17-10099

ChIPAb+ Acetylo-Histone H4 (Lys8) - przeciwciało i zestaw primerów zweryfikowane pod kątem ChIP

serum, from rabbit

• Synonim(y): H4K8Ac, histon H4 (acetyl K8)
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.75
• eCl@ss: 32160702
• Clone: polyclonal
• Species reactivity: human, yeast, Saccharomyces cerevisiae
• Application: ChIP, IP, WB
• Citations: 3

Właściwości

• biological source: rabbit
• Quality Segment: 100
• antibody form: serum
• clone: polyclonal
• species reactivity: human, yeast, Saccharomyces cerevisiae
• manufacturer/tradename: ChIPAb+, Upstate^®
• technique(s): ChIP: suitable, immunoprecipitation (IP): suitable, western blot: suitable
• NCBI accession no.: NM_175054
• UniProt accession no.: P62805
• shipped in: dry ice

Opis

General description

Histon H4 jest jednym z 5 głównych białek histonowych zaangażowanych w strukturę chromatyny w komórkach eukariotycznych. Posiadając główną domenę globularną i długi N-końcowy ogon, histon H4 jest zaangażowany w strukturę nukleosomów o strukturze "koralików na sznurku".

N-końcowy ogon histonu H4 wystaje z kulistego rdzenia nukleosomu i może podlegać kilku różnym rodzajom modyfikacji epigenetycznych, które wpływają na procesy komórkowe. Modyfikacje te obejmują kowalencyjne przyłączanie grup metylowych lub acetylowych do aminokwasów lizyny i argininy oraz fosforylację seryny lub treoniny.

Wszystkie przeciwciała ChIPAb+ są indywidualnie walidowane pod kątem wytrącania chromatyny, w każdej partii, za każdym razem. Każdy zestaw przeciwciał ChIPAb+ zawiera startery kontrolne (testowane co partię za pomocą qPCR) w celu biologicznej walidacji wyników IP w kontekście specyficznym dla locus. Protokół qPCR i sekwencje starterów są dostarczane, umożliwiając badaczom walidację protokołów ChIP przy użyciu naszego przeciwciała w kontekście chromatyny. Każdy zestaw zawiera również ujemne przeciwciało kontrolne, aby zapewnić specyficzność reakcji ChIP.
Zestaw ChIPAb+ Acetylo-Histone H4 (Lys8) zawiera przeciwciało Acetylo-Histone H4 (Lys8), surowicę króliczą z kontrolą ujemną oraz startery qPCR, które amplifikują region 134 bp ludzkiego HSPCA. Acetylo-Histon H4 (Lys8) i kontrole ujemne są dostarczane w skalowalnym rozmiarze reakcji "na ChIP" i mogą być wykorzystane do funkcjonalnej walidacji wytrącania chromatyny związanej z Acetylo-Histonem H4 (Lys8).

~11 kDa

Immunogen

Syntetyczny peptyd odpowiadający drożdżowemu histonowi H4 acetylowanemu przy lizynie 8.

Application

Immunoprecypitacja chromatyny:
Sonikowaną chromatynę przygotowaną z komórek HeLa (1 X¹⁰⁶ równoważników komórek na IP) poddano immunoprecypitacji chromatyny przy użyciu 2 µL normalnej surowicy króliczej lub 2 µL anty-acetylo-histonu H4 (Lys8) i zestawu Magna ChIP A (nr kat. 17-610).
Pomyślna immunoprecypitacja fragmentów DNA związanych z acetylo-histonem H4 (Lys8) została zweryfikowana za pomocą qPCR przy użyciu starterów ChIP, ludzkiego HSPCA dla testu pozytywnego i znanych starterów negatywnych (Martinato, F. i in., 2008) jako testu negatywnego (patrz rysunki).
Dane przedstawiono jako procentowy wkład każdej próbki IP w stosunku do chromatyny wejściowej dla każdego amplikonu i próbki ChIP, jak wskazano.
Szczegółowe informacje dotyczące eksperymentu można znaleźć w protokole EZ-Magna ChIP A (nr kat. 17-408) lub EZ-ChIP (nr kat. 17-371).

