CSA001
Análisis de actividad de la cinasa asociada a Rho (ROCK)
This Rho-associated Protein Kinase (ROCK) Activity Assay Kit is an enzyme immunoassay for detection of the active ROCK & DMPK family kinases.
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About This Item
UNSPSC Code:
12161503
eCl@ss:
32161000
NACRES:
NA.32
Productos recomendados
species reactivity (predicted by homology)
all
manufacturer/tradename
Chemicon®
technique(s)
activity assay: suitable
detection method
colorimetric
shipped in
ambient
General description
Introducción:
Las pequeñas proteínas GTPasas de la familia Rho son reguladoras fundamentales de varios aspectos del comportamiento celular, como la motilidad celular, la proliferación celular y la apoptosis. Tienen un papel central en muchas respuestas móviles en las que interviene el citoesqueleto o la red de microtúbulos de actina, desde la extensión del axón hasta la fagocitosis y la invasión por células cancerosas. Además, contribuyen a cambios en la expresión génica que induce la progresión del ciclo celular o respuestas celulares diferenciadas. Señales extracelulares, como el ácido lisofosfatídico (LPA) activan a Rho. Las acciones de Rho están mediadas por los efectores de Rho en las etapas posteriores. Uno de estos efectores es la proteína cinasa asociada a Rho (ROCK). Se han identificado dos isoformas de ROCK: ROCK-I (también conocida como ROKβ) y ROCK-II (también conocida como Rho cinasa y ROKα). ROCK interviene en la señalización Rho y reorganiza el citoesqueleto de actina mediante la fosforilación de varios sustratos que contribuyen al ensamblaje y la contractilidad de los filamentos de actina.
ROCK inactiva la miosina fosfatasa mediante la fosforilación específica de la subunidad diana de la miosina fosfatasa 1 (MYPT1) en el resto de treonina 696, lo que provoca un aumento de la forma fosforilada de la cadena ligera de la miosina de 20 kDa (MLC20). Este resto de treonina también puede ser fosforilado por cinasas de la familia de proteínas cinasas de la distrofia miotónica (DMPK).
Principio de la prueba:
El kit de análisis de actividad de la proteína cinasa asociada a Rho (ROCK) de Millipore es un enzimoinmunoanálisis para la detección de las cinasas activas de la familia ROCK y DMPK. Las placas están prerrecubiertas con MYPT1 recombinante, que contiene un resto de Thr696 que puede fosforilarse al agregar ROCK-I, ROCK-II o DMPK. A continuación se aplica un anticuerpo de detección que detecta específicamente solo la MYPT1 fosforilada en Thr696. Después se agrega un anticuerpo de detección secundario conjugado con HRP. La cantidad de sustrato fosforilado se mide mediante la adición del sustrato cromógeno tetra-metilbencidina (TMB), el cual al unirse a la HRP convierte una disolución incolora en una disolución azul (o amarilla después de añadir la disolución de parada). La señal de absorbancia a 450 nm refleja la cantidad relativa de actividad ROCK en la muestra.
El kit de análisis de ROCK está diseñado para determinar la presencia y la cantidad relativa de actividad ROCK purificada, así como para detectar inhibidores o activadores de las cinasas de la familia ROCK o DMPK.
Las pequeñas proteínas GTPasas de la familia Rho son reguladoras fundamentales de varios aspectos del comportamiento celular, como la motilidad celular, la proliferación celular y la apoptosis. Tienen un papel central en muchas respuestas móviles en las que interviene el citoesqueleto o la red de microtúbulos de actina, desde la extensión del axón hasta la fagocitosis y la invasión por células cancerosas. Además, contribuyen a cambios en la expresión génica que induce la progresión del ciclo celular o respuestas celulares diferenciadas. Señales extracelulares, como el ácido lisofosfatídico (LPA) activan a Rho. Las acciones de Rho están mediadas por los efectores de Rho en las etapas posteriores. Uno de estos efectores es la proteína cinasa asociada a Rho (ROCK). Se han identificado dos isoformas de ROCK: ROCK-I (también conocida como ROKβ) y ROCK-II (también conocida como Rho cinasa y ROKα). ROCK interviene en la señalización Rho y reorganiza el citoesqueleto de actina mediante la fosforilación de varios sustratos que contribuyen al ensamblaje y la contractilidad de los filamentos de actina.
ROCK inactiva la miosina fosfatasa mediante la fosforilación específica de la subunidad diana de la miosina fosfatasa 1 (MYPT1) en el resto de treonina 696, lo que provoca un aumento de la forma fosforilada de la cadena ligera de la miosina de 20 kDa (MLC20). Este resto de treonina también puede ser fosforilado por cinasas de la familia de proteínas cinasas de la distrofia miotónica (DMPK).
