17-10250

ChIPAb+ Symetryczny dimetylo-histon H4 (Arg3) - przeciwciało i zestaw primerów zweryfikowane pod kątem ChIP

from rabbit, purified by affinity chromatography

• Synonim(y): Histon H4
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.41
• eCl@ss: 32160702
• Clone: polyclonal
• Species reactivity: rat, human, mouse
• Application: ChIP, DB, WB
• Citations: 1

Właściwości

• biological source: rabbit
• Quality Segment: 100
• clone: polyclonal
• purified by: affinity chromatography
• species reactivity: rat, human, mouse
• manufacturer/tradename: ChIPAb+, Upstate^®
• technique(s): ChIP: suitable, dot blot: suitable, western blot: suitable
• NCBI accession no.: NP_001029249
• UniProt accession no.: P62805
• shipped in: dry ice

Opis

General description

Histony są wysoce konserwatywnymi białkami, które służą jako rusztowanie strukturalne dla organizacji jądrowego DNA w chromatynę. Cztery podstawowe histony, H2A, H2B, H3 i H4, łączą się w oktamer (po 2 cząsteczki każdego z nich). Histony są modyfikowane potranslacyjnie przez działanie enzymów zarówno w jądrze, jak i cytoplazmie. Modyfikacje te, które obejmują acetylację, fosforylację, metylację i ubikwitynację, występują głównie na N-końcowych i C-końcowych ogonach, które rozciągają się poza cząsteczkę rdzenia nukleosomu. Modyfikacje argininowe białek histonowych są pośredniczone przez dwie klasy metylotransferaz argininowych (PRMT), klasę I i II. PRMT klasy I umieszczają dwie grupy metylowe na jednym atomie azotu grupy guanidynowej argininy, co skutkuje asymetryczną modyfikacją. Natomiast PRMT klasy II umieszczają dwie grupy metylowe na dwóch atomach azotu grupy guanidynowej, tworząc symetryczną dimetylację. Chociaż istnieją wyjątki, asymetryczne modyfikacje są zwykle związane z aktywacją transkrypcji, podczas gdy symetryczne modyfikacje są najczęściej związane z represją transkrypcji.

Wszystkie przeciwciała ChIPAb+ są indywidualnie walidowane pod kątem wytrącania chromatyny, w każdej partii, za każdym razem. Każdy zestaw przeciwciał ChIPAb+ zawiera startery kontrolne (testowane co partię za pomocą qPCR) w celu biologicznej walidacji wyników IP w kontekście specyficznym dla locus. Protokół qPCR i sekwencje starterów są dostarczane, umożliwiając badaczom walidację protokołów ChIP przy użyciu naszego przeciwciała w kontekście chromatyny. Każdy zestaw zawiera również ujemne przeciwciało kontrolne, aby zapewnić specyficzność reakcji ChIP.
Zestaw ChIPAb+ Dimethyl-Histone H4 (Arg3) Symmetric zawiera przeciwciało Dimethyl-Histone H4 (Arg3) Symmetric, normalne królicze IgG oraz startery kontrolne, które amplifikują region 110 bp starterów ChIP, ludzkiej β-globiny. Dimetylo-Histon H4 (Arg3) Symmetric i kontrole ujemne są dostarczane w skalowalnym rozmiarze reakcji "na ChIP" i mogą być stosowane do funkcjonalnej walidacji wytrącania chromatyny związanej z Dimetylo-Histonem H4 (Arg3) Symmetric.

~13 kDa. W niektórych lizatach zaobserwowano pasmo reagujące krzyżowo przy ~58 kDa.

Immunogen

Epitop: Dimetylowany Arg3

Liniowy peptyd sprzężony z KLH odpowiadający ludzkiemu histonowi H4, gdy jest symetrycznie dimetylowany w Arg3.

