HTS063M

ChemiSCREEN Preparat błonowy Rekombinowany ludzki receptor wolnych kwasów tłuszczowych GPR43

Human FFA2 / GPR43 GPCR membrane preparation for Radioligand binding Assays & GTPγS binding.

• UNSPSC Code: 41106514
• NACRES: NA.84
• eCl@ss: 32161000

Właściwości

• biological source: human
• Quality Segment: 100
• recombinant: expressed in Chem-1 cells
• manufacturer/tradename: ChemiScreen, Chemicon^®
• technique(s): ligand binding assay: suitable (GTPγS), radioligand binding assay (RLBA): suitable
• GenBank accession no.: BC096201
• UniProt accession no.: O15552
• shipped in: dry ice
• storage temp.: -65 to -96°C

Opis

General description

GPR43 to GPCR, który wraz z GPR41 jest aktywowany przez krótkołańcuchowe kwasy karboksylowe: mrówczan, octan, propionian, maślan i pentanian. Neutrofile i inne leukocyty selektywnie wyrażają GPR43, a GPR43 pośredniczy w przepływie wapnia i chemotaksji w tych komórkach poprzez sprzężenie zarówno z Gq, jak i Gi (Brown i in., 2003; Le Poul i in., 2003). Preparaty błonowe GPR43 firmy Millipore są surowymi preparatami błonowymi wykonanymi z naszych zastrzeżonych stabilnych rekombinowanych linii komórkowych w celu zapewnienia wysokiego poziomu ekspresji powierzchniowej GPCR; dlatego są idealnymi narzędziami HTS do badań przesiewowych interakcji GPR43 z jego ligandami. Linia komórkowa wykazuje odpowiedź wapniową z EC50s 11.8μM dla propionianu sodu. Preparaty błonowe wykazują EC50 40,7 μM dla propionianu sodu w teście wiązania GTPγS.

Ludzki cDNA GPR43 o pełnej długości

Application

Test wiązania radioligandu i wiązanie GTPγS

Biochem/physiol Actions

GPCR Class: A

Protein Target: FFA2 / GPR43

Target Sub-Family: Free Fatty Acid

Features and Benefits

Warunki indukcji
Membrany są permeabilizowane przez dodanie saponiny do równego stężenia masowego, a następnie mieszane z^[35S]-GTPγS (końcowe stężenie 0,3 nM) w 20 mM HEPES, pH 7,4/100 mM NaCl/10 mM MgCl2/0,5 μM GDP w niewiążącej 96-dołkowej płytce. Nieznakowany propionian sodu dodano do końcowego stężenia wskazanego na rysunku 1 (końcowa objętość 100 μL) i inkubowano przez 30 minut w temperaturze 30°C. Reakcja wiązania jest przenoszona na płytkę filtracyjną GF/B (Millipore MAHF B1H) uprzednio zwilżoną wodą. Płytka jest płukana 3 razy (1 ml na studzienkę na płukanie) zimnym 10 mM fosforanem sodu, pH 7,4, a następnie suszona i liczona.

Jedna fiolka zawiera wystarczającą ilość membran dla co najmniej 200 testów (jednostek), gdzie jedna jednostka to ilość membrany, która da więcej niż 1000 cpm specyficznego wiązania [^35S]-GTPγS stymulowanego propionianem sodu.

Oczekuje się, że preparat błonowy GPR43 będzie funkcjonalny w teście wiązania radioligandu; jednak użytkownik końcowy będzie musiał określić optymalny ligand znakowany radioligandem do stosowania z tym produktem.

Physical form

Płyn w buforze opakowaniowym: 50 mM Tris pH 7,4, 10% glicerol i 1% BSA bez konserwantów.
Metoda pakowania: Białko błonowe dostosowano do 1 mg/ml w buforze opakowaniowym i dozowano w ilości 1 ml/fiolkę. Fiolki były szybko zamrażane i przechowywane w temperaturze -80°C.

Preparation Note

Przechowywać zamrożone w temperaturze -70°C przez okres do 2 lat. Nie zamrażać i nie rozmrażać.

Analysis Note

1 unit = 5 μg
EC50 in GTPγS binding assay by sodium propionate: ~ 40.7 μM

Legal Information

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

GenBank is a registered trademark of United States Department of Health and Human Services

Disclaimer

Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk: WGK 2