S7101
Kit de apoptosis in situ con peroxidasa ApopTag Plus
The ApopTag Plus Peroxidase In Situ Apoptosis Detection Kit detects apoptotic cells by labeling & detecting DNA strand breaks by the indirect TUNEL method.
Sinónimos:
In Situ Apoptosis Detection Kit
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About This Item
UNSPSC Code:
12161503
eCl@ss:
32161000
NACRES:
NA.84
Productos recomendados
General description
El kit de detección de la apoptosis in situ con peroxidasa ApopTag detecta células apoptóticas al marcar y detectar roturas en la hebra de ADN mediante el método TUNEL. El kit proporciona reactivos suficientes para la tinción con inmunoperoxidasa de 40 muestras e incluye portaobjetos de control positivo ApopTag(R), tampón DAB y sustrato. Los resultados se visualizan utilizando el microscopio de campo claro.
Los kits de peroxidasa ApopTag han sido aptos para utilizar en tinción histoquímica y citoquímica de las siguientes muestras: tejidos fijados en formol e incluidos en parafina, cortes de criostato, suspensiones celulares, citoespines, y cultivos celulares. Se han desarrollado métodos de montaje completos (34, 45). (Véase la ficha técnica Sec. V. para referencias).
Chemicon y muchos otros laboratorios han demostrado la especificidad de la tinción de los kits de peroxidasa ApopTag. Chemicon ha probado muchos tipos de células modelo y sistemas de tejidos: (a) próstata humana, timo e intestino grueso (datos internos); (b) próstata ventral de rata después de la castración (21), (c) linfocitos del timo de rata tratados in vitro con dexametasona (3, 13), (d) extremidades de embriones de ratón de 14 días (1) y (e) glándula mamaria de rata en regresión después del destete (36). En los modelos de timocitos y próstata, se utilizó la electroforesis en gel de agarosa para evaluar la cantidad de ADN en escalera, que alcanzó un máximo coincidente con el porcentaje máximo de células teñidas. Numerosas publicaciones de laboratorios de todo el mundo han establecido la utilidad de los kits ApopTag. (Véase la ficha técnica Sec. V. Referencias, Publicaciones donde se citan los kits ApopTag ).
Los kits de peroxidasa ApopTag han sido aptos para utilizar en tinción histoquímica y citoquímica de las siguientes muestras: tejidos fijados en formol e incluidos en parafina, cortes de criostato, suspensiones celulares, citoespines, y cultivos celulares. Se han desarrollado métodos de montaje completos (34, 45). (Véase la ficha técnica Sec. V. para referencias).
Chemicon y muchos otros laboratorios han demostrado la especificidad de la tinción de los kits de peroxidasa ApopTag. Chemicon ha probado muchos tipos de células modelo y sistemas de tejidos: (a) próstata humana, timo e intestino grueso (datos internos); (b) próstata ventral de rata después de la castración (21), (c) linfocitos del timo de rata tratados in vitro con dexametasona (3, 13), (d) extremidades de embriones de ratón de 14 días (1) y (e) glándula mamaria de rata en regresión después del destete (36). En los modelos de timocitos y próstata, se utilizó la electroforesis en gel de agarosa para evaluar la cantidad de ADN en escalera, que alcanzó un máximo coincidente con el porcentaje máximo de células teñidas. Numerosas publicaciones de laboratorios de todo el mundo han establecido la utilidad de los kits ApopTag. (Véase la ficha técnica Sec. V. Referencias, Publicaciones donde se citan los kits ApopTag ).
Application
INTRODUCTION
ApopTag In Situ Apoptosis Detection Kits label apoptotic cells in research samples by modifying DNA fragments utilizing terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) for detection of apoptotic cells by specific staining.
This manual contains information and protocols for the ApopTag Plus In Situ Apoptosis Detection Kit.
Principles of the Procedure
The reagents provided in ApopTag Peroxidase Kits are designed to label the free 3′OH DNA termini in situ with chemically labeled and unlabeled nucleotides. The nucleotides contained in the Reaction Buffer are enzymatically added to the DNA by terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) (13, 31). TdT catalyzes a template-independent addition of nucleotide triphosphates to the 3′-OH ends of double-stranded or single-stranded DNA. The incorporated nucleotides form an oligomer composed of digoxigenin-conjugated nucleotide and unlabeled nucleotide in a random sequence. The ratio of labeled to unlabeled nucleotide in ApopTag Peroxidase Kits is optimized to promote anti-digoxigenin antibody binding. The exact length of the oligomer added has not been measured.
