Epigenética

Modificación de histonas

La cromatina es el complejo del ADN genómico y asociado a proteínas del núcleo. Las modificaciones de la estructura de la cromatina y la interacción de las proteínas de la cromatina desempeñan un papel directo en la regulación epigenética. La estructura de la cromatina se ve facilitada por las histonas, una clase principal de proteínas de la cromatina. Las histonas forman el nucleosoma, un complejo que contiene 2 subunidades de cada una de las histonas H2A, H2B, H3 y H4. En la parte exterior del complejo nuclear, la histona enlazadora H1 ocupa el ADN internucleosómico. Este complejo nucleosoma mantiene la estructura compactada de la cromatina. Modificaciones específicas de sitio de las histonas, como la metilación, la acetilación, la fosforilación, la ubiquitinación, y la citrulinación, pueden alterar la estructura local de la cromatina y regular la transcripción, la reparación, la recombinación y la replicación. Las proteínas no histonas asociadas con la cromatina constituyen un grupo diverso con miles de tipos diferentes de proteínas, como los factores de transcripción, las polimerasas, los receptores hormonales y otras enzimas nucleares.

Metilación del ADN

La metilación del ADN es un importante mecanismo epigenético que regula el silenciamiento génico, el sellado genómico, el desarrollo embrionario y la estabilidad cromosómica. La metilación del ADN se produce en la posición del carbono 5 de los residuos de citosina principalmente dentro de los dinucleótidos CpG para formar 5-metilcitosinas (5-mC). La reacción es catalizada por las ADN metiltransferasas (DNMT). Los residuos de 5-metilcitosina también pueden ser hidroxilados por las enzimas TET para formar 5-hidroximetilcitosina (5-hmC), que tiene funciones diferentes a las de la 5-mC. Ofrecemos sólidas herramientas que le permiten no sólo detectar y cuantificar las 5-mC y 5-hmC, sino también distinguir con precisión entre estas modificaciones.

Kits de inmunoprecipitación de la cromatina (ChIP)

La detección cuantitativa de las modificaciones de las histonas es importante para comprender mejor la regulación epigenética de los procesos celulares en tejidos normales o cancerosos. Las técnicas más utilizadas para estudiar cómo las modificaciones de las histonas y otras proteínas de unión al ADN, como los factores de transcripción, influyen en la expresión génica son la inmunoprecipitación de la cromatina (ChIP) combinada con reacción en cadena de la polimerasa cualitativa(qPCR). La ChIP implica entrecruzamiento químico de las proteínas con las secuencias de ADN, que va seguido de la inmunoprecipitación de los complejos reticulados mediante el uso de anticuerpos y microesferas para precipitar la histona modificada u otras proteínas de interés. Las modificaciones más comúnmente estudiadas y mejor entendidas de las histonas son la acetilación, la fosforilación, la metilación y la ubiquitinación. Las modificaciones de las histonas regulan la transcripción, reparación, recombinación y replicación del ADN, y pueden alterar la arquitectura local de la cromatina. Explore nuestra amplia gama de kits para analizar patrones complejos de modificación de histonas.

Control transcripcional y postranscripcional: regulación del ARN

Tradicionalmente la investigación de la expresión génica se ha centrado en la regulación transcripcional a través de las interacciones de los factores de transcripción con sitios de unión específicos, las modificaciones de las histonas en la cromatina y la dinámica coordinada de la cromatina asociada con cambios en la transcripción génica. La investigación actual sobre la expresión génica busca comprender la dinámica de la regulación del ARN, con el objetivo último de cerrar la brecha entre el control transcripcional y la expresión de proteínas. Las proteínas de unión al ARN (RBP) desempeñan un papel clave en la regulación postranscripcional de la expresión génica.

Regulación del ARN: Kits de inmunoprecipitación de proteínas de unión al ARN (RIP)

La RIP puede verse como el análogo en ARN de la aplicación ChIP más conocida. La RIP puede utilizarse para identificar moléculas de ARN específicas asociadas con proteínas de unión nuclear o citoplasmática específicas. La RIP comienza con la inmunoprecipitación de complejos endógenos de proteínas de unión al ARN y el co-aislamiento de especies de ARN asociadas con el complejo inmunoprecipitado. Después de la purificación de estas especies de ARN, pueden ser estudiadas e identificadas como ARNm o ARN no codificantes por una variedad de aplicaciones, entre ellas la RT-PCR cuantitativa, el análisis de micromatrices (RIP-Chip) y la secuenciación de alto rendimiento (RIP-Seq).