Analiza Western Blot:
Reprezentatywne dane partii.
Ekstrakt kwasu HeLa traktowany maślanem sodu został rozdzielony przez elektroforezę, przeniesiony na membranę PVDF i sondowany anty-acetylem histonu H4 (Lys8) (rozcieńczenie 1:1000). Aby wykazać swoistość, surowicę wstępnie inkubowano ze zmodyfikowanymi peptydami Histone H4:
Pas 1: Bez peptydu
Pasek 2: acetylo-Histon H4 (K5) (Nr kat.: 12-343)
Pas 3: acetylo-Histon H4 (K8) (Nr kat.:12-344)
Pas 4: acetylo-histyna H4 (K12) (Nr kat.:12-345)
Pas 5: acetylo-histyna H4 (K16) (Nr kat.:12-346)
Pas 6: acetylo-Histon H4 (K5, 8, 12, 16) (Nr kat.:12-353)
Pas 7: Histon H4 (Nr kat.:12-347)
Białka były wizualizowane przy użyciu oślego anty-królika IgG sprzężonego z HRP i wizualizowane przy użyciu systemu detekcji chemiluminescencji (patrz rysunki).

Immunoprecypitacja: 5 μL poprzedniej partii immunoprecypitowało acetyl Histone H4 z 1 mg lizatów całych komórek drożdży typu dzikiego, ale nie ze szczepu drożdży zawierającego substytucję Histone H4 Lys8R.

Zestaw ChIPAb+ Acetyl-Histone H4 (Lys8) zawiera przeciwciało Acetyl-Histone H4 (Lys8), króliczą surowicę kontroli ujemnej i startery qPCR, które amplifikują region 134 bp ludzkiego HSPCA.

Research Category
Epigenetics & Nuclear Function

Research Sub Category
Histones

Biochem/physiol Actions

Na podstawie 100% homologii sekwencji oczekuje się szerokiej reaktywności krzyżowej między gatunkami.

Rozpoznaje acetylo-histonę H4 (Lys8).

Packaging

25 testów w zestawie. Zalecane użycie: ~2 μL przeciwciała na immunoprecypitację chromatyny (w zależności od kontekstu biologicznego).

Physical form

Anty-Acetylo-Histon H4 (Lys8) (króliczy poliklonalny). Jedna fiolka zawierająca 50 μL surowicy odpornościowej zawierającej 0,05% azydku sodu. Przechowywać w temperaturze -20°C.

Normalna surowica królicza. Jedna fiolka zawierająca 100 μL surowicy odpornościowej zawierającej 0,05% azydku sodu.
Przechowywać w temperaturze -20°C.

Primery ChIP, HSPCA. Jedna fiolka zawierająca 75 μL po 5 μM każdego primera specyficznego dla ludzkiego HSPCA.
Przechowywać w temperaturze -20°C.
FOR: GCA ACA GCT ACC ACA GGA CCA
REV: GAG CGT GTG AAA TCA ACA TAA AGC

Unpurified

Preparation Note

Przechowywać przez 1 rok w temperaturze -20°C od daty otrzymania. Zalecenia dotyczące postępowania: Po pierwszym rozmrożeniu, a przed zdjęciem korka, odwirować fiolkę i delikatnie wymieszać roztwór. Rozdzielić do probówek mikrowirówkowych i przechowywać w temperaturze -20°C. Unikać powtarzających się cykli zamrażania/rozmrażania, które mogą uszkodzić IgG i wpłynąć na działanie produktu.

Analysis Note

Kontrola
Zawiera kontrolę ujemną, przeciwciało normalnej surowicy króliczej i startery specyficzne dla ludzkiego HSPCA.

Chromatin Immunoprecipitation:
Sonicated chromatin prepared from HeLa cells (1 X 10⁶ cell equivalents per IP) were subjected to chromatin immunoprecipitation using either 2 µL of Normal Rabbit Serum or 2 µL of Anti-Acetyl-Histone H4 (Lys8) and the Magna ChIP^® A Kit (Cat. # 17-610).
Successful immunoprecipitation of Acetyl-Histone H4 (Lys8) associated DNA fragments was verified by qPCR using ChIP Primers, human HSPCA (Please see figures).
Please refer to the EZ-Magna ChIP A (Cat. # 17-408) or EZ-ChIP (Cat. # 17-371) protocol for experimental details.

Legal Information

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 10 - Combustible liquids