HTS201M
Preparat błonowy ChemiSCREEN Rekombinowany ludzki receptor GPR109A
Human GPR109A GPCR membrane preparation for Radioligand binding Assays & GTPγS binding.
Zaloguj się, aby wyświetlić ceny organizacyjne i kontraktowe.
Wybierz wielkość
Zmień widok
Informacje o tej pozycji
eCl@ss:
32161000
UNSPSC Code:
41123201
Pomoc techniczna
Potrzebujesz pomocy? Nasz zespół doświadczonych naukowców chętnie Ci pomoże.
Pozwól nam pomócbiological source
human
recombinant
expressed in Chem-4 cells
manufacturer/tradename
ChemiScreen, Chemicon®, Millipore
technique(s)
ligand binding assay: suitable (GTPγS), radioligand binding assay (RLBA): suitable
NCBI accession no.
UniProt accession no.
shipped in
dry ice
General description
Kwas nikotynowy (niacyna), witamina z grupy B, jest stosowany klinicznie w wysokich dawkach w celu obniżenia całkowitego poziomu cholesterolu w osoczu. Co ciekawe, stężenie cholesterolu całkowitego i lipoprotein o niskiej gęstości (LDL) spada, podczas gdy stężenie lipoprotein o wysokiej gęstości (HDL) wzrasta podczas leczenia kwasem nikotynowym. Obniżające poziom cholesterolu działanie kwasu nikotynowego wynika z hamowania lipolizy w tkance tłuszczowej, co obniża poziom wolnych kwasów tłuszczowych (FFA) w osoczu (Altschul i in., 1955; Carlson, 1963). W badaniu nad kwasem nikotynowym i zawałem mięśnia sercowego w ramach Coronary Drug Project (1966-1975), pacjenci otrzymujący 3 g/dzień kwasu nikotynowego wykazywali zmniejszoną częstość zawału mięśnia sercowego (Coronary Drug Project Research Group, 1975). Niepożądanym efektem wysokich dawek kwasu nikotynowego jest jednak rozszerzenie naczyń krwionośnych, występujące głównie w górnej części ciała i twarzy, znane jako zaczerwienienie. Niedawno zidentyfikowano dwa receptory dla kwasu nikotynowego jako receptory sprzężone z białkiem G klasy A, które łączą się z Gi w celu zahamowania akumulacji cAMP (Offermans, 2006). GPR109A (znany również jako HM74A u ludzi i PUMA-G u myszy) jest receptorem o wysokim powinowactwie do kwasu nikotynowego, podczas gdy GPR109B (znany również jako HM74) jest receptorem o niskim powinowactwie do kwasu nikotynowego, który występuje u ludzi, ale nie u gryzoni (Wise i in., 2003). GPCR109A znajduje się głównie w tkance tłuszczowej i komórkach odpornościowych. Preparaty błonowe GPR109A firmy Millipore są surowymi preparatami błonowymi wykonanymi z naszych zastrzeżonych stabilnych rekombinowanych linii komórkowych w celu zapewnienia wysokiego poziomu ekspresji powierzchniowej GPCR; dlatego są idealnymi narzędziami HTS do badań przesiewowych interakcji GPR109A z jego ligandami. Preparaty błonowe wykazują EC50 na poziomie 3,65 μM dla kwasu nikotynowego w teście wiązania GTPγS.
Ludzki cDNA GPR109A o pełnej długości
Application
Test wiązania radioligandu i wiązanie GTPγS.
