zapłonu (°F): Not applicable
• Temperatura zapłonu (°C): Not applicable