17-10260

Przeciwciało ChIPAb+ N-CoR

from rabbit, purified by affinity chromatography

• Synonim(y): Korepresor receptora jądrowego 1, N-CoR, N-CoR1, białko oddziałujące z receptorem Retinoid X 13
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.32
• eCl@ss: 32160702
• Clone: polyclonal
• Species reactivity: human, mouse
• Application: ChIP, WB
• Citations: 10

Właściwości

• biological source: rabbit
• Quality Segment: 100
• antibody form: affinity purified immunoglobulin
• clone: polyclonal
• purified by: affinity chromatography
• species reactivity: human, mouse
• manufacturer/tradename: ChIPAb+, Upstate^®
• technique(s): ChIP: suitable, western blot: suitable
• NCBI accession no.: NP_035438
• UniProt accession no.: Q60974
• shipped in: dry ice

Opis

General description

W przypadku braku ligandów korepresor N-CoR hamuje transkrypcję genów, w której pośredniczą receptory hormonów jądrowych. W obecności ligandów receptory hormonalne aktywują ekspresję genów i odgrywają kluczową rolę w rozwoju, wzroście i homeostazie. Represja transkrypcyjna, w której pośredniczy N-Cor, jest ułatwiona poprzez tworzenie kompleksów deacetylazy histonowej (HDAC) N-CoR lub koniugację z małym modyfikatorem podobnym do ubikwityny 1 (SUMO-1). Wykazano, że domena SANT1 N-CoR służy jako region wiążący dla enzymu koniugującego SUMO-E2 Ubc9 i ligazy SUMO-E3 Pias1, co jest niezbędne do represji odpowiednich genów reporterowych za pośrednictwem N-CoR. Myszy z nokautem N-CoR z niedoborem SUMOylacji wykazują znaczne zmniejszenie represji transkrypcji genów i powodują defekty obejmujące różnicowanie i rozwój komórek nerwowych w erytrocyty i tymocyty.

Wszystkie przeciwciała ChIPAb+ są indywidualnie walidowane pod kątem wytrącania chromatyny, w każdej partii, za każdym razem. Każdy zestaw przeciwciał ChIPAb+ zawiera startery kontrolne (testowane co partię za pomocą qPCR) w celu biologicznej walidacji wyników IP w kontekście specyficznym dla locus. Protokół qPCR i sekwencje starterów są dostarczane, umożliwiając badaczom walidację protokołów ChIP przy użyciu naszego przeciwciała w kontekście chromatyny. Każdy zestaw zawiera również ujemne przeciwciało kontrolne, aby zapewnić specyficzność reakcji ChIP.
Zestaw ChIPAb+JMJD1C zawiera przeciwciało JMJD1C, normalną króliczą IgG i startery kontrolne, które amplifikują region 110 bp starterów ChIP, ludzkiej β-globiny. JMJD1C i kontrole ujemne są dostarczane w skalowalnym rozmiarze reakcji "na ChIP" i mogą być stosowane do funkcjonalnej walidacji wytrącania chromatyny związanej z JMJD1C.

Zaobserwowano ~270 kDa. Uniprot opisuje 2 izoformy wytwarzane przez alternatywny splicing o MW 266 kDa i 270 kDa

Immunogen

Liniowy peptyd sprzężony z KLH odpowiadający regionowi między aminokwasami 1510 i 1540 białka N-CoR.