Biochem/physiol Actions
GPCR Class: A
Protein Target: GPR109A
Target Sub-Family: Nicotinic Acid
Features and Benefits
WARUNKI INUKCJI
WARUNKI ASSAY: Membrany są permeabilizowane przez dodanie saponiny do równego stężenia masowego, a następnie mieszane z[35S]-GTPγS (końcowe stężenie 0,3 nM) w 20 mM HEPES, pH 7,4/100 mM NaCl/10 mM MgCl2/0,5 μM GDP w niewiążącej 96-dołkowej płytce. Nieznakowany kwas nikotynowy dodano do końcowego stężenia wskazanego na rysunku 1 (końcowa objętość 100 μL) i inkubowano przez 30 minut w temperaturze 30°C. Reakcję wiązania przeniesiono na płytkę filtracyjną GF/B (Millipore MAHF B1H) uprzednio zwilżoną wodą i przemyto 3 razy (1 ml na studzienkę na przemywanie) zimnym 10 mM fosforanem sodu, pH 7,4. Płytka jest suszona i liczona.
Jedna fiolka zawiera wystarczającą ilość membran na co najmniej 200 testów (jednostek), gdzie jedna jednostka to ilość membrany, która da więcej niż 1000 cpm specyficznego wiązania[35S]-GTPγS stymulowanego kwasem nikotynowym.
Oczekuje się, że preparat membranowy GPR109A będzie funkcjonalny w teście wiązania radioligandu; jednak użytkownik końcowy będzie musiał określić optymalny ligand znakowany radioligandem do stosowania z tym produktem.
WARUNKI ASSAY: Membrany są permeabilizowane przez dodanie saponiny do równego stężenia masowego, a następnie mieszane z[35S]-GTPγS (końcowe stężenie 0,3 nM) w 20 mM HEPES, pH 7,4/100 mM NaCl/10 mM MgCl2/0,5 μM GDP w niewiążącej 96-dołkowej płytce. Nieznakowany kwas nikotynowy dodano do końcowego stężenia wskazanego na rysunku 1 (końcowa objętość 100 μL) i inkubowano przez 30 minut w temperaturze 30°C. Reakcję wiązania przeniesiono na płytkę filtracyjną GF/B (Millipore MAHF B1H) uprzednio zwilżoną wodą i przemyto 3 razy (1 ml na studzienkę na przemywanie) zimnym 10 mM fosforanem sodu, pH 7,4. Płytka jest suszona i liczona.
Jedna fiolka zawiera wystarczającą ilość membran na co najmniej 200 testów (jednostek), gdzie jedna jednostka to ilość membrany, która da więcej niż 1000 cpm specyficznego wiązania[35S]-GTPγS stymulowanego kwasem nikotynowym.
Oczekuje się, że preparat membranowy GPR109A będzie funkcjonalny w teście wiązania radioligandu; jednak użytkownik końcowy będzie musiał określić optymalny ligand znakowany radioligandem do stosowania z tym produktem.
Physical form
Płyn w buforze opakowaniowym: 50 mM Tris pH 7,4, 10% glicerol i 1% BSA bez konserwantów.
Metoda pakowania: Białko membranowe dostosowano do 1 mg/ml w 1 ml buforu do pakowania, szybko zamrożono i przechowywano w temperaturze -80°C
Metoda pakowania: Białko membranowe dostosowano do 1 mg/ml w 1 ml buforu do pakowania, szybko zamrożono i przechowywano w temperaturze -80°C
Preparation Note
Przechowywać zamrożone w temperaturze -70°C przez okres do 2 lat. Nie zamrażać i nie rozmrażać.
Analysis Note
SPECIFICATIONS: 1 unit = 5 μg
EC50 in GTPγS binding assay by Nicotinic Acid: ~ 3.65 μM
EC50 in GTPγS binding assay by Nicotinic Acid: ~ 3.65 μM
Legal Information
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Disclaimer
Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.
Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.
Klasa składowania
12 - Non Combustible Liquids
Co się dzieje?
WGK 2
Temperatura zapłonu (°F)
Not applicable
Temperatura zapłonu (°C)
Not applicable
Wybierz jedną z najnowszych wersji:
Masz już ten produkt?
Dokumenty związane z niedawno zakupionymi produktami zostały zamieszczone w Bibliotece dokumentów.