DNA fragments which have been labeled with the digoxigenin-nucleotide are then allowed to bind an anti-digoxigenin antibody that is conjugated to a peroxidase reporter molecule (Figure 1A). The bound peroxidase antibody conjugate enzymatically generates a permanent, intense, localized stain from chromogenic substrates, providing sensitive detection in immunohistochemistry or immunocytochemistry (i.e. on tissue or cells). This mixed molecular biological-histochemical systems allows for sensitive and specific staining of very high concentrations of 3′-OH ends that are localized in apoptotic bodies.
The ApopTag system differs significantly from previously described in situ labeling techniques for apoptosis (13, 16, 38, 46), in which avidin binding to cellular biotin can be a source of error. The digoxigenin/anti-digoxigenin system has been found to be equally sensitive to avidin/biotin systems (22). The sole natural source of digoxigenin is the digitalis plant. Immunochemically-similar ligands for binding of the anti-digoxigenin antibody are generally insignificant in animal tissues, ensuring low background staining. Affinity purified sheep polyclonal antibody is the specific anti-digoxigenin reagent used in ApopTag Kits. This antibody exhibits <1% cross-reactivity with the major vertebrate steroids. In addition, the Fc portion of this antibody has been removed by proteolytic digestion to eliminate any non-specific adsorption to cellular Fc receptors.
Results using ApopTag Kits have been widely published (see Sec. V. References, Publications Citing ApopTag Kits). The ApopTag product line provides various options in experimental design. A researcher can choose to detect staining by brightfield or fluorescence microscopy or by flow cytometry, depending on available expertise and equipment. There are also opportunities to study other proteins of interest in the context of apoptosis when using ApopTag Kits. By using antibodies conjugated with an enzyme other than peroxidase and an appropriate choice of substrate, it is possible to simultaneously examine another protein and apoptosis using ApopTag Peroxidase Kits.
ApopTag In Situ Apoptosis Detection Kits label apoptotic cells in research samples by modifying DNA fragments utilizing terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) for detection of apoptotic cells by specific staining.
This manual contains information and protocols for the ApopTag Plus In Situ Apoptosis Detection Kit.
Principles of the Procedure
The reagents provided in ApopTag Peroxidase Kits are designed to label the free 3′OH DNA termini in situ with chemically labeled and unlabeled nucleotides. The nucleotides contained in the Reaction Buffer are enzymatically added to the DNA by terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) (13, 31). TdT catalyzes a template-independent addition of nucleotide triphosphates to the 3′-OH ends of double-stranded or single-stranded DNA. The incorporated nucleotides form an oligomer composed of digoxigenin-conjugated nucleotide and unlabeled nucleotide in a random sequence. The ratio of labeled to unlabeled nucleotide in ApopTag Peroxidase Kits is optimized to promote anti-digoxigenin antibody binding. The exact length of the oligomer added has not been measured.
DNA fragments which have been labeled with the digoxigenin-nucleotide are then allowed to bind an anti-digoxigenin antibody that is conjugated to a peroxidase reporter molecule (Figure 1A). The bound peroxidase antibody conjugate enzymatically generates a permanent, intense, localized stain from chromogenic substrates, providing sensitive detection in immunohistochemistry or immunocytochemistry (i.e. on tissue or cells). This mixed molecular biological-histochemical systems allows for sensitive and specific staining of very high concentrations of 3′-OH ends that are localized in apoptotic bodies.
The ApopTag system differs significantly from previously described in situ labeling techniques for apoptosis (13, 16, 38, 46), in which avidin binding to cellular biotin can be a source of error. The digoxigenin/anti-digoxigenin system has been found to be equally sensitive to avidin/biotin systems (22). The sole natural source of digoxigenin is the digitalis plant. Immunochemically-similar ligands for binding of the anti-digoxigenin antibody are generally insignificant in animal tissues, ensuring low background staining. Affinity purified sheep polyclonal antibody is the specific anti-digoxigenin reagent used in ApopTag Kits. This antibody exhibits <1% cross-reactivity with the major vertebrate steroids. In addition, the Fc portion of this antibody has been removed by proteolytic digestion to eliminate any non-specific adsorption to cellular Fc receptors.
Results using ApopTag Kits have been widely published (see Sec. V. References, Publications Citing ApopTag Kits). The ApopTag product line provides various options in experimental design. A researcher can choose to detect staining by brightfield or fluorescence microscopy or by flow cytometry, depending on available expertise and equipment. There are also opportunities to study other proteins of interest in the context of apoptosis when using ApopTag Kits. By using antibodies conjugated with an enzyme other than peroxidase and an appropriate choice of substrate, it is possible to simultaneously examine another protein and apoptosis using ApopTag Peroxidase Kits.
