HTS092M

ChemiSCREEN _EP3 Przygotowanie błony receptora prostanoidowego

Human EP3 GPCR membrane preparation for Radioligand binding Assays & GTPgammaS binding.

• UNSPSC Code: 41106514
• NACRES: NA.41
• eCl@ss: 32161000

Właściwości

• biological source: human
• Quality Segment: 100
• recombinant: expressed in Chem-1 cells
• manufacturer/tradename: ChemiScreen, Chemicon^®
• technique(s): ligand binding assay: suitable (GTPγS), radioligand binding assay (RLBA): suitable
• NCBI accession no.: NM_000957.2, NM_198712.2, NM_198713.1, NM_198714.1, NM_198715.2, NM_198716.1, NM_198717.1, NM_198718.1, NM_198719.1
• UniProt accession no.: P43115
• shipped in: dry ice
• storage temp.: -65 to -96°C
• Gene Information: human ... PTGER3(5733)

Opis

General description

Pełnej długości ludzki _PTGER3 cDNA kodujący wariant splicingowy 6 _EP3

Prostanoidy wiążą się z rodziną 8 GPCR, wywierając swoje działanie biologiczne (Narumiya i FitzGerald, 2001). Prostaglandyna _PGE2 powoduje ból, rozszerzenie naczyń krwionośnych, immunosupresję limfocytów T, resorpcję kości i promowanie karcynogenezy. Cztery pokrewne receptory GPCR, _EP1, _EP2, _EP3 i _EP4, wiążą się z _PGE2, ale różny status sprzężenia z białkiem G każdego receptora prowadzi do różnych efektów biologicznych. Dalsza różnorodność jest generowana przez alternatywny splicing; ludzki gen dla _EP3 generuje 9 alternatywnie splicowanych mRNA kodujących 8 izoform _EP3 (Kotani i in., 1997). Te izoformy _EP3 różnią się sekwencją na ich C-końcach i różnią się zdolnością do łączenia się z Gs, Gq lub Gi (Kotani i in., 1995). EP3 jest wymagany do gorączki indukowanej przez pirogeny, odpowiedź od dawna przypisywana prostaglandynom przez przeciwgorączkowe działanie aspiryny i innych inhibitorów COX (Ushikubi i in., 1998). Preparaty błonowe _EP3 firmy Chemicon są surowymi preparatami błonowymi wykonanymi z naszych zastrzeżonych stabilnych rekombinowanych linii komórkowych w celu zapewnienia wysokiego poziomu ekspresji powierzchniowej GPCR; dlatego są idealnymi narzędziami HTS do badań przesiewowych antagonistów interakcji _EP3 i jego ligandów. Preparaty błonowe wykazują Kd 1,56 nM dla [3H]_-PGE2. Przy 1,5 nM [3H]_-PGE2, preparaty membranowe _EP3 o stężeniu 5 µg/dobę i 10 µg/dobę zazwyczaj dają odpowiednio ponad 10- i 20-krotny stosunek sygnału do tła.

Application

Test wiązania radioligandu i wiązanie GTPS.

Biochem/physiol Actions

GPCR Class: A

Protein Target: EP3

Target Sub-Family: Prostanoid

Features and Benefits

Warunki indukcji
Membrany są mieszane z radioaktywnym ligandem i nieznakowanym konkurentem (patrz rysunki 1 i 2 dla badanych stężeń) w buforze wiążącym na niewiążącej 96-dołkowej płytce i inkubowane przez 1-2 h. Przed filtracją 96-dołkowa płytka filtracyjna GF/C jest powlekana 0,33% polietylenoiminą przez 30 min, a następnie przemywana 50 mM HEPES, pH 7,4, 0,5% BSA. Reakcja wiązania jest przenoszona na płytkę filtracyjną i przemywana 3 razy (1 ml na studzienkę na przemywanie) buforem do przemywania. Płytka jest suszona i liczona.
Bufor wiążący: 50 mM Tris, pH 7,4, 10 mM MgCl2, 1 mM EDTA, filtrowany i przechowywany w temperaturze 4°C.
Radioligand:^[3H] _PGE2 (Perkin Elmer#:NET-428 )
Bufor płuczący: 50 mM Tris, pH 7,4, filtrowany i przechowywany w temperaturze 4°C.

Physical form

Jedno opakowanie zawiera membrany wystarczające na co najmniej 200 testów (jednostek), gdzie jednostka to ilość membrany, która da ponad 10-krotny stosunek sygnału do tła ze znakowaną 3H _PGE2 przy 1,5 nM.

Płyn w buforze opakowaniowym: 50 mM Tris pH 7,4, 10% glicerol i 1% BSA bez konserwantów.
Metoda pakowania: Białko błonowe dostosowano do 0,5 mg/ml w 1 ml buforu do pakowania, szybko zamrożono i przechowywano w temperaturze -80°C.

Preparation Note

Przechowywać zamrożone w temperaturze -70°C przez okres do 2 lat. Nie zamrażać i nie rozmrażać.

Analysis Note

Signal:background and specific binding values obtained in a competition binding assay with varying amounts of EP₃ membrane prep:

	10 µg/well	5 µg/well
Signal:Background	38	21
Specific Binding (cpm)	6,386	4,053

Specifications:
1 unit = 10 μg
Bmax: 15.0 pmol/mg
Kd: 1.56 nM

Legal Information

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 12 - Non Combustible Liquids
• Co się dzieje?: WGK 2