17-10230

Zestaw wzbogacający LentiBrite GFP-LC3-II (cytometria przepływowa)

• UNSPSC Code: 12161503
• NACRES: NA.84
• eCl@ss: 32161000

Właściwości

• technique(s): flow cytometry: suitable
• Quality Segment: 100
• detection method: fluorometric

Opis

General description

Autofagia, szlak degradacji, który zapewnia komórkom recykling składników odżywczych pod wpływem stresu, odgrywa zarówno ochronną, jak i szkodliwą rolę w wielu chorobach, w tym nowotworach, neurodegeneracji i infekcjach. Członkowie rodziny LC3 odgrywają kluczową rolę w dojrzewaniu autofagosomu, centralnej organelli autofagii. Prekursory LC3, rozproszone w cytozolu, są proteolitycznie przetwarzane do postaci LC3-I. Po zainicjowaniu autofagii, C-końcowa glicyna jest modyfikowana przez dodanie fosfatydyloetanoloaminy (PE), tworząc LC3-II, który szybko przemieszcza się do powstających autofagosomów w punktowym rozmieszczeniu. Konstrukty DNA kodujące białka fluorescencyjne połączone z LC3 są szeroko stosowane do wprowadzania do komórek w celu monitorowania tworzenia autofagosomów za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej. <br />Cząsteczki lentiwirusowe LentiBrite GFP-LC3 firmy EMD Millipore zapewniają jasną fluorescencję i precyzyjną lokalizację, aby umożliwić analizę autofagii w żywych komórkach w trudnych do transfekcji typach komórek. <br /><br />LentiBrite GFP-LC3-II Enrichment Kit (Flow Cytometry) łączy nasze cząsteczki lentiwirusowe GFP-LC3 z procedurą selektywnej permeabilizacji komórek transdukowanych GFP-LC3, która pozwala na uwolnienie cytozolowego LC3-I i zatrzymanie LC3-II związanego z autofagosomem. Procedura ta umożliwia wykrywanie gęstości autofagosomów za pomocą cytometrii przepływowej.

Application

Cząsteczki LentiBrite GFP-LC3 firmy EMD Millipore zapewniają jasną fluorescencję i precyzyjną lokalizację, umożliwiając analizę autofagii w komórkach trudnych do transfekcji. Zestaw LentiBrite GFP-LC3-II Enrichment Kit (Cytometria przepływowa) łączy nasze cząsteczki lentiwirusowe GFP-LC3 z procedurą selektywnej permeabilizacji komórek transdukowanych GFP-LC3, która pozwala na uwolnienie cytozolowego LC3-I i zatrzymanie LC3-II związanego z autofagosomem. Procedura ta umożliwia wykrywanie gęstości autofagosomów za pomocą cytometrii przepływowej.

W celu optymalnej analizy fluorescencyjnej zaleca się analizę docelowego poziomu ekspresji w ciągu 24-48 godzin po transfekcji/infekcji w celu optymalnej analizy żywych komórek, ponieważ intensywność fluorescencji może z czasem słabnąć, szczególnie w trudnych do transfekcji liniach komórkowych. Zainfekowane komórki można zamrozić po udanej transfekcji/infekcji i rozmrozić w hodowli, aby zachować dodatnią ekspresję fluorescencyjną przez ponad 24-48 godzin. Długość i intensywność ekspresji fluorescencyjnej różni się w zależności od linii komórkowej. W przypadku trudnych do transfekcji linii komórkowych może być wymagane wyższe MOI.

Preparation Note

Lentiwirus TagGFP2-LC3 należy przechowywać w temperaturze -80°C. Po pierwszym rozmrożeniu natychmiast umieścić na lodzie i zamrozić w podwielokrotnościach roboczych w temperaturze -80°C. Zamrożone podwielokrotności mogą być przechowywane przez co najmniej 2 miesiące. Dalsze zamrażanie/rozmrażanie może spowodować zmniejszenie miana wirusa i wydajności transdukcji. Przechowywać Autophagy Reagent A, 10x Enrichment Buffer i 5x Assay Buffer w temperaturze 2-8°C. Wszystkie składniki są stabilne przez co najmniej 4 miesiące od daty otrzymania, jeśli są przechowywane zgodnie z powyższymi zaleceniami.

Other Notes

1. TagGFP2-LC3 Lentivirus: One vial containing 25 µL of lentiviral particles at a minimum of 3 x 10E8 infectious units (IFU) per mL. For lot-specific titer information, please see datasheet. • Virus Description: 3rd generation HIV-based VSV-G pseudotyped lentiviral particles. Lentiviral particles were generated using the pPACKH1 Lentivector Packaging System and purified by PEG precipitation. • Promoter: EF-1 (Elongation Factor-1). • Expression Marker Description: TagGFP2 (Evrogen) fused at its C-terminus with human LC3A (Accession # NP_115903) truncated to leave G120 (lipidation site) at the C-terminus. (Store at -80°C) 2. Autophagy Reagent A: One vial (lyophilized) (Store at 2-8°C) 3. 10x Enrichment Buffer (Part No. CS210552): One vial containing 1 mL (Store at 2-8°C) 4. 5x Assay Buffer: (Part No. CS210529): One bottle containing 3 mL (Store at 2-8°C)

Disclaimer

Ten produkt zawiera organizmy zmodyfikowane genetycznie (GMO). W UE GMO są regulowane odpowiednio dyrektywami 2001/18/WE i 2009/41/WE Parlamentu Europejskiego i Rady oraz ich krajową implementacją w państwach członkowskich. Przepisy te zobowiązują {HCompany} do żądania pewnych informacji o użytkowniku i zakładzie, w którym przetwarzane są GMO. Kliknij tutaj, aby wyświetlić formularz deklaracji użytkownika końcowego (EUD).O ile nie określono inaczej w naszym katalogu lub innej dokumentacji firmy dołączonej do produktu(ów), nasze produkty są przeznaczone wyłącznie do użytku badawczego i nie mogą być wykorzystywane do żadnych innych celów, w tym między innymi do nieautoryzowanych zastosowań komercyjnych, zastosowań diagnostycznych in vitro, zastosowań terapeutycznych ex vivo lub in vivo ani do żadnego rodzaju konsumpcji lub stosowania u ludzi lub zwierząt.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• pictograms: GHS07
• signalword: Warning
• hcodes: H302,H412
• pcodes: P264 - P270 - P273 - P301 + P312 - P501
• Hazard Classifications: Acute Tox. 4 Oral - Aquatic Chronic 3
• Klasa składowania: 10 - Combustible liquids
• wgk: WGK 3