Application

Immunoprecypitacja chromatyny:
Reprezentatywne dane partii.
Sonikowaną chromatynę przygotowaną z komórek HeLa (1 X 10E6 równoważników komórek na IP) poddano immunoprecypitacji chromatyny przy użyciu 1 µg normalnej króliczej IgG lub 0,7 µg symetrycznego anty-dimetylo-histonu H4 (Arg3) i zestawu Magna ChIP A (nr kat. 17-610). Pomyślną immunoprecypitację fragmentów DNA związanych z Dimetylo-Histonem H4 (Arg3) Symmetric zweryfikowano za pomocą qPCR przy użyciu starterów ChIP, ludzkiej β-globiny jako locus dodatniego i starterów promotora GAPDH (22-004) jako locus ujemnego. (Rysunek 2). Dane przedstawiono jako procentowy wkład każdej próbki IP w stosunku do chromatyny wejściowej dla każdego amplikonu i próbki ChIP, jak wskazano.
Szczegółowe informacje dotyczące eksperymentu można znaleźć w protokole EZ-Magna ChIP A (nr kat. 17-408) lub EZ-ChIP (nr kat. 17-371).
Analiza Western Blot:
Reprezentatywne dane partii.
Ekstrakt kwasu HeLa (Lane 1) i rekombinowany Histon H4 (Lane 2) były sondowane anty-Dimethyl-Histone H4 (Arg3) Symmetrical (0.1μg/mL). Białka wizualizowano przy użyciu przeciwciała wtórnego Donkey Anti-Rabbit IgG sprzężonego z HRP i systemu detekcji chemiluminescencji.
Strzałka wskazuje histon H4 (~13 kDa). (Rysunek 3).
Uwaga: W niektórych lizatach zaobserwowano niescharakteryzowane pasmo o masie ~58 kDa.
Analiza Dot Blot:
Reprezentatywne dane partii.
Peptydy histonowe z różnymi modyfikacjami (patrz tabela poniżej) sondowano za pomocą anty-Dimethyl-Histone H4 (Arg3) Symmetrical (rozcieńczenie 1:2000). Białka wizualizowano przy użyciu przeciwciała wtórnego Donkey Anti-Rabbit IgG sprzężonego z HRP i systemu detekcji chemiluminescencji. (Rysunek 4). Patrz tabela poniżej.
Analiza immunocytochemiczna:
Reprezentatywne dane partii.
Konfokalna analiza fluorescencyjna komórek A431 i HeLa z użyciem przeciwciała Anti-Dimethyl-Histone H4 (Arg3) Symmetrical (Red). Filamenty aktyny zostały wyznakowane barwnikiem Alexa Fluor 488 Phalloidin (zielony). Jądro jest wybarwione DAPI (niebieski). To przeciwciało pozytywnie wybarwia jądro. (Rysunek 5).

Zestaw ChIPAb+ Dimethyl-Histone H4 (Arg3) Symmetric -ChIP Validated Antibody & Primer Set zawiera przeciwciało i specyficzne kontrolne startery PCR.

Research Category
Epigenetics & Nuclear Function

Research Sub Category
Histones

Biochem/physiol Actions

Oczekiwana szeroka reaktywność krzyżowa gatunków w oparciu o podobieństwo sekwencji.

To przeciwciało rozpoznaje histon H4 symetrycznie dimetylowany w Arg3.

Packaging

25 testów w zestawie. Zalecane użycie: 0,7 μg przeciwciała na immunoprecypitację chromatyny (w zależności od kontekstu biologicznego).

Physical form

Anty-Dimetylo-Histon H4 (Arg3) Symetryczny (króliczy poliklonalny). Jedna fiolka zawierająca 17,5 µg oczyszczonego poliklonalnego królika w buforze zawierającym 0,1 M Tris-Glicyny (pH 7,4), 150 mM NaCl z 0,05% azydkiem sodu przed dodaniem glicerolu do 30%. Przechowywać w temperaturze -20°C.
Stężenie: 0,7 µg/µL
Normalne królicze IgG. Jedna fiolka zawierająca 125 µg króliczych IgG w 125 µl buforu do przechowywania zawierającego 0,05% azydku sodu. Przechowywać w temperaturze -20°C.
Primery ChIP, ludzka β-globina. Jedna fiolka zawierająca 75 μL po 5 μM każdego primera specyficznego dla ludzkiego promotora β-globiny. Przechowywać w temperaturze -20°C.
FOR: AGG ACA GGT ACG GCT GTC ATC
REV: TTT ATG CCC AGC CCT GGC TC

Affinity purified

Preparation Note

Przechowywać przez 1 rok w temperaturze -20°C od daty otrzymania. Zalecenia dotyczące postępowania: Po pierwszym rozmrożeniu, a przed zdjęciem korka, odwirować fiolkę i delikatnie wymieszać roztwór. Rozdzielić do probówek mikrowirówkowych i przechowywać w temperaturze -20°C. Unikać powtarzających się cykli zamrażania/rozmrażania, które mogą uszkodzić IgG i wpłynąć na działanie produktu.
Uwaga: Zmienność temperatur w zamrażarce poniżej -20°C może powodować zamarzanie roztworów zawierających glicerol podczas przechowywania.

Analysis Note

Kontrola
Zawiera normalną króliczą IgG i startery specyficzne dla ludzkiej β-globiny.

Chromatin Immunoprecipitation:
Representative lot data.
Sonicated chromatin prepared from HeLa cells (1 X 10E6 cell equivalents per IP) were subjected to chromatin immunoprecipitation using 1 µg of either Normal Rabbit IgG, or 0.7 µg of Anti-Dimethyl-Histone H4 (Arg3) Symmetric and the Magna ChIP^® A Kit (Cat. # 17-610). Successful immunoprecipitation of Dimethyl-Histone H4 (Arg3) Symmetric associated DNA fragments was verified by qPCR using ChIP Primers, human β-globin (Figure 1).
Please refer to the EZ-Magna ChIP A (Cat. # 17-408) or EZ-ChIP (Cat. # 17-371) protocol for experimental details.

Other Notes

Stężenie: Stężenie specyficzne dla danej partii można znaleźć w certyfikacie analizy.

Legal Information

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 10 - Combustible liquids
• wgk: WGK 2