CC1890

Domena międzykomórkowa Aggrecan, rekombinowana, znakowana His

• Synonim(y): Aggrecan-IGD1
• UNSPSC Code: 12352204
• NACRES: NA.77
• eCl@ss: 32160405
• Form: liquid
• Biological source: human

Właściwości

• biological source: human
• Quality Segment: 100
• form: liquid
• manufacturer/tradename: Chemicon^®
• NCBI accession no.: NM_001135.2, NM_013227.2
• UniProt accession no.: P16112
• shipped in: dry ice
• storage temp.: -65 to -96°C
• Gene Information: human ... ACAN(176)

Opis

General description

Aggrecan jest dużym agregującym proteoglikanem chrząstki stawowej. Występuje również w aorcie, dyskach i ścięgnach [Knudsen & Knudsen, 2001; Watanabe et al., 1998]. Białko rdzenia agrekanu składa się z 2317 aminokwasów [Watanabe i in., 1998]. Do białka rdzeniowego przyłączonych jest do 130 łańcuchów glukozaminoglikanu, a całkowita masa cząsteczkowa może osiągnąć 2,2 - 3,0 x 106 Daltonów [Hardingham & Fosang, 1992]. W cząsteczce agrekanu można wyróżnić 3 globalne domeny G1, G2 i G3. Domeny G1 i G2 są połączone polipeptydem w kształcie pręta zwanym domeną międzyglobularną (IGD), podczas gdy sekwencja między domenami G2 i G3 zawiera regiony mocowania dla łańcuchów siarczanu keratanu i siarczanu chondroityny. Aggrecan oddziałuje poprzez domenę G1 z hialuronianem i białkiem łączącym, tworząc duże agregaty. Takie agregaty mogą zawierać do 50-100 monomerów agrekanu niekowalencyjnie związanych z pojedynczym łańcuchem hialuronianu poprzez 2 białka łącznikowe [Knudsen & Knudsen, 2001; Watanabe et al., 1998; Hardingham & Fosang, 1992]. Agregaty tworzą uwodnioną strukturę podobną do żelu, która nadaje chrząstce odporność na ściskanie i deformację. Degradacja agrekanu wydaje się rozpoczynać na C-końcu. Populacja cząsteczek agrekanu bez domeny G3 wzrasta wraz z wiekiem [Dudhia et al., 1996]. Wyizolowane agrekanazy rozszczepiają agrekan w 4 miejscach w regionie bogatym w siarczan chrondroityny (miejsca E1667 - G1668, E1480-G1481, E1771 - A1772, E1871 - L1872) i 1 miejscu w domenie międzyglobularnej (E373 - A374) [Tortorella i in., 2000]. Rozszczepienie w tym ostatnim miejscu zostało udokumentowane przez analizę produktów rozpadu proteoglikanu chrząstki w reumatoidalnym zapaleniu stawów i chorobie zwyrodnieniowej stawów [Lohmander i in., 1993]. Do pomiaru aktywności agrekanazy po raz pierwszy użyto sztucznego rekombinowanego białka składającego się z domeny międzyglobularnej agrekana z flankującą sekwencją FLAG i stałym regionem ludzkiej immunoglobuliny G1 [Hughes i in., 1997].

Postać molekularna: Polipeptyd łączący domeny globularne 1 i 2 ludzkiego agrekanu (T331 - G458) ulega ekspresji w E. coli z C-końcowym podwójnym tagiem His {6His-L-E-6His}. Rekombinowane białko zawiera miejsca rozszczepienia dla agrekanaz (E373 - A374) i metaloproteinaz macierzy (N341 - F342). Składa się z następujących aminokwasów: T A E D F V D I P E N<> F F G V G G E D I T V Q T V T W P D M E L P L P R N I T E G E <>A R G S V I L T V K P I F E V S P S P L E P E P F T F A P E I G A T A F A E V E N E T G E A T R P W G F P T P G L G P A T A F T S E D L V Q V T A V P G Q P H L P G G (His-tag)

Główne miejsca rozszczepienia są wskazane przez <> wtrącenia.. Obliczony Mr białka znakowanego His wynosi 15 493 Da.

Czystość: Rekombinowana domena międzyzwojowa agrekanu pojawia się jako główne pasmo przy około 21 kDa w SDS-PAGE. Stanowi ponad 90% całkowitego białka w preparacie.

Zastosowania: Domena międzyblaszkowa agrekanu jest stosowana jako substrat dla agrekanaz i metaloproteinaz macierzy. W celu pomiaru aktywności proteinazy, białko jest inkubowane z proteinazą w różnych odstępach czasu. Następnie podwielokrotności mieszaniny inkubacyjnej są analizowane za pomocą SDS-PAGE lub ELISA. Po rozszczepieniu za pomocą agrekanaz pozorna Mr domeny międzyzębowej agrekanu w SDS-PAGE jest zmniejszona z 21 kDa do około 13 kDa. Ilościowy pomiar rozszczepienia agrekanazy wymaga przeciwciała neoepitopowego o swoistości dla N-końca A R G S V I L T ... pojawiającego się po hydrolizie. Fragment z nowo utworzonym N-końcem jest utrwalany przez przeciwciało neoepitop na mikropłytce i oznaczany ilościowo za pomocą przeciwciała anty-His-tag. Analogicznie, rozszczepienie przez metaloproteinazy macierzy może być mierzone za pomocą przeciwciał przeciwko neoepitopom pojawiającym się podczas działania tych enzymów.

Źródło produktu: Człowiek

Physical form

Obliczony Mr białka znakowanego His wynosi 15 493 Da. Białko jest rozpuszczane w 50 mM Tris-HCI, pH 7,5, 150 mM NaCl, 5 mM _CaCl2.

Preparation Note

MT5-MMP jest stabilny do daty ważności podanej na etykiecie przy przechowywaniu w temperaturze -70°C. Białko może być przechowywane w temperaturze -20°C przez kilka tygodni, a w lodzie przez kilka dni. Należy unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania.

Legal Information

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk: WGK 1