DN25

Desoxirribonucleasa I from bovine pancreas

lyophilized powder, Protein ≥85 %, ≥400 Kunitz units/mg protein

• Sinónimos: Desoxirribonucleasa, ADNasa I, Desoxirribonucleato 5′-oligonucleótido-hidrolasa
• Número de CAS: 9003-98-9
• Comisión internacional de enzimas: 3.1.21.1 (BRENDA, IUBMB)
• EC Number: 232-667-0
• MDL number: MFCD00130918
• UNSPSC Code: 12352204
• NACRES: NA.54

Propiedades

• biological source: bovine pancreas
• form: lyophilized powder
• specific activity: ≥400 Kunitz units/mg protein
• mol wt: ~31 kDa
• composition: Protein, ≥85%
• technique(s): DNA extraction: suitable
• solubility: 0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, hazy
• suitability: suitable for molecular biology
• application(s): diagnostic assay manufacturing; diagnostic assay manufacturing
• foreign activity: RNase ≤0.02%
• shipped in: wet ice
• storage temp.: −20°C

Descripción

General description

La ADNasa I, o desoxirribonucleasa I, es una endonucleasa aislada del páncreas bovino.

• Nuestra ADNasa I digiere ADN bicatenario y monocatenario en oligonucleótidos y mononucleótidos.
• La ADNasa pancreática bovina existe como cuatro isoenzimas, con puntos isoeléctricos para A, B, C y D: 5,22, 4,96, 5,06 y 4,78.3. La forma predominante es la A, con cantidades menores de B y C, y sólo una cantidad mínima de D.
• La estructura de la ADNasa I se parece a la estructura de la exonucleasa III Incluye dos láminas ß centrales. Cada lámina β está compuesta por seis cadenas-β. Este complejo de láminas β está rodeado por un extenso lazo y regiones α-helicoidales. Esta enzima comparte semejanza estructural con la exonucleasa III.^[1]

Application

• Reduce la viscosidad proporcionando mejores rendimientos mediante la eliminación del ADN en el aislamiento de células primarias:
• Incorporando bases marcadas en el ADN: Muesca de ADN
• Marcaje radiactivo
• Aplicaciones de bioprocesamiento: Extracción del ADN
• Eliminar el ADN genómico de las preparaciones de ARN antes de una RT-PCR
• Transcripción in vitro
• Desplazamiento de muescas
• Huella de ADNasa
• Regulación de la polimerización de la actina en las células, y apoptosis celular
• Entrecruzamiento UV de proteínas con ácidos nucleicos
• La ADNasa desempeña un papel en la regulación de la polimerización de la actina en las células y participa en el proceso de la apoptosis ^[1]

Utilizado para eliminación del ADN de las muestras proteicas.

Biochem/physiol Actions

La ADNasa I es una endonucleasa que actúa sobre los enlaces fosfodiéster adyacentes a pirimidinas para producir polinucleótidos con 5′-fosfatos terminales. En presencia de Mg²⁺, la ADNasa I escinde cada hebra de ADN independientemente y los sitios de rotura son aleatorios. Las dos hebras de ADN se rompen aproximadamente en el mismo sitio en presencia de Mn²⁺. Cationes divalentes como Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺ y Zn²⁺ son activadores de la enzima. Una concentración de Ca²⁺ 5 mM estabiliza la enzima contra la digestión proteolítica. Se observó que el pH óptimo se encontraba entre 7 y 8. La ADNasa I de páncreas bovino consta de cuatro componentes distinguibles mediante cromatografía, el A, el B, el C y el D, en proporciones molares de 4:1:1. Sólo se encuentran cantidades menores del componente D. Se sabe que el 2-mercaptoetanol, los quelantes, el dodecilsulfatosódico (SDS) y la actina inhiben la actividad de la enzima.

Features and Benefits

Nuestra desoxirribonucleasa ADNasa I es esencialmente un producto exento de ARNasa, que admite la aplicación del producto.

Unit Definition

Una unidad Kunitz producirá un cambio en A₂₆₀ de 0,001 por minuto por ml a pH 5,0 y 25 °C, utilizando como sustrato ADN de tipo I o III.

Physical form

Preparación en bruto, contiene cloruro de calcio

Preparation Note

Una disolución de 10 mg/ml de ADNasa I en NaCl 0,15 M pierde un <10% de su actividad cuando se almacena durante una semana en alícuotas a −20 °C. Las mismas disoluciones conservadas en alícuotas a 2-8 °C pueden perder aproximadamente un 20 % de actividad. Permanece activa durante un máximo de cinco horas a 60 °C a un pH comprendido entre 5 y 7, y pierde actividad en <10 minutos a 68 °C. Pierde actividad a un ritmo de un 6%/hora en tampón acetato (pH 5,0) y tampón tris (pH 7,2) a una concentración de 1 mg/ml.

Analysis Note

Proteína determinada mediante Biuret

Información de seguridad

• pictograms: GHS08
• signalword: Danger
• hcodes: H334
• pcodes: P261 - P284 - P501
• Hazard Classifications: Resp. Sens. 1
• Storage Class: 11 - Combustible Solids
• wgk_germany: WGK 3
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable
• ppe: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)