Principio de la prueba:
El kit de análisis de actividad de la proteína cinasa asociada a Rho (ROCK) de Millipore es un enzimoinmunoanálisis para la detección de las cinasas activas de la familia ROCK y DMPK. Las placas están prerrecubiertas con MYPT1 recombinante, que contiene un resto de Thr696 que puede fosforilarse al agregar ROCK-I, ROCK-II o DMPK. A continuación se aplica un anticuerpo de detección que detecta específicamente solo la MYPT1 fosforilada en Thr696. Después se agrega un anticuerpo de detección secundario conjugado con HRP. La cantidad de sustrato fosforilado se mide mediante la adición del sustrato cromógeno tetra-metilbencidina (TMB), el cual al unirse a la HRP convierte una disolución incolora en una disolución azul (o amarilla después de añadir la disolución de parada). La señal de absorbancia a 450 nm refleja la cantidad relativa de actividad ROCK en la muestra.
El kit de análisis de ROCK está diseñado para determinar la presencia y la cantidad relativa de actividad ROCK purificada, así como para detectar inhibidores o activadores de las cinasas de la familia ROCK o DMPK.
Application
El kit de análisis de actividad de la proteína cinasa asociada a Rho (ROCK) de Millipore es un enzimoinmunoanálisis para la detección de las cinasas activas de la familia ROCK y DMPK. Las placas están prerrecubiertas con MYPT1 recombinante, que contiene un resto de Thr696 que puede fosforilarse al agregar ROCK-I, ROCK-II o DMPK. A continuación se aplica un anticuerpo de detección que detecta específicamente solo la MYPT1 fosforilada en Thr696. Después se agrega un anticuerpo de detección secundario conjugado con HRP. La cantidad de sustrato fosforilado se mide mediante la adición del sustrato cromógeno tetra-metilbencidina (TMB), el cual al unirse a la HRP pasa de una disolución incolora a una disolución azul (o amarilla después de añadir la disolución de parada). La señal de absorbancia a 450 nm refleja la cantidad relativa de actividad ROCK en la muestra.
El kit de análisis de ROCK está diseñado para determinar la presencia y la cantidad relativa de actividad ROCK purificada, así como para detectar inhibidores o activadores de las cinasas de la familia ROCK o DMPK. También puede utilizarse para evaluar la potencia de agentes farmacológicos en las cinasas de la familia ROCK o DMPK.
El kit de análisis de ROCK está diseñado para determinar la presencia y la cantidad relativa de actividad ROCK purificada, así como para detectar inhibidores o activadores de las cinasas de la familia ROCK o DMPK. También puede utilizarse para evaluar la potencia de agentes farmacológicos en las cinasas de la familia ROCK o DMPK.
Components
Placa Multistrip de 96 pocillos prerrecubiertos con MYPT1: Una placa multistrip de 96 pocillos prerrecubierta con MYPT1
Anticuerpo anti-fosfo-MYPT1 (Thr696): Un vial que contiene 10 µg de anticuerpo anti-fosfo-MYPT1(Thr696)
Sustrato TMB/E: Una botella que contiene 12 ml
Disolución de parada: Una botella que contiene 12 ml
TBS, 20X: Una botella que contiene 50 ml de TBS x20
Tween al 20 %® 20 (v/v): Una botella que contiene 3 ml
Selladores de placa: Dos cubreplacas
Tampón de dilución del ensayo I: Un vial que contiene 1 ml
ATP (10 mM): Un vial que contiene 50 µl
MgCl2 (1M): Un vial que contiene 100 µl
BSA al 30%: Un vial que contiene 1 ml
Anticuerpo secundario IgG de cabra anti-conejo conjugado con HRP: Un vial que contiene 30 µl
Inhibidor de ROCK Y-27632: Un vial que contiene 150 µl
Cinasa asociada a Rho activa II (ROCK-II): Un vial que contiene 10 µg.
Anticuerpo anti-fosfo-MYPT1 (Thr696): Un vial que contiene 10 µg de anticuerpo anti-fosfo-MYPT1(Thr696)
Sustrato TMB/E: Una botella que contiene 12 ml
Disolución de parada: Una botella que contiene 12 ml
TBS, 20X: Una botella que contiene 50 ml de TBS x20
Tween al 20 %® 20 (v/v): Una botella que contiene 3 ml
Selladores de placa: Dos cubreplacas
Tampón de dilución del ensayo I: Un vial que contiene 1 ml
ATP (10 mM): Un vial que contiene 50 µl
MgCl2 (1M): Un vial que contiene 100 µl
BSA al 30%: Un vial que contiene 1 ml
Anticuerpo secundario IgG de cabra anti-conejo conjugado con HRP: Un vial que contiene 30 µl
Inhibidor de ROCK Y-27632: Un vial que contiene 150 µl
Cinasa asociada a Rho activa II (ROCK-II): Un vial que contiene 10 µg.
Storage and Stability
Conservar los materiales del kit a las temperaturas especificadas en la etiqueta y el manual; utilizar en los 4 meses siguientes a la fecha de recepción.
Legal Information
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
TWEEN is a registered trademark of Croda International PLC
signalword
Warning
hcodes
Hazard Classifications
Met. Corr. 1 - Skin Sens. 1
Storage Class
8A - Combustible corrosive hazardous materials
Certificados de análisis (COA)
Busque Certificados de análisis (COA) introduciendo el número de lote del producto. Los números de lote se encuentran en la etiqueta del producto después de las palabras «Lot» o «Batch»
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