Components
Tampón de equilibrado 90416, 3,0 ml -de 15°C a -25°C
Tampón de reacción 91417, 2,0 ml -de 15°C a -25°C
Enzima TdT 90418 0,672 ml -de 15°C a -25°C
Tampón de parada/lavado 90419 20 ml de -15°C a -25°C
Anti-digoxigenina-peroxidasa* 90420 3,0 ml de 2°C a 8°C
Cubreobjetos de plástico 90421 100 cada uno. Temp. ambiente
Portaobjetos de control 90422 2 cada temp. ambiente
Sustrato DAB 90423 130 μl de 2°C a 8°C
Tampón de dilución DAB 90424 6,5 ml de 2°C a 8°C
*anticuerpo policlonal de oveja purificado por afinidad
Número de muestras por kit: Se suministra material suficiente para teñir 40 muestras de tejido de aproximadamente 5 cm2 cada una cuando se utiliza según las instrucciones. El tampón de reacción se consumirá completamente antes que los demás reactivos cuando los kit se utilizan para muestras montadas en portaobjetos.
Tampón de reacción 91417, 2,0 ml -de 15°C a -25°C
Enzima TdT 90418 0,672 ml -de 15°C a -25°C
Tampón de parada/lavado 90419 20 ml de -15°C a -25°C
Anti-digoxigenina-peroxidasa* 90420 3,0 ml de 2°C a 8°C
Cubreobjetos de plástico 90421 100 cada uno. Temp. ambiente
Portaobjetos de control 90422 2 cada temp. ambiente
Sustrato DAB 90423 130 μl de 2°C a 8°C
Tampón de dilución DAB 90424 6,5 ml de 2°C a 8°C
*anticuerpo policlonal de oveja purificado por afinidad
Número de muestras por kit: Se suministra material suficiente para teñir 40 muestras de tejido de aproximadamente 5 cm2 cada una cuando se utiliza según las instrucciones. El tampón de reacción se consumirá completamente antes que los demás reactivos cuando los kit se utilizan para muestras montadas en portaobjetos.
Storage and Stability
Guardar el kit entre -15°C y -25°C hasta el primer uso. Después de la primera utilización, si el kit va a ser utilizado en los siguientes tres meses, guardar la enzima TdT (90418) entre -15°C y -25°C y el resto de los componentes entre 2°C y 8°C.
Precauciones
1. Los siguientes componentes del kit contienen cacodilato (ácido dimetilarsínico) de potasio como tampón: Tampón equilibrador (90416), tampón de reacción (90417) y enzima TdT (90418). Estos componentes son nocivos en caso de ingestión; evítese el contacto con los ojos y la piel (utilización de guantes y gafas) y lávense de inmediato las zonas de contacto.
2. Se ha demostrado que el sustrato DAB (3,3′ diaminobencidina) (90423) es un posible carcinógeno y se debe evitar el contacto con la piel. Si se produce contacto con la piel, enjuague con cantidades abundantes de dH2O.
3. Los conjugados de anticuerpo (90420) contienen azida sódica al 0,08 % como conservante.
4. La enzima TdT (90418) contiene glicerol y no se congelará a -20°C. Para una máxima vida útil, no caliente este reactivo a temperatura ambiente antes de su dispensación.
Precauciones
1. Los siguientes componentes del kit contienen cacodilato (ácido dimetilarsínico) de potasio como tampón: Tampón equilibrador (90416), tampón de reacción (90417) y enzima TdT (90418). Estos componentes son nocivos en caso de ingestión; evítese el contacto con los ojos y la piel (utilización de guantes y gafas) y lávense de inmediato las zonas de contacto.
2. Se ha demostrado que el sustrato DAB (3,3′ diaminobencidina) (90423) es un posible carcinógeno y se debe evitar el contacto con la piel. Si se produce contacto con la piel, enjuague con cantidades abundantes de dH2O.
3. Los conjugados de anticuerpo (90420) contienen azida sódica al 0,08 % como conservante.
4. La enzima TdT (90418) contiene glicerol y no se congelará a -20°C. Para una máxima vida útil, no caliente este reactivo a temperatura ambiente antes de su dispensación.
Legal Information
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Disclaimer
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signalword
Danger
hcodes
Hazard Classifications
Aquatic Chronic 2 - Carc. 1B - Muta. 2 - Skin Sens. 1 - STOT RE 2 Inhalation
target_organs
Respiratory Tract
Storage Class
6.1C - Combustible acute toxic Cat.3 / toxic compounds or compounds which causing chronic effects
Certificados de análisis (COA)
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