CC1028

ADAMTS-4, rekombinowany, znakowany His

This His Tagged Recombinant ADAMTS4 is used to study the degradation of extracellular matrix proteoglycans, to screen for inhibitors of proteoglycan hydrolysis and to characterize inhibitor actions.

• Synonim(y): Aggrecanase 1
• UNSPSC Code: 12352204
• NACRES: NA.41
• eCl@ss: 32160405
• Form: liquid
• Biological source: human
• Recombinant: expressed in baculovirus

Właściwości

• biological source: human
• Quality Segment: 100
• recombinant: expressed in baculovirus
• form: liquid
• manufacturer/tradename: Chemicon^®
• NCBI accession no.: NM_005099.4
• UniProt accession no.: O75173
• shipped in: dry ice
• storage temp.: -65 to -96°C
• Gene Information: human ... ADAMTS4(9507)

Opis

General description

ADAMTS (a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motif) to nowa rodzina zewnątrzkomórkowych proteinaz (Tang, 2001). Obecnie u ssaków zidentyfikowano dziewięciu członków rodziny (Tang, 2001). ADAMTS4 został po raz pierwszy oczyszczony z pożywki kondycjonowanej chrząstki nosowej bydła stymulowanej IL-1, a ludzki ADAMTS4-cDNA został sklonowany z biblioteki cDNA ludzkiego serca (Tortorella, 1999). Dojrzała ADAMTS4 składa się z prodomeny, która nadaje opóźnienie proenzymowi, domeny katalitycznej, domeny dezintegryny i C-końcowej sekwencji z motywem trombospondyny typu 1. Prodomena jest najprawdopodobniej odcinana przez enzym typu furin, zanim aktywna ADAMTS4 zostanie uwolniona z komórek. Aktywna ADAMTS4 składa się z 625 aminokwasów (F213 - K837) o obliczonym Mr 67 943 (Tortorella, 1999).

ADAMTS4 hydrolizuje agrekan, główny proteoglikan chrząstki stawowej (Tortorella, 1999). Ponieważ agrekan jest również trawiony przez 2 innych członków rodziny ADAMTS, ADAMTS1 (Kuno, 2000) i ADAMTS5 (Abbaszade, 1999), produkty degradacji agrekanu występujące w normalnej, reumatoidalnej i zwyrodnieniowej chrząstce stawowej (Lark, 1997) mogą powstawać w wyniku działania jednej z 3 proteinaz. Wyizolowana ADAMTS4 hydrolizuje agrekan w 5 różnych miejscach (Tortorella, 2000a). Cztery miejsca rozszczepienia znajdują się w regionie bogatym w siarczan chondroityny między domenami kulistymi G2 i G3, podczas gdy jedno miejsce znajduje się w polipeptydzie w kształcie pręta między domenami kulistymi G1 i G2. Motyw trombospondyny w ADAMTS4 wydaje się być krytyczny dla rozpoznawania i rozszczepiania substratu agrekanu (Tortorella, 2000b). ADAMTS4 hydrolizuje również inne lektyny, takie jak brevican (Nakamura, 2000) i versican (Sandy, 2001).

ADAMTS4 jest hamowany przez TIMP 3 (Hashimoto, 2001) i przez N-końcową domenę TIMP 3 (Kashigawa, 2001) z wartościami Ki w zakresie nanomolarnym. Hamowanie przez TIMP 1,2 i 4 jest znacznie słabsze (Hashimoto, 2001).

Postać molekularna: Rekombinowany ludzki ADAMTS4 delta580-837 jest wytwarzany przy użyciu systemu ekspresji bakulowirusa i oczyszczany z supernatantów hodowli komórek owadzich. Białko składa się z aminokwasów od F213 do A579 pełnej długości ADAMTS4 i C-końcowego znacznika His6. Obliczony Mr wynosi 40 366 Da.



Inhibitory: ADAMTS4 jest hamowany przez tkankowe inhibitory metaloproteinaz macierzy 3 (TIMP 3) i w mniejszym stopniu przez inne inhibitory tkankowe. Aktywność enzymu jest również hamowana przez chelatory dwuwartościowych związków, takie jak EDTA i syntetyczne inhibitory metaloproteinaz.

Zastosowania: Rekombinowany ADAMTS4 jest używany do badania degradacji proteoglikanów macierzy zewnątrzkomórkowej, do badań przesiewowych w kierunku inhibitorów hydrolizy proteoglikanów i do scharakteryzowania działania inhibitorów. Enzym może również służyć jako standard w testach enzymatycznych i immunochemicznych.

Źródło produktu: Rekombinowany ludzki ADAMTS-4 δ580-837 jest wytwarzany przy użyciu systemu ekspresji bakulowirusa i oczyszczany z supernatantu hodowli komórek owadzich. Białko zawiera aminokwasy F213 ... A579 pełnej długości ADAMTS-4 i C-końcowy His6tag. Obliczony MW wynosi 40 kDa.

Packaging

w 25 μL

Physical form

ADAMTS4 jest rozpuszczony w 50 mM Tris-HCI, pH 7,5, 150 mM NaCl, 5 mM CaCl2, 0,05% Brij-35.

Preparation Note

Przechowywać białko w temperaturze -70°C przez rok od daty otrzymania. Enzym może być przechowywany w temperaturze -20°C przez kilka tygodni, a w lodzie przez kilka dni. Należy unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania.

Analysis Note

Aktywność specyficzna: Aktywność agrekanazy ADAMTS4 jest określana za pomocą rekombinowanej domeny międzyglobularnej agrekanu znakowanej His (Aggrecan-IGD1 firmy Chemicon). ADAMTS4 hydrolizuje miejsce "aggrecanase" w tej domenie (wiązanie peptydowe E373 -A374 w ludzkim aggrecan). Rekombinowany substrat jest inkubowany w stężeniu 0,1 μM z 1 nM ADAMTS4 w 50 mM Tris-HCI, pH 7,5, 150 mM NaCl, 5 mM CaCl2, 1 μM leupeptyny, 1 μM pepstatyny, 1 mM Pefabloc, 0,05% Brij 35 przez 15 minut w 37°C. Rozszczepienie w miejscu "aggrecanase" szacuje się na podstawie wyglądu C-końca ARGSVIL. Przy użyciu poliklonalnych przeciwciał neoepitopowych do końca ARGS fragment jest utrwalany na mikropłytce i oznaczany ilościowo za pomocą przeciwciała anty-His-tag. W określonych warunkach rekombinowany ADAMTS4 hydrolizuje 0,15 nM substratu/min na nM skróconego ADAMTS4. W odniesieniu do mg enzymu wartość ta wynosi 3,7 nmoli zhydrolizowanego substratu/min na mg ADAMTS4.

Rekombinowany ADAMTS4 pojawia się jako główne białko o masie około 42 000 Da w SDS-PAGE (>90% całkowitego białka). Ze względu na aktywność autoproteolityczną w preparacie enzymatycznym mogą być widoczne mniejsze pasma ADAMTS4.

Legal Information

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk: WGK 1