HTS099M

Preparat błonowy ChemiSCREEN Rekombinowany ludzki receptor prostanoidowy _EP1

Human EP1 GPCR membrane preparation for Radioligand binding Assays & GTPγS binding.

• UNSPSC Code: 41106514
• NACRES: NA.41
• eCl@ss: 32161000

Właściwości

• biological source: human
• Quality Segment: 100
• recombinant: expressed in Chem-1 cells
• manufacturer/tradename: ChemiScreen, Chemicon^®
• technique(s): ligand binding assay: suitable (GTPγS), radioligand binding assay (RLBA): suitable
• NCBI accession no.: NM_000955
• UniProt accession no.: P34995
• shipped in: dry ice
• storage temp.: -65 to -96°C

Opis

General description

Pełnej długości ludzki cDNA PTGER1 kodujący _EP1

Prostanoidy to szereg metabolitów kwasu arachidonowego wytwarzanych w wyniku działania cyklooksygenazy, a następnie izomerazy i syntazy. Komórki szybko wydzielają prostanoidy po syntezie, po czym prostanoidy wiążą się z rodziną 8 GPCR, aby wywierać swoje działanie biologiczne (Narumiya i FitzGerald, 2001). Prostaglandyna _PGE2 powoduje ból, rozszerzenie naczyń krwionośnych, immunosupresję limfocytów T, resorpcję kości i promowanie karcynogenezy. Cztery pokrewne receptory GPCR, _EP1, _EP2, _EP3 i _EP4, wiążą się z _PGE2, ale różny status sprzężenia z białkiem G każdego receptora prowadzi do różnych efektów biologicznych; _EP1 łączy się głównie z _Gq w celu mobilizacji wapnia wewnątrzkomórkowego. _EP1 wydaje się pośredniczyć w działaniu _PGE2 w promowaniu powstawania zmian przedrakowych w zwierzęcych modelach raka okrężnicy (Watanabe i in., 1999). Ponadto _EP1 ma hamujący wpływ na wywołane stresem agresywne i ryzykowne zachowania u myszy (Matsuoka i in., 2005). Preparaty błonowe _EP1 firmy Millipore są surowymi preparatami błonowymi wykonanymi z naszych własnych stabilnych rekombinowanych linii komórkowych w celu zapewnienia wysokiego poziomu ekspresji powierzchniowej GPCR; dlatego są idealnymi narzędziami HTS do badań przesiewowych agonistów i antagonistów _EP1. Preparaty błonowe wykazują Kd 14,5 nM dla^[3H]_-PGE2. Przy 40 nM^[3H]_-PGE2, 10 μg/dołek preparatu membranowego _EP1 zazwyczaj daje ponad 3-krotny stosunek sygnału do tła.

Application

Preparat błonowy ludzkiego GPCR EP1 do testów wiązania radioligandów i wiązania GTPγS.

Test wiązania radioligandu i wiązanie GTPγS

Biochem/physiol Actions

GPCR Class: A

Protein Target: EP1

Target Sub-Family: Prostanoid

Features and Benefits

Warunki indukcji
Membrany są mieszane z radioaktywnym ligandem i nieznakowanym konkurentem (patrz rysunki 1 i 2 dla testowanych stężeń) w buforze wiążącym na niewiążącej 96-dołkowej płytce i inkubowane przez 1-2 godz. Przed filtracją 96-dołkowa płytka zbiorcza FC (Millipore nr kat. MAHF C1H) jest powlekana 0,33% polietylenoiminą przez 30 minut, a następnie przemywana 10 mM MES, pH 6, 1 mM EDTA, 10 mM _MnCl2. Reakcja wiązania jest przenoszona na płytkę filtracyjną i płukana 3 razy (1 ml na studzienkę na płukanie) buforem płuczącym. Płytka jest suszona i liczona.

Bufor wiążący: 10 mM MES, pH 6, 1 mM EDTA, 10 mM _MnCl2, przefiltrowany i przechowywany w temperaturze 4°C.

Radioligand:^[3H]- _PGE2. (Perkin Elmer # NET-428 )

Bufor płuczący: 10mM MES, pH 6, 1mM EDTA, 10mM _MnCl2, przefiltrowany i przechowywany w temperaturze 4°C.

Jedno opakowanie zawiera wystarczającą ilość membran na co najmniej 200 testów (jednostek), gdzie jednostka to ilość membrany, która da ponad 3-krotny sygnał: tło ze znakowaną ^3H_PGE2.

Physical form

Płyn w buforze opakowaniowym: 50 mM Tris pH 7,4, 10% glicerol i 1% BSA bez konserwantów.
Metoda pakowania: Białko błonowe dostosowano do wskazanego stężenia w buforze do pakowania, szybko zamrożono i przechowywano w temperaturze -80°C.

Preparation Note

Przechowywać w temperaturze -70°C. Produkt jest stabilny przez co najmniej 6 miesięcy od daty otrzymania, jeśli jest przechowywany zgodnie z zaleceniami. Nie zamrażać i nie rozmrażać.

Analysis Note

Table 1. Signal:background and specific binding values obtained in a competition binding assay with EP₁ membrane prep.

	10 µg/well
Signal:Background	4.3
Specific Binding (cpm)	724

SPECIFICATIONS: 1 unit = 10 μg membrane preparation
Bmax: 4.6 pmol/mg
K_d: 14.5 nM

Legal Information

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 12 - Non Combustible Liquids
• Co się dzieje?: WGK 2