Application

Immunoprecypitacja chromatyny:
Reprezentatywne dane partii.
Sonikowaną chromatynę przygotowaną z nietraktowanych lub poddanych działaniu promieniowania UV (6 godzin, 50 dżuli/m2) komórek U2OS (3 X 10E6 równoważników komórek na IP) poddano immunoprecypitacji chromatyny przy użyciu 3 µg normalnej króliczej IgG lub 3 µg anty-N-CoR i zestawu Magna ChIP A/G (nr kat. 17-10085). Pomyślna immunoprecypitacja fragmentów DNA związanych z N-CoR została zweryfikowana przez qPCR przy użyciu starterów ChIP, p21. (Rysunek 2). Dane przedstawiono jako procentowy wkład każdej próbki IP w stosunku do chromatyny wejściowej dla każdego amplikonu i próbki ChIP, jak wskazano.
Szczegółowe informacje dotyczące eksperymentu można znaleźć w protokole EZ-Magna ChIP A (nr kat. 17-408) lub EZ-ChIP (nr kat. 17-371).
Analiza Western Blot:
Reprezentatywne dane partii.
Lizat komórek RAW 264.7 poddano działaniu anty-N-CoR (1 µg/ml). Białka uwidoczniono przy użyciu przeciwciała wtórnego Donkey Anti-Rabbit IgG sprzężonego z HRP i systemu detekcji chemiluminescencji.
Strzałka wskazuje Anti-N-CoR (~270 kDa). (Rysunek 3).

Zestaw ChIPAb+ N-CoR -ChIP Validated Antibody & Primer Set zawiera przeciwciało i specyficzne kontrolne startery PCR.

Research Category
Epigenetics & Nuclear Function

Research Sub Category
Hormones & Receptors

Packaging

25 testów w zestawie. Zalecane użycie: 3 µg przeciwciała na immunoprecypitację chromatyny (w zależności od kontekstu biologicznego).

Physical form

Składniki:
Anty-N-CoR (króliczy poliklonalny). Jedna fiolka zawierająca 75 µg poliklonalnego przeciwciała oczyszczonego metodą powinowactwa w buforze zawierającym 0,1 M tris-glicyny (pH 7,4) i 150 mM NaCl z 0,05% azydkiem sodu przed dodaniem 30% glicerolu. Przechowywać w temperaturze -20°C.
Stężenie: 0,7 mg/ml
Normal Rabbit IgG Jedna fiolka zawierająca 125 µg króliczej IgG w 125 µl buforu do przechowywania zawierającego 0,05% azydku sodu. Przechowywać w temperaturze -20°C.
Primery ChIP, p21. Jedna fiolka zawierająca 75 μL każdego startera (5 μM) specyficznego dla ludzkiego promotora p21 (WAF1/CIP1/CDKN1A). Przechowywać w temperaturze
-20°C.
FOR: CCC ACA GCA GAG GAG AAA GAA
REV: CTG GAA ATC TCT GCC CAG ACA

Affinity purified

Preparation Note

Przechowywać przez 1 rok w temperaturze -20°C od daty otrzymania. Zalecenia dotyczące postępowania: Po pierwszym rozmrożeniu, a przed zdjęciem korka, odwirować fiolkę i delikatnie wymieszać roztwór. Rozdzielić do probówek mikrowirówkowych i przechowywać w temperaturze -20°C. Unikać powtarzających się cykli zamrażania/rozmrażania, które mogą uszkodzić IgG i wpłynąć na działanie produktu.
Uwaga: Zmienność temperatur w zamrażarce poniżej -20°C może powodować zamarzanie roztworów zawierających glicerol podczas przechowywania.

Analysis Note

Kontrola
Zawiera normalną króliczą IgG i startery specyficzne dla ludzkiego p21.

Chromatin Immunoprecipitation:
Representative lot data.
Sonicated chromatin prepared from U2OS cells (3 X 10E6 cell equivalents per IP) were subjected to chromatin immunoprecipitation using 3 µg of either Normal Rabbit IgGor 3 µg of Anti-N-CoR and the Magna ChIP^® A/G Kit (Cat. # 17-10085). Successful immunoprecipitation of N-CoR associated DNA fragments was verified by qPCR using ChIP Primers, p21flanking an Sp1 binding site in the human p21 promoter. (Figure 1).
Please refer to the EZ-Magna ChIP A (Cat. # 17-408) or EZ-ChIP (Cat. # 17-371) protocol for experimental details.

Other Notes

Stężenie: Stężenie specyficzne dla danej partii można znaleźć w certyfikacie analizy.

Legal Information

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 12 - Non Combustible Liquids
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable
• wgk